液固壓縮技術(shù)增溶制劑中的葛根總黃酮

羅 丹， 李小芳， 余 琳， 羅麗佳， 冉茂蓮， 李 平， 李培培

（成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實驗室中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國家重點(diǎn)實驗室培育基地，四川　成都　610075）

液固壓縮技術(shù)增溶制劑中的葛根總黃酮

羅 丹， 李小芳*， 余 琳， 羅麗佳， 冉茂蓮， 李 平， 李培培

（成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實驗室中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國家重點(diǎn)實驗室培育基地，四川成都610075）

目的 運(yùn)用液固壓縮技術(shù)增加葛根總黃酮的溶出度，優(yōu)選最佳處方。方法 篩選液體賦形劑和載體，制備藥液比為1∶4，R值為20的葛根總黃酮液固壓縮片，將其與原料藥和市售片的溶出度進(jìn)行比較，通過差示掃描量熱分析考察藥物的晶型轉(zhuǎn)化。結(jié)果 液固壓縮片較原料藥和市售片的溶出度大幅度提高。優(yōu)選的最佳處方LS-3，以吐溫-80做液體賦形劑，微晶纖維素做載體，溶出50%時，僅需42.6s。差示掃描量熱分析表明液固壓縮片中主藥的特征峰消失。結(jié)論 液固壓縮技術(shù)可改善葛根總黃酮的溶出，快速釋藥，并將藥物從結(jié)晶狀態(tài)轉(zhuǎn)化為分子或無定形狀態(tài)。

液固壓縮技術(shù)；葛根總黃酮；溶出度；差示掃描量熱分析

液固壓縮技術(shù)（Liquisolid technique）又名溶液粉末化技術(shù)，將難溶性藥物懸浮或溶解在非揮發(fā)性液體賦形劑中，再與適宜的載體和涂層材料混合均勻轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂蟹丘ば浴⒘己昧鲃有院涂蓧盒缘母稍锓勰?］。目前，液固壓縮技術(shù)已運(yùn)用于法莫替丁、厄貝沙坦［2］、格列吡嗪［3］等西藥，對α-細(xì)辛腦［4］、熊果酸［5］等中藥難溶性有效成分液固壓縮片的研究也相繼有文獻(xiàn)報道。

葛根總黃酮為葛根的主要成分，包括葛根素、羥基葛根素、甲氧基葛根素、大豆苷等，主要用于治療心腦血管類疾病，如高血壓、高血脂、偏頭痛、冠心病、心肌梗塞、心絞痛、視網(wǎng)膜動脈阻塞、視網(wǎng)膜靜脈阻塞和突發(fā)性耳聾等癥［6］。然而，葛根總黃酮的主要成分葛根素的水溶性差，限制了其口服吸收，生物利用度低［7］。本實驗擬制備葛根總黃酮液固壓縮片，增加葛根總黃酮的溶出度，并探討其增溶速釋機(jī)制。

1　儀器與試藥

1.1儀器 BP61型十萬分之一電子天平（德國Satorius公司）；DP-I型單沖壓片機(jī)（上海中藥機(jī)械廠）；ZRS-8G智能溶出試驗儀（天大天發(fā)科技有限公司），UV-6000型紫外可見分光光度計（上海美譜達(dá)儀器有限公司）；SB-5200DT型超聲儀（功率200W，工作頻率40 kHz；寧波新芝生物科技股份有限公司）；DSC差示掃描量熱儀（北京恒久科學(xué)儀器廠）等。

1.2試藥 葛根總黃酮（總黃酮純度80.85%，西安飛達(dá)生物技術(shù)有限公司，批號FD20130912）；葛根素對照品（純度為98.0%，中國食品藥品檢定研究院，批號110752-200912）；1，2-丙二醇（PG，成都市科龍化工試劑廠）；聚乙二醇400（PEG400，成都市科龍化工試劑廠）；吐溫-80（成都市科龍化工試劑廠）；微晶纖維素PH-101（MCC，成都市科龍化工試劑廠）；乳糖（分析純，成都市科龍化工試劑廠）；可溶性淀粉（分析純，成都市科龍化工試劑廠）；微粉硅膠?200（成都市科龍化工試劑廠）；羧甲基淀粉鈉（成都市科龍化工試劑廠）；蒸餾水等。

2　方法與結(jié)果

2.1液固壓縮片的制備

2.1.1液固壓縮系統(tǒng)的數(shù)學(xué)模型［8］通過R值和藥液比兩個參數(shù)可計算出液固壓縮系統(tǒng)最佳的載體和涂層材料的用量，載體（Q）和涂層材料（q）能吸收一定的液體賦形劑，將載體材料（Q）吸收液體賦形劑（W）的最大量定義為液體負(fù)載因子（Lf）。載體材料和涂層材料的質(zhì)量比稱為R值，即：

φCA為載體對液體賦形劑的最大保留勢能，φCO為涂層材料對液體賦形劑的最大保留勢能，Lf又可由以下公式表示

φCA和φCO值為輔料的固有性質(zhì)，本實驗取PG、PEG400和吐溫-80的φCA、φCO值分別為0.16、3.31、0.005、3.26、0.0741、1.958［9-10］。

2.1.2液固壓縮片的處方 本實驗取葛根總黃酮10 mg，液體賦形劑40 mg，微粉硅膠?200作為涂層材料，選擇藥液比為1∶4，R值為20，篩選不同的液體賦形劑和載體。根據(jù)公式（1～3）分別計算出各個處方的Lf、Q、q值及崩解劑的用量及片質(zhì)量，結(jié)果見表1。

表1　葛根總黃酮液固壓縮片的處方參數(shù)值Tab.1 Excipients in liquisolid tabletsw ith total flavone from Puerariae Radix

2.1.3液固壓縮片的制備方法［11］精密稱取表1中的處方量，將葛根總黃酮于60℃下磁力攪拌加入液體賦形劑中，待藥物完全溶解在液體賦形劑中再連續(xù)加入載體，研缽研勻轉(zhuǎn)化為濕顆粒，再加入微粉硅膠?200，研勻得干燥粉末，最后加入5%的羧甲基淀粉鈉混勻，于干燥器中放置1 d，以單沖壓片機(jī)，直接粉末壓片，硬度控制在30～40 N。

2.2壓縮前評價［12-13］粉末的流動性和可壓性是影響液固粉末系統(tǒng)壓片的重要因素，可通過休止角、卡爾指數(shù)和豪斯納比對壓縮前的粉末流動性進(jìn)行評估。休止角體現(xiàn)粉末粒子間的摩擦和內(nèi)聚的特性，而卡爾指數(shù)和豪斯納比涉及粉末粒子間的摩擦，一般，休止角小于40°，卡爾指數(shù)小于25%，豪斯納比小于1.25，說明粉末流動性好。

2.2.1休止角的測定 采用固定漏斗法，將漏斗固定于水平放置的繪圖紙上方一定距離，漏斗下口距繪圖紙高度為H，均速將粉末倒入漏斗中，直到漏斗下形成的圓錐體尖端接觸到漏斗下口為止，測定圓錐體的直徑2R。計算休止角θ，每個樣品測3次，取平均值。

2.2.2卡爾指數(shù)和豪斯納比的測定 分別測定每個處方粉末的松裝密度ρa(bǔ)和振實密度ρp，根據(jù)公式（4）、（5）

分別計算其卡爾指數(shù)和豪斯納比，每個樣品測3次，取平均值，結(jié)果見表2。

表2　葛根總黃酮液固粉末系統(tǒng)的流動性（±s）Tab.2 Fluidity of total flavone from Puerariae Radix liquisolid tablets（±s）

表2　葛根總黃酮液固粉末系統(tǒng)的流動性（±s）Tab.2 Fluidity of total flavone from Puerariae Radix liquisolid tablets（±s）

處方θ/（°）卡爾指數(shù)/%豪斯納比LS-1 39.8±0.10 21.33±0.58 1.27±0.01 LS-2 42.6±0.79 31.32±1.15 1.46±0.02 LS-3 42.7±1.10 33.33±1.16 1.50±0.03 LS-4 43.9±0.17 39.35±0.56 1.65±0.02 LS-5 49.4±0.66 47.64±0.56 1.91±0.02

實驗結(jié)果表明：LS-1、LS-2、LS-3相對于LS-4、LS-5的休止角、卡爾指數(shù)和豪斯納比較小，為了得到流動性、可壓性好的粉末，故選擇MCC作載體。

2.3壓縮后評價［5］

2.3.1片質(zhì)量差異 根據(jù)《中國藥典》2010年版附錄ⅠD片劑［14］的方法進(jìn)行測定。取各片劑20片，分別精密稱定每片的質(zhì)量。每片質(zhì)量與標(biāo)示片質(zhì)量比較，標(biāo)示片質(zhì)量0.3 g以下的重量差異限度為±7.5%，0.3g以上限度為±5%，結(jié)果見表3。

2.3.2崩解時限 根據(jù)《中國藥典》2010年版一部附錄ⅫA崩解時限檢查法［14］中的片劑方法進(jìn)行測定。溫度37℃，取藥片6片分別置于吊籃的玻璃管內(nèi)，啟動崩解進(jìn)行測定。結(jié)果見表3。

表3　葛根總黃酮液固壓縮片的質(zhì)量評價Tab.3 Quality evaluation on liquisolid tablets w ith total flavone from Puerariae Radix

實驗結(jié)果表明：LS-4、LS-5黏沖，不利于壓片，片質(zhì)量差異不合格，而LS-1、LS-2、LS-3片質(zhì)量差異合格，片面光潔，故選擇MCC做載體。

2.4溶出度測定［15］

2.4.1對照品溶液的制備 取葛根素對照品適量，精密稱定，加蒸餾水超聲充分溶解，定容于50 mL量瓶中，制成每1 mL含0.245 4 mg葛根素的對照品溶液。

2.4.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密量取葛根素對照品溶液0.2、0.25、0.3、0.35、0.4、0.45、0.5 mL，置10 mL量瓶中，加蒸餾水定容，充分搖勻，在250 nm波長處測吸光度。以葛根素質(zhì)量濃度（ρ）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程A=0.075 4ρ-0.008 2，r=0.999 5。結(jié)果表明，葛根素在4.908～12.27 μg/mL內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.4.3溶出度測定方法 采用《中國藥典》2010年版二部附錄ⅩC溶出度測定法［14］中的漿法對LS-1、LS-2、LS-3、原料藥和市售片（愈風(fēng)寧心片）的溶出度進(jìn)行測定。轉(zhuǎn)速為100 r/min，溫度為37℃，以900 mL超聲脫氣蒸餾水作溶出介質(zhì)。取片劑各6片投入溶出杯內(nèi)，分別于1、3、5、10、20、30、60 min取樣10 mL，經(jīng)孔徑0.8μm濾膜過濾，取續(xù)濾液，得樣品溶液。同時補(bǔ)充等體積等溫度的新鮮介質(zhì)，操作在30 s內(nèi)完成。根據(jù)“2.4.2”項下方法測定，結(jié)果見圖1。將液固壓縮片、原料藥及市售片的溶出時間數(shù)據(jù)分別進(jìn)行威布爾函數(shù)擬合，計算溶出參數(shù)Td和T50，結(jié)果見表4。

圖1　藥物的溶出曲線Fig.1 Drug's dissolution curve

表4　體外溶出W eibull函數(shù)擬合參數(shù)Tab.4 W eibu ll fitting of in vitro dissolution

實驗結(jié)果表明，葛根總黃酮液固壓縮片的溶出度明顯優(yōu)于原料藥和市售片，其中液固壓縮片LS-3的溶出度明顯優(yōu)于LS-1、LS-2，故選擇吐溫-80作液體賦形劑。

2.5差式掃描量熱分析（DSC）［16］分別取葛根素、液固粉末系統(tǒng)、物理混合物和液固空白輔料為樣品，以10℃/min的掃描速率，在掃描范圍25～350℃溫度內(nèi)掃描，進(jìn)樣量分別為葛根素5.000 mg，液固粉末系統(tǒng)3.100 mg，物理混合物5.100 mg，液固空白輔料5.2 mg，結(jié)果見圖2。

由圖2A可知葛根素分別在209.2℃和230.5℃有兩個尖銳的特征峰，表明葛根素以結(jié)晶的狀態(tài)存在。圖2B中在209.2℃和230.5℃處無特征峰，表明液固空白輔料對主藥無干擾。圖2C中受輔料量的影響，葛根素峰有所下降，但仍在209.2℃和230.5℃處有其特征峰，說明藥物仍以結(jié)晶的狀態(tài)存在。由圖2D和圖2A可知，在液固粉末系統(tǒng)中葛根素的特征峰消失，說明藥物在液固壓縮片中以分子或者無定形狀態(tài)存在。

3　討論

液固壓縮技術(shù)是一種有前途的、能提高難溶性藥物溶出度的新技術(shù)，可很好地提高葛根總黃酮的溶出度。優(yōu)選的LS-3液固壓縮片中，葛根總黃酮快速釋放，溶出50%時，液固壓縮片僅需42.6 s，而原料藥和市售片需9.4 min和15.89 min。

圖2　差示掃描量熱分析曲線Fig.2 Curves from differential scanning calorimeter

液固壓縮技術(shù)增溶的機(jī)制可能是液體賦形劑增加了藥物的溶解度。液固壓縮片中所選的液體賦形劑均為良好的助溶劑，其中葛根總黃酮在吐溫-80中的溶解度最大［17］，能很好地降低表面張力，提高藥物粒子的潤濕性，使水分子借助毛細(xì)管作用深入到片劑的內(nèi)部，使其快速崩解。

液固壓縮技術(shù)增溶的機(jī)制也可能是載體和涂層材料增加了藥物溶出有效表面積。由DSC圖可知液固壓縮技術(shù)能使藥物從結(jié)晶狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榉肿踊蛘邿o定形狀態(tài)。因為載體和涂層材料為多孔材料，具有很強(qiáng)的吸附性，能充分吸附呈分子分散于吐溫-80中的藥物。當(dāng)液固壓縮片崩解時，增大了溶出有效表面積，使得藥物快速釋放。

液固壓縮技術(shù)增溶的機(jī)制還有可能是增加了藥物粒子潤濕性。由崩解時限結(jié)果可知，LS-3的崩解僅需要1.28 min，這可能與吐溫-80改善藥物粒子的潤濕性有關(guān)。

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Liquisolid technique solubilizes the total flavone from Puerariae Radix preparations

LUO Dan， LIXiao-fang*， YU Lin， LUO Li-jia， RAN Mao-lian， LIPin， LIPei-pei
（School of Pharmacy，Chengdu Uniυersity of Traditional Chinese Medicine；Key Laboratory of the Ministry of Education for Standardization of Chinese Herbal Medicine；State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research，Deυelopment and Utilization of Chinese Medicine Resources，Chengdu 611137，China）

liquisolid technique；total flavone from Puerariae Radix；dissolution；differential scanning calorimeter

R944

A

1001-1528（2015）03-0522-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.03.013

2014-05-24

四川省教育廳重點(diǎn)項目（12ZA042）；成都中醫(yī)藥大學(xué)科技發(fā)展基金（ZRMS201240）

羅 丹（1989—），女，碩士生，研究方向為中藥新劑型及新技術(shù)。Tel：13438024307，E-mail：929145900@qq.com

李小芳（1964—），女，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向為中藥新劑型及新技術(shù)。Tel：13808195110，E-mail：lixiaofang918 @163.com