電子攝像技術(shù)在豚鼠全身主動過敏試驗中的應(yīng)用

顧筠瑩，印慧聰，盛佳妮，俞銘華，蔣婉娟，李　英，朱根麟

（上海和黃藥業(yè)有限公司，上海200331）

電子攝像技術(shù)在豚鼠全身主動過敏試驗中的應(yīng)用

顧筠瑩，印慧聰，盛佳妮，俞銘華，蔣婉娟，李英，朱根麟

（上海和黃藥業(yè)有限公司，上海200331）

目的研究在豚鼠全身主動過敏試驗引入電子攝像（動態(tài)）技術(shù)及其適用性。方法以豚鼠全身主動過敏試驗激發(fā)后過敏反應(yīng)階段，作為電子攝像內(nèi)容，進行電子攝像（動態(tài)）記錄、比較分析。 結(jié)果初步建立電子攝像技術(shù)，記錄豚鼠全身主動過敏試驗激發(fā)后的過敏反應(yīng)，可以對豚鼠激發(fā)后過敏反應(yīng)的各種癥狀進行動態(tài)觀察、分析，還對人工記錄和電子攝像記錄進行比較，分析了兩種記錄特點。 結(jié)論在豚鼠全身主動過敏試驗引入電子攝像（動態(tài)）技術(shù)可以對原試驗記錄（人工觀察）進行補充、完善。將兩者相結(jié)合，能夠得到更真實、客觀、完整、有效的試驗原始記錄。

豚鼠；過敏試驗；電子攝像技術(shù)

豚鼠全身主動過敏試驗，是指我國現(xiàn)行版藥典收載的檢測注射類藥物制劑過敏反應(yīng)的經(jīng)典試驗方法［1］。其對過敏性反應(yīng)的評定方法，主要是采用肉眼觀察和記錄受試動物在靜脈注射供試品溶液后30 min內(nèi)所表現(xiàn)出的全身過敏反應(yīng)癥狀，按照全身致敏性的評價（判定）標(biāo)準(zhǔn)對其進行過敏陽性或陰性的評價（判定）。作者在長期使用該方法評價中藥注射劑過敏試驗后發(fā)現(xiàn)，該方法評價（判定）的主觀因素較強，存在一定個體觀察和評價（判定）上的差異，從而不可避免地對試驗結(jié)果（結(jié)論）判定準(zhǔn)確性和可靠性也產(chǎn)生一定的影響。為此，作者引入電子攝像技術(shù)對豚鼠全身主動過敏試驗中激發(fā)后的過敏反應(yīng)階段進行全程記錄，發(fā)現(xiàn)其對實驗過程記錄的全面性、客觀性、試驗結(jié)果評價、試驗結(jié)論判定的可靠性以及可追溯性均有不可替代的優(yōu)越性。本文就該方法進行簡要介紹。

1　材料與方法

1.1電子攝像設(shè)備

云監(jiān)控DCS-930L無線網(wǎng)絡(luò)攝像機，友訊電子設(shè)備（上海）有限公司生產(chǎn)，UPC Code7-9006934272-1。

1.2電腦設(shè)備

電腦配置最低系統(tǒng)要求（臺式機）: Intel或AMD雙核CPU 1.3 GHz或更高；128 MB/512 MB內(nèi)存；200 MB以上硬盤空間；使用線纜或ADSL Internet服務(wù)或具有以太網(wǎng)端口的DSL調(diào)制解調(diào)器。在安裝前，確認具備以太網(wǎng)線，電腦安裝有Windows XP或Vista與IE 6以上版本的瀏覽器并開啟了Active X 控制功能。

1.3電腦視頻觀察（記錄）方法

用攝像設(shè)備對準(zhǔn)豚鼠觀察籠盒，打開電腦，登陸D-Link操作系統(tǒng)，點擊“開始”按鍵，電腦屏幕實時出現(xiàn)在靜脈注射供試品溶液30 min內(nèi)豚鼠活動（行為體征、表現(xiàn)癥狀）的畫面。

1.4動物

普通級豚鼠，體質(zhì)量250～350 g，由上海市松江區(qū)車墩實驗動物良種場提供［SCXK（滬）2012-0008］，在本公司動物實驗室飼養(yǎng)并進行實驗［SYXK（滬）2012-0009］。

1.5藥物

（1）生脈注射液，為上海和黃藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，若干批號。（2）卵蛋白: Albumin，from chicken egg white CAS:9006-59-1，Pcode:1000453006，Produce of USA，使用濃度為0.7 mg/mL。（3）生理鹽水: 為上海長征富民金山制藥有限公司產(chǎn)品，若干批號。

1.6過敏試驗方法

取豚鼠6只，體質(zhì)量250～350 g，♀♂不拘，隔日每次腹腔注射供試品溶液0.5 mL/只，共3次；然后分為兩組，每組3只，分別在首次注射后14 d 及21 d，再由靜脈注射供試品溶液1.0 mL/只進行激發(fā)，觀察靜脈注射后30 min內(nèi)，豚鼠有無過敏反應(yīng)癥狀，以判定供試品是否引起動物全身過敏反應(yīng)。在結(jié)果判斷，靜脈注射供試品溶液30 min內(nèi)，不得出現(xiàn)過敏反應(yīng)。如在同一只動物上出現(xiàn)豎毛、發(fā)抖、干嘔、連續(xù)噴嚏3 聲、連續(xù)咳嗽3聲、紫癜和呼吸困難等現(xiàn)象中的2 種或2 種以上，或出現(xiàn)大便、小便失禁、步態(tài)不穩(wěn)或倒地、抽搐、休克、死亡現(xiàn)象之一者，判定供試品不符合規(guī)定［1］。陰性組（生理鹽水）3只相同方法處理。

2　結(jié)果

2.1電子攝像裝置的建立

在豚鼠靜脈注射供試品溶液后，放入觀察盒內(nèi)，盒上方安裝電子攝像裝置，觀察、記錄30 min內(nèi)動物（過敏反應(yīng)）癥狀或體征（圖1）。

2.2生脈注射液過敏反應(yīng)電子記錄（動態(tài)）截圖

從圖2可以清楚看到其中1只豚鼠正出現(xiàn)搔鼻行為癥狀。在動態(tài)視頻里，明顯可見豚鼠出現(xiàn)搔鼻、或咳嗽等這些弱陽性過敏反應(yīng)癥狀。

2.3卵蛋白過敏反應(yīng)電子記錄（動態(tài)）截圖

從圖3可以看到卵蛋白（陽性）組的3只豚鼠均出現(xiàn)了強陽性反應(yīng)過敏癥狀（死亡）。在視頻里，可以看到豚鼠分別出現(xiàn)了大、小便失禁或步態(tài)不穩(wěn)或倒地、或抽搐、直到死亡一系列強陽性反應(yīng)過敏癥狀的整個動態(tài)過程。

圖 1　電子攝像探頭在圖的左上方位置

圖 2　生脈注射液激發(fā)后的過敏反應(yīng)動態(tài)截圖

圖 3　陽性組（卵蛋白）激發(fā)后的過敏反應(yīng)動態(tài)截圖

圖 4 陰性組（生理鹽水）激發(fā)后的過敏反應(yīng)動態(tài)截圖

2.4生理鹽水過敏反應(yīng)電子記錄（動態(tài)）截圖

從圖4可以看到生理鹽水（陰性）組的3只豚鼠在激發(fā)后的正常行為、癥狀。在動態(tài)視頻里，陰性組豚鼠的正常行為體征、表現(xiàn)癥狀更為明顯。

3　討論

依據(jù)現(xiàn)行版藥典收載過敏反應(yīng)檢查法的要求，豚鼠全身主動過敏反應(yīng)系將一定量的供試品溶液注入豚鼠體內(nèi)，間隔一定時間后靜脈注射供試品溶液進行激發(fā)，觀察動物出現(xiàn)過敏反應(yīng)的情況，以判定供試品是否引起動物全身過敏反應(yīng)［1］。供試品不合格表明注射劑含有過敏反應(yīng)物質(zhì)，臨床用藥時可能使患者致敏或產(chǎn)生過敏反應(yīng)，引起嚴(yán)重不良反應(yīng)［2］。在藥物臨床安全性評價中，對藥物致敏性的關(guān)切和研究報道已受到社會日益廣泛的重視，尤其是中藥注射液的安全性問題。基于我國藥典頒布豚鼠全身主動過敏反應(yīng)檢查法中可能出現(xiàn)影響試驗結(jié)果的因素，對此法在執(zhí)行過程中，已有眾多學(xué)者提出了各自關(guān)切的內(nèi)容。主要關(guān)注過敏反應(yīng)與劑量相關(guān)性；藥典收載的豚鼠過敏試驗方法是否能嚴(yán)格控制藥品的安全性［3］；再次激發(fā)對過敏反應(yīng)發(fā)生率的影響［4］；豚鼠全身主動過敏試驗皮下注射激發(fā)結(jié)果；一定劑量范圍內(nèi)，豚鼠全身過敏反應(yīng)的發(fā)生率；試驗的劑量設(shè)計和給藥途徑等［5-8］。目前尚未見到有關(guān)用電子攝像技術(shù)對豚鼠過敏試驗進行動態(tài)記錄的相關(guān)報道。作者在工作中發(fā)現(xiàn)，藥典收載過敏反應(yīng)檢查法，在觀察激發(fā)后30 min內(nèi)動物有無過敏反應(yīng)癥狀［1］中，存在較強的主觀性或差異性。而在動物試驗中減少、避免主觀因素或個體差異對試驗結(jié)果、試驗結(jié)論準(zhǔn)確性、精確性的影響，具有重要意義。為此本研究對藥典頒布豚鼠全身主動過敏反應(yīng)檢查法引入電子攝像技術(shù)及該技術(shù)的適用性進行了初步探討。

本研究結(jié)果表明，用電子攝像對豚鼠過敏試驗反應(yīng)癥狀的（動態(tài)）觀察，可以將每組豚鼠激發(fā)后的過敏反應(yīng)癥狀，如實記錄（動態(tài)視頻、動態(tài)音頻）。本文列舉圖例是動態(tài)視頻里的截圖，沒有實際觀察視頻中的動感，但可以反映動態(tài)視頻里典型一幕。

對激發(fā)后過敏反應(yīng)癥狀的觀察，人工記錄容易受到人為因素干擾影響，即存在人為觀察的主觀性及不同人之間觀察的差異性，且試驗后容易遺忘；試驗結(jié)束（豚鼠處死）后，僅憑人工觀察記錄，供試驗結(jié)論的判定及日后追溯。還有人工觀察注意力是否能保持集中30 min，有易受情緒、或心情等多方面因素影響而出現(xiàn)遺漏或記錄不全等情況。

電子攝像記錄中沒有受到人工觀察后會遺忘的因素影響，可以長期保存且可以再現(xiàn)激發(fā)后反應(yīng)癥狀的真實動態(tài)畫面，可以明顯補充人工記錄的不足或在追溯記錄時對紙質(zhì)（人工觀察）原始記錄予以確認、修正甚至糾正等。用電子攝像記錄，不是要取代原試驗記錄（人工觀察），而是對其補充、完善。將兩者記錄相結(jié)合，能夠得到更真實、客觀、完整、有效的試驗原始記錄。

如果有條件，在目前電子攝像記錄的基礎(chǔ)上，進一步完善，可能效果會更理想。比如在激發(fā)后，電子攝像記錄不是用一只電子攝像探頭對準(zhǔn)一組（3只）豚鼠，而是用一只電子攝像探頭對準(zhǔn)一只豚鼠，進行攝像（專一）記錄。這樣做可以在視野等方面都會有很大的提高。

作為對注射劑的藥理檢驗項目，尤其是在中藥注射劑的過敏反應(yīng)試驗，建立用電子攝像對豚鼠過敏試驗進行動態(tài)觀察方法，對記錄結(jié)果分析、結(jié)論準(zhǔn)確有重要意義。

［1］中華人民共和國藥典，二部［S］. 2010年版，附錄ⅩⅢ G 過敏反應(yīng)檢查法.

［2］中華人民共和國藥典，二部［S］. 2010年版，附錄ⅩⅧ B 中藥注射劑安全性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則.

［3］張德波，蒲旭峰，楊奎. 豚鼠過敏試驗方法探討［J］. 中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2009，10（2）:112-116.

［4］管志英，張德波. 豚鼠過敏試驗影響因素探討［J］. 成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2013，8（6）:647-650.

［5］張建強，施虹，顧性初. “豚鼠全身主動過敏試驗”以皮下注射途徑激發(fā)結(jié)果［J］.中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2013，27（3）:534.

［6］鄭智勇，李莉，趙晉，等. 不同致敏和激發(fā)劑量對豚鼠主動全身過敏試驗結(jié)果的影響［J］. 中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2013，27（3）:540.

［7］單曉蕾，張素才，孫云霞.豚鼠給予疫苗的速發(fā)型全身主動過敏反應(yīng)［J］. 中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2013，27（3）:518-519.

［8］翁謝川，樊星，王青秀，等. 藥物安全性評價中豚鼠全身過敏試驗方法的研究［J］. 中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2012，22（5）: 51-55.

Q95-33

B

1674-5817（2015）03-0227-03

10.3969/j.issn.1674-5817.2015.03.010

2014-09-01

顧筠瑩（1982-），女，本科，從事實驗動物和藥理實驗研究，E-mail: gujunying718@163.com

朱根麟（1956-），男，高級工程師，從事實驗動物和藥理實驗研究，E-mail: glzhu@shpl.com.cn