探討中西藥合用對帕金森病大鼠神經(jīng)細胞凋亡的影響

郭欣桐

(河北大學臨床醫(yī)學院 河北 保定 071000)

帕金森病屬于中老年人群的常見神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，主要的發(fā)病人群在60歲以上。臨床上中西藥聯(lián)合應用在帕金森病臨床中得到了廣泛的應用［1］。本組試驗對中西藥合用對帕金森病大鼠神經(jīng)細胞凋亡的影響進行探討，具體報告內(nèi)容如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選擇90只成年健康SD大鼠，雌雄不限，將成年的90只健康SD大鼠隨機分為3組，即模型組、中西藥治療組、正常對照組。每組有30只健康SD大鼠。體重在130－200克之間，平均體重為(183.25±1.38)克，主要由上海中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供。將大鼠飼養(yǎng)環(huán)境的溫度控制在20攝氏度左右，濕度控制在50%左右，需要光照12小時交替，大鼠可以自由進食和飲水。

1.2 方法

藥品和試劑:中藥包括湯藥和膠囊，湯藥的主要成分有枸杞子、熟地、桑寄生、僵蠶、莪術、白芍、丹參。并由專門醫(yī)院制劑室制備。膠囊主要選擇蝎蜈膠囊。按照比例將蝎蜈膠囊混合于中藥里，將濃度控制為3.005 g/ml。備用藥物有左旋多巴(國藥準字H11020244北京斯利安藥業(yè)有限公司)、鹽酸氯胺酮(國藥準字H23020559齊齊哈爾第二制藥有限公司)、6－羥基多巴胺、二氨基聯(lián)苯胺。儀器主要包括大鼠腦立體定位儀、光學顯微鏡、振動切片機、微量進樣器。

術前腹腔注射氯胺酮，將大鼠固定在腦立體定位儀上。在無菌的情況下，將大鼠顱頂皮膚正中線切開，將前囟暴露出來。確定右側(cè)黑質(zhì)2個坐標后，采用顱骨鉆于手術鉆開顱骨，注入5 ul的6－羥基多巴胺于右側(cè)黑質(zhì)部。手術完成后，縫合皮膚，肌肉注射慶大霉素，通過注射阿樸嗎啡，觀察大鼠的旋轉(zhuǎn)情況。

分組干預:對于模型組，主要灌胃2 ml的生理鹽水，中西藥治療組主要服用2 ml的中西藥混懸液，每天服用1次，共服用一個月。

電鏡檢查:切取黑質(zhì)的1mm2，使用戊二醛、鋨酸進行雙重固定，同時完成乙醇脫水，環(huán)氧樹脂的包埋、切片、鉛染后，在透射的電鏡下對其進行觀察。

1.3 統(tǒng)計學處理

本次研究中，選擇統(tǒng)計學軟件SPSS15.0完成臨床數(shù)據(jù)分析，其中計數(shù)資料以n/%形式表示，采用卡方(X2)對檢驗，計量資料以()形式表格，采用(t)檢驗，如P＜0.05，則表示差異有統(tǒng)計學意義。

2.結(jié)果

2.1 凋亡檢測

通過對神經(jīng)細胞凋亡的數(shù)量進行研究，結(jié)果顯示模型組神經(jīng)細胞凋亡數(shù)量多于正常對照組，與模型組對比，中西藥聯(lián)合實驗組相對較少，并單個分布。

表1 黑質(zhì)細胞凋亡的數(shù)量對比()

表1 黑質(zhì)細胞凋亡的數(shù)量對比()

2.2 神經(jīng)細胞電鏡觀察

模型組:細胞存在明顯的皺縮現(xiàn)象，細胞體積明顯減小，核膜部分出現(xiàn)不完整現(xiàn)象。中西醫(yī)治療組:細胞膜稍微有皺縮情況，胞漿減小，同時電子的密度稍微有增高的現(xiàn)象，核膜完整。正常對照組:細胞體積正常、電子密度沒有變化，核膜完整。

3.討論

帕金森病主要病理的過程是腦黑質(zhì)致密帶多巴胺能神經(jīng)元的不斷缺失和變性的變化過程。帕金森病主要的特征是黑質(zhì)紋狀體神經(jīng)元受到損害。在通常情況下，黑質(zhì)部位的氧化與抗氧化之間處于平衡狀況，隨著年齡的不斷增加，同時在很多外在因素的影響下，可形成大量的氧自由基，在這樣的情況下，將促進多巴胺能神經(jīng)元變性，并逐漸死亡，通常這種死亡的方式被稱為細胞凋亡。大量研究顯示黑質(zhì)是多巴胺能神經(jīng)元凋亡的機制之一，在當前細胞凋亡的檢測過程中存在很多檢測方法，如電泳、原位末端標記法、電鏡等，目前區(qū)別凋亡與壞死可靠的方法是透射電鏡［2－3］。

在本組實驗組中，將健康SD大鼠進行分組，并對細胞凋亡的形態(tài)進行分析，中西藥治療組中，同樣可以檢測到凋亡細胞，將其凋亡細胞數(shù)量與模型組對比，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，同時期為單個散落分布。因此可推測，中西藥聯(lián)合使用在抗神經(jīng)細胞凋亡方面發(fā)揮著重要的作用，同時期與抗氧化應激反應存在著密切的聯(lián)系［4－5］。

［1］方永奇，匡忠生，謝宇輝，等.石菖蒲對缺血再灌注腦損傷大鼠神經(jīng)細胞凋亡的影響［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，28(17):1647－1649.

［2］丁宏娟，何建成.滌痰湯對帕金森病大鼠神經(jīng)細胞凋亡及相關基因表達的影響［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2010，38(04):740－742.

［3］何建成，袁燦興，衛(wèi)洪昌，等.中西藥合用對帕金森病大鼠旋轉(zhuǎn)行為的影響［J］.中西醫(yī)結(jié)合學報，2013，26(04):293－295.

［4］何建成，袁燦興，衛(wèi)洪昌，等.美多芭對帕金森病大鼠細胞凋亡的影響［J］.中華老年醫(yī)學雜志，2014，11(07):52－54.

［5］何建成，衛(wèi)洪昌，呂嶸，等.中西藥合用對帕金森病大鼠細胞調(diào)亡、酪氨酸羥化酶及其基因表達的影響［A］.中國中西醫(yī)結(jié)合學會.第三屆世界中西醫(yī)結(jié)合大會論文摘要集［C］.中國中西醫(yī)結(jié)合學會，2012:2－7.