Cx43、PTEN在卵巢上皮性腫瘤組織中的表達及臨床意義

張 妍，張舵舵，2，楊澤成，王 瑩，冷維春＊

（1.吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院，吉林 長春130033；2.吉林大學第一醫(yī)院；3.吉林大學第二醫(yī)院；4.內(nèi)蒙古包鋼第三職工醫(yī)院）

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)腫瘤中死亡率最高的腫瘤，由于卵巢組織的解剖與內(nèi)分泌的復雜性使卵巢癌的早期診斷極為困難因此，尋找卵巢惡性腫瘤早期診斷指標已經(jīng)成為研究熱點。間隙連接蛋白43（connexin 43，Cx43）為一種細胞間隙連接蛋白，多種腫瘤細胞中都有間隙連接蛋白43表達的下降與缺失［1］。同源磷酸酶－張力蛋白（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten，PTEN）為第10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源的基因，位于10q23.3，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為515kb mRNA，PTEN異常表達與一些腫瘤細胞的生物學行為密切相關，因此在許多腫瘤中出現(xiàn)其高突變率和功能缺失［2］。本實驗研究采用免疫組化方法檢測卵巢上皮性腫瘤組織中間隙連接蛋白43與的同源磷酸酶－張力蛋白表達狀況，探討其與卵巢惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關系 為卵巢惡性腫瘤的早期診治及其預后判斷提供科學的實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 組織標本

選取本院116例卵巢腫瘤患者手術切除的組織標本，年齡在36－78歲之間，平均年齡48歲，其中正常組織20例、良性組織20例、交界性腫瘤20例、上皮性腫瘤組織56例（患者病例術前均未行其它治療，亦未合并其它系統(tǒng)惡性腫瘤）。根據(jù)FIGO標準將卵巢上皮性腫瘤標本分類：臨床分期Ⅰ、Ⅱ期26例Ⅲ、Ⅳ期30例；組織病理學分級G1 16例G2 12例G3 28例；組織學類型卵巢漿液性囊腺癌25例與非漿液性囊腺癌31例。術后所有切片均經(jīng)病理學專家盲法認定。

1.2 免疫組織化學法

試劑兔抗人Cx43單抗與鼠抗人PTEN單抗免疫組化染色試劑組盒，購自美國Sigma生物公司。非生物素檢測（No Biotin Polymer－HRP）試劑盒購自cell signaling公司，免疫組化染色嚴格按照操作規(guī)范進行。

1.3 結(jié)果判定及分析

染色結(jié)果判定參照文獻［6］方法觀察Cx43和PTEN蛋白的分布、陽性強度與陽性率。

1.4 統(tǒng)計學方法

用SPSS14.0for windows統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計分析。用χ2檢驗作相關性分析，結(jié)果以P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 間隙連接蛋白43在上皮性癌組織（陽性率46.4%）與正常組織（陽性率85%）比較差異有顯著性（P＜0.05），在上皮性癌組織（陽性率46.4%）與良性上皮性腫瘤組織（陽性率80%）、交界性上皮性腫瘤組織（陽性率65%）比較差異均有顯著性 （P＜0.05），正常組織與良性腫瘤組比較差異無顯著性（P＞0.05）（Table.l）。

Table.1 Expression of Cx43in epithelialal ovarian tumor

2.2 同源磷酸酶－張力蛋白在上皮性癌組織（陽性率51.8%）與正常組織（陽性率90%）比較差異有顯著性（P＜0.05），上皮性癌組織（陽性率51.8%）與卵巢良性上皮性腫瘤組織（陽性率90%）、交界性上皮性腫瘤組織（陽性率70%）比較差異均有顯著性（P＜0.05），正常組織與良性腫瘤組比較差異無顯著性（P＞0.05）（Table.2）。

Table.2 Expression of PTEN in epithelialal ovarian tumor

圖1 Cx43－卵巢組織陽性表達－10×40

圖2 PTEN－卵巢組織陽性表達－10×40

2.3 Cx43蛋白的表達與臨床參數(shù)間的關系

Cx43在28例病理分級為G1－G2組中，陽性23例（82.1%）與28例病理分級為G3組中，陽性10例（35.7%），兩組比較差異有顯著性（P＜0.05）；在26例臨床分期Ⅰ、Ⅱ期組中，陽性為25例（96.2%）與30例Ⅲ、Ⅳ組中，陽性為14例（46.7%），兩組比較差異有顯著性（P＜0.05）；在卵巢上皮性腫瘤組織中的陽性表達率與腫瘤組織類型無關，卵巢漿液性囊腺癌與非漿液性卵巢囊腺癌比較，兩組差異無顯著性（P＞0.05）。（Table.3）

2.4 PTEN蛋白的表達與臨床參數(shù)間的關系

PTEN蛋白在28例病理分級為Gl－G2組中，陽性為22例（78.6%）與28例病理分級G3組中，陽性為11例（39.3），兩組比較差異有顯著性（P＜0.05）；在26例臨床分期Ⅰ、Ⅱ期組（陽性率為100%）和30例臨床分期Ⅲ、Ⅳ組（陽性率43.3%），兩組比較差異有顯著性（P＜0.05）；在卵巢上皮性腫瘤組織中的陽性表達率與腫瘤組織類型無關，卵巢漿液性囊腺癌與非漿液性卵巢囊腺癌比較，兩組差異無顯著性（P＞0.05）。（Table.4）

Table.3 Correlation of expression of Cx43to clinicopathologic factors in ovarian cancer

Table.4 Correlation of expression of PTEN to clinicopathologic factors in ovarian cancer

3 討論

3.1 Cx43在卵巢上皮性腫瘤組織中的表達及意義

縫隙連接（gap junction，GJ）是細胞間的一種重要連接方式，通過縫隙連接（connexin）相互接觸形成的一個僅2－3nm的細胞間隙［3］。細胞通過縫隙連接進行信息、能量和電信號的傳遞調(diào)控細胞的生長。間隙連接蛋白43是人體中一種重要的縫隙連接蛋白，在卵巢顆粒細胞、心肌組織、成纖維細胞、上皮細胞等多種組織都有表達，參與機體的許多病理生理過程，其分布異常與多種疾病有密切關系，研究表明，在多種腫瘤細胞如乳腺癌、肝癌、宮頸癌組織中均有不同程度的間隙連接蛋白43表達下降或缺失，其表達水平與腫瘤的組織分化程度及預后密切相關［4，5］。本研究結(jié)果顯示間隙連接蛋白43在上皮性卵巢癌中的表達明顯低于正常組織﹑良性腫瘤（P＜0.05），這與胡葉青等［6］的研究結(jié)果基本一致。間隙連接蛋白43在上皮性卵巢癌表達隨著卵巢上皮性腫瘤細胞分化程度的下降，其表達明顯降低，惡性程度越高，Cx43表達陽性率下降越顯著，且與臨床分期有關在臨床分期為Ⅰ－Ⅱ期的表達陽性率高于Ⅲ－Ⅳ期（P＜0.05）即晚期卵巢上皮性癌，Cx43表達陽性率下降更顯著。由此可以推論間隙連接蛋白43表達下降與機體對細胞的監(jiān)督、調(diào)控能力減弱相關，Cx43失活與卵巢上皮性癌的發(fā)生、發(fā)展關系密切。

3.2 PTEN在卵巢上皮性腫瘤組織中的表達及意義

同源磷酸酶－張力蛋白為第10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源的基因，位于10q23.3，由9個外顯子和8個內(nèi)含子組成，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為515kb mRNA［7］。其氨基酸序列符合蛋白酪氨酸磷酸酶催化區(qū)的核心序列，主要參與細胞生長調(diào)節(jié)，并在腫瘤細胞浸潤、腫瘤轉(zhuǎn)移中具有重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)同源磷酸酶－張力蛋白可以阻斷了PKB/Akt信號通路發(fā)揮抑癌作用［8］。本研究結(jié)果表明，同源磷酸酶－張力蛋白在上皮性卵巢癌中的表達明顯低于正常組織﹑良性腫瘤，且與組織學分級和臨床分期有關（P＜0.05），惡性程度越高，PTEN表達越低。本實驗結(jié)果與國內(nèi)外大多數(shù)學者的研究結(jié)果一致。提示PTEN異常表達所產(chǎn)生的作用可能是構成卵巢癌組織分化程度的分子基礎。說明PTEN的缺失可能是卵巢癌發(fā)生、發(fā)展的重要機制之一。

［1］Solan JL，Lampe PD.Connexin43phosphorylation：structural changes and biological effects［J］.Biochem J，2009，419（2）：261.

［2］Song MS，Carracedo A，Salmena L，et al.Nuclear PTEN regulates the APC－CDH1tumor－suppressive complex in a phosphatase－independent manner［J］.Cell，2011，144：187.

［3］Simon KW，Roberts PC，Vespremi MJ.Regulation of beta－catenin and connexin－43expression：targets for sphingolipids in colon cancer prevention［J］.Mol Nutr Food Res，2009，53（3）：332.

［4］Murray SA，Davis K，F(xiàn)ishman LM，et al.Alpha connexin43 gapjunction are decreased in human adrenocortical tumors［J］.J Clin EndocrinolMetab，2000，85（2）：890.

［5］McLachlan E，Shao Q，Laird DW.Connexins and gap junctions inmammary gland development and breast cancer progression［J］.Membr Biol，2007，218（1－3）：107.

［6］胡葉青，劉元嬌.Cx43、Skp2在卵巢上皮性腫瘤組織中的表達及臨床意義［J］.癌癥，2005，24（1）：104.

［7］Roy S，Yu Y，Padhye S.SB，et al.Difluorinated－Curcu－mim（CDF）Restores PTEN Expression in Colon Cancer Cells by Down－Regulating miR－21［J］.PLos ONE，2013，8（7）：e68 543.

［8］Perry JM，He XC，Sugimura R，et al.Cooperation between both wnt/b－catenin and PTEN/PI3K/Akt signa－ling promotes p－renewal and expansion［J］.Genes DeV，2011，25：1928.