腦出血患者血腫周圍組織IL－17與NF－κBp65的表達(dá)及意義

畢 勝，楊 麗，劉 群，范 佳，李 冬，王李鳴，趙巖巖，關(guān)雪蓮，侯麗淳，田嘉瑩，王增冕，李曉濤，李培育＊

（1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯154002；2.大慶龍南醫(yī)院，黑龍江 大慶163000；3.吉林大學(xué)白求恩第一醫(yī)院，吉林 長春130021；4.吉林大學(xué)白求恩第二醫(yī)院，吉林 長春130041）

腦出血是一種常見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，嚴(yán)重影響人類健康。多種機(jī)制參與腦出血后的炎癥反應(yīng)及組織損傷。IL－17是一種重要的細(xì)胞因子，在自身免疫病等多種疾病中發(fā)揮重要作用。已有研究證實(shí)，IL－17A/NF－κB通路存在于多種細(xì)胞中，IL－17A 通過激活下游 NF－κB發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)［1，2］。本研究擬通過檢測腦出血血腫周圍組織IL－17及NF－κBp65的表達(dá)，探討IL－17/NF－κBp65通路在腦出血血腫周圍組織炎性反應(yīng)中的作用。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

RT－PCR試劑盒，上海普邁生物科技有限公司；PCR引物，上海生工生物工程有限公司；核蛋白提取試劑盒，大連寶生物工程有限公司；

1.2 實(shí)驗(yàn)分組

選取2013年1月至2014年12月期間我院神經(jīng)外科收治的腦出血患者，共48例。按發(fā)病距手術(shù)取材時間分為4組，分別為≤6h組、6－24h組、24－72h組和＞72h組，每組12例標(biāo)本。血腫旁1cm左右腦組織作為實(shí)驗(yàn)組，另選取手術(shù)入路中遠(yuǎn)離血腫的腦組織6例作為對照組。所有病例均符合腦出血的診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］。

1.3 取材及實(shí)驗(yàn)方法

全部標(biāo)本均以液氮凍存。RT－PCR法檢測IL－17mRNA的表達(dá)；Western blot法檢測 NF－κBp65核蛋白的表達(dá)；

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS13.0軟件，所有數(shù)據(jù)以±s表示，組間比較用單因素方差分析（ANOVA），P＜0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)組及對照組IL－17mRNA的表達(dá)

≤6h組IL－17mRNA的表達(dá)與對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），其他各實(shí)驗(yàn)組IL－17mRNA的表達(dá)與對照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。24－72h組血腫周圍組織IL－17mRNA 的表達(dá)顯著高于其他各實(shí)驗(yàn)組（P＜0.05），見表1。

表1 各組IL－17mRNA的表達(dá)

2.2 實(shí)驗(yàn)組及對照組腦組織NF－κBp65核蛋白的表達(dá)

各實(shí)驗(yàn)組血腫周圍組織NF－κBp65核蛋白的水平與對照組相比均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。24－72h組血腫周圍組織 NF－κBp65核蛋白的水平顯著高于其他各實(shí)驗(yàn)組（P＜0.05），見表2。

表2 各組腦組織NF－κBp65核蛋白的表達(dá)

3 討論

已有研究證實(shí)，腦出血后多種機(jī)制參與其發(fā)病過程，炎癥反應(yīng)參與腦出血后的病理過程。在腦出血發(fā)病早期，中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞等多種細(xì)胞遷徙、滲出到血腫周圍組織，分泌多種細(xì)胞因子等炎癥介質(zhì)，參與炎癥反應(yīng)及神經(jīng)細(xì)胞凋亡。小膠質(zhì)細(xì)胞等多種細(xì)胞能分泌多種細(xì)胞因子及補(bǔ)體參與血腫周圍的炎癥反應(yīng)。粘附分子亦參與腦出血后的細(xì)胞聚集及炎癥反應(yīng)。

IL－17是一種重要的細(xì)胞因子，廣泛參與多種炎癥性疾病的發(fā)病過程。已有研究證實(shí)，IL－17與其受體結(jié)合后，通過 NF－κB、MAPK、JAKs/STATs這三種信號途徑傳導(dǎo)信號［4］。

NF－κB是一種多向性的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，能夠影響多種細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄，誘導(dǎo)細(xì)胞因子、趨化因子、粘附分子、補(bǔ)體等多種因子的轉(zhuǎn)錄。當(dāng)細(xì)胞受到細(xì)菌、病毒等病原微生物、活性氧族、細(xì)胞因子等多種刺激時，NF－κB能夠被活化，多種刺激因素與 NF－κB之間能夠形成復(fù)雜的正反饋環(huán)路，與多種疾病的發(fā)病有關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)腦出血血腫周圍組織IL－17、NF－κBp65的表達(dá)逐漸增加，提示腦出血血腫周圍組織炎癥反應(yīng)的存在與IL－17、NF－κBp65密切相關(guān)。血腫周圍組織NF－κBp65表達(dá)的動態(tài)變化與IL－17的表達(dá)具有時間上的高度一致性。提示腦出血后IL－17/NF－κB 通路被激活，IL－17A/NF－κB 通路還通過促進(jìn)金屬基質(zhì)蛋白酶及水通道蛋白的表達(dá)，促進(jìn)腦出血后腦水腫的發(fā)生［5－9］。NF－κB還可能誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)組織損傷。本實(shí)驗(yàn)提示可以通過調(diào)控IL－17/NF－κB通路，減輕腦出血后的炎癥反應(yīng)，控制腦水腫，減輕細(xì)胞損傷，為腦出血治療開辟了新的途徑。

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