肉蓯蓉潤腸通便的藥效物質(zhì)研究△

高云佳，姜勇，戴昉，韓志玲，劉海月，鮑忠，張彤梅，屠鵬飛

(北京大學(xué) 藥學(xué)院 中醫(yī)藥現(xiàn)代研究中心，北京 100191)

·基礎(chǔ)研究·

肉蓯蓉潤腸通便的藥效物質(zhì)研究△

高云佳，姜勇，戴昉，韓志玲，劉海月，鮑忠，張彤梅，屠鵬飛*

(北京大學(xué) 藥學(xué)院 中醫(yī)藥現(xiàn)代研究中心，北京 100191)

目的：研究肉蓯蓉潤腸通便的藥效物質(zhì)。方法：根據(jù)肉蓯蓉所含主要成分，采用溶劑和色譜方法將其成分分為總多糖、總苷、總寡糖(含半乳糖醇)、半乳糖醇、去半乳糖醇總寡糖等五個(gè)部位，采用復(fù)方地芬諾酯制造小鼠便秘模型，經(jīng)口給予肉蓯蓉各部位提取物，觀察并記錄其排出第一粒紅色糞便的時(shí)間、排便粒數(shù)，以及糞便形態(tài)、糞便含水量，小腸的推進(jìn)率和含水量。結(jié)果：肉蓯蓉總寡糖及去半乳糖醇總寡糖顯著縮短便秘小鼠6 h內(nèi)的首次排紅便時(shí)間，并能顯著增加小鼠排便粒數(shù)及排便干重，同時(shí)總寡糖顯著增加首次排紅便動物只數(shù)及6 h持續(xù)增加水分含量，總寡糖、半乳糖醇和去半乳糖醇總寡糖對便秘小鼠的小腸推進(jìn)率有非常顯著的影響。結(jié)論：肉蓯蓉潤腸通便的藥效物質(zhì)為總寡糖和半乳糖醇。

荒漠肉蓯蓉；總寡糖；半乳糖醇；潤腸通便

中藥肉蓯蓉為列當(dāng)科植物肉蓯蓉CistanchedeserticolaY.C.Ma或管花肉蓯蓉Cistanchetubulosa(Schenk)R.Wight干燥帶鱗葉的肉質(zhì)莖。其性溫，味苦、咸，歸腎、大腸經(jīng)。具有補(bǔ)腎陽、益精血、潤腸通便等功效。多用于腎陽不足、精血虧虛、陽痿不孕、腰膝酸軟、筋骨無力、腸燥便秘[1]。肉蓯蓉屬于潤腸通便類中藥，具有作用緩和、便而不瀉的特點(diǎn)，尤其適合于老年人、產(chǎn)婦和身體虛弱等人群的便秘治療。隨著人口老齡化和現(xiàn)代社會工作壓力的增加，老年性便秘和習(xí)慣性便秘發(fā)病率明顯增加，作為傳統(tǒng)通便藥物的肉蓯蓉用量也明顯增加。近年來，國內(nèi)外學(xué)者對肉蓯蓉的研究非?；钴S，但主要集中在調(diào)節(jié)免疫、神經(jīng)保護(hù)、抗衰老、抗氧化、肝臟保護(hù)等方面[2]，對其潤腸通便的藥效物質(zhì)及其作用機(jī)理研究報(bào)道很少。張百舜等[3]對肉蓯蓉的通便作用及其有效成分進(jìn)行了研究，前期認(rèn)為其有效成分為無機(jī)鹽和膠質(zhì)類多糖成分，但此后研究又認(rèn)為其通便的主要有效成分為半乳糖醇，無機(jī)鹽僅起輔助作用[4-5]。為了進(jìn)一步闡明肉蓯蓉潤腸通便的藥效物質(zhì)及其作用機(jī)理，為臨床合理用藥和深層次開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)，本文采用溶劑提取、結(jié)晶和色譜分離等多種方法，將肉蓯蓉提取物按照化學(xué)成分的類型進(jìn)行了分離，并對各分離部位進(jìn)行了通便作用比較，明確了肉蓯蓉通便作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 藥品

肉蓯蓉飲片購自內(nèi)蒙古王爺?shù)厣惾厣镉邢薰?，?jīng)北京大學(xué)藥學(xué)院天然藥物學(xué)系屠鵬飛教授鑒定為荒漠肉蓯蓉CistanchedeserticolaY.C.Ma的干燥肉質(zhì)莖經(jīng)切制加工而成。

復(fù)方地芬諾酯(焦作市博愛藥業(yè)有限公司，批號：04051501；成分：鹽酸地芬諾酯2.5 mg、硫酸阿托品25 μg)。

麻仁地黃丸(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號：6015389；濃度：4 g·kg-1；成分：火麻仁、苦杏仁、大黃、木香、陳皮、白芍，輔料為賦形劑蜂蜜)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動物

ICR系小鼠87只，體重24～26 g，雌雄各半；購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司，許可證號：SCXK(京)2002-0003。二級實(shí)驗(yàn)動物飼養(yǎng)條件，大小鼠全價(jià)飼料配方，二級滅菌塊料。滅菌酸化水。滅菌塑料小鼠籠，每籠5或6只。室溫22±2 ℃，濕度45～55%。

2 方法

2.1 肉蓯蓉各部位提取物的制備與化學(xué)成分分析

肉蓯蓉各部位提取物的制備 取肉蓯蓉飲片10 kg，加8倍量水加熱回流提取三次，每次2 h，合并濾液，減壓濃縮至相對密度達(dá)1.15(50 ℃測定)，加95%乙醇至含醇量達(dá)60%，低溫沉淀12小時(shí)，濾過，沉淀即為粗多糖部位；濾液減壓濃縮至相對密度1.15(50 ℃測定)，再經(jīng)大孔樹脂純化，依次用水和不同濃度的乙醇洗脫，收集水洗脫液，減壓濃縮至稠膏，即得含半乳糖醇的肉蓯蓉總寡糖；再用40%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥，即得肉蓯蓉總苷；取部分含半乳糖醇的肉蓯蓉總寡糖，加適量的95%乙醇，低溫保存24 h，半乳糖醇快速結(jié)晶，濾出結(jié)晶，濾液減壓濃縮、干燥，分別得到半乳糖醇和去除半乳糖醇的總寡糖部位。

肉蓯蓉各部位提取物的化學(xué)成分分析 粗多糖部位：主要含多糖類成分。

總苷部位：該部位主要含有苯乙醇苷類和環(huán)烯醚萜苷類。采用高效液相色譜法對其松果菊苷、毛蕊花糖苷、8-表馬錢子酸的含量進(jìn)行了測定；采用紫外分光光度法，分別以松果菊苷和8-表馬錢子酸為對照，對其總苯乙醇苷和總環(huán)烯醚萜苷進(jìn)行了含量測定。結(jié)果表明，本品以干燥品計(jì)，含松果菊苷為4.27%，毛蕊花糖苷為0.65%，8-表馬錢子酸為2.37%；含總苯乙醇苷以松果菊苷計(jì)為32.38%，含總環(huán)烯醚萜苷以8-表馬錢子酸計(jì)為46.38%。

總寡糖部位(含半乳糖醇)：采用HPLC-ELSD方法對該部位的半乳糖醇進(jìn)行了含量測定；采用紫外分光光度法，以葡糖糖為對照，對總寡糖的含量進(jìn)行了測定。結(jié)果表明，本品以干燥品計(jì)，含半乳糖醇為27.75%，含總寡糖以葡萄糖計(jì)為69.42%。

半乳糖醇：采用HPLC-ELSD峰面積歸一化方法對其進(jìn)行了測定，含量為99.32%。

去半乳糖醇總寡糖部位：除半乳糖醇不含外，其它成分組成同總寡糖部位。

2.2 各提取物的給藥劑量

總寡糖：3.7 g·kg-1；總苷：0.4 g·kg-1；多糖：0.4 g·kg-1；半乳糖醇：0.8 g·kg-1；去半乳糖醇總寡糖：3.3 g·kg-1。均由北京華醫(yī)神農(nóng)科技有限公司化學(xué)室提供，批號：051206。

2.3 排便實(shí)驗(yàn)

按體重隨機(jī)將動物分為空白對照組、模型組和各提取物組。給藥前24 h禁食不禁水，次日空白對照組灌胃給予去離子水，模型組及各給藥組灌胃給予10 mg·kg-1的復(fù)方地芬諾酯造模，30 min后空白對照組、模型組灌胃給予含1%曙紅的去離子水，各給藥組灌胃給予含1%曙紅的藥液。給藥后單籠飼養(yǎng)，記錄排紅便動物數(shù)、排出第一粒紅色糞便的時(shí)間、給藥0～1、1～2、2～4、4～6 h后各組動物的排便粒數(shù)及糞便形態(tài)，將糞便放置于管中稱量糞便濕重，再放入干燥箱內(nèi)105 ℃烘2 h，稱量干重，并計(jì)算糞便水分含量(結(jié)果見表1～4)。用下述公式計(jì)算糞便水分含量：

含水量(%)=(濕重-干重)/濕重×100%

表1 肉蓯蓉提取物對便秘小鼠排紅便時(shí)間的影響

注：N代表排紅便的動物數(shù)。X2確切概率法檢驗(yàn)：與空白對照組比較：+++表示P<0.001；與模型組比較：+表示P<0.05。

One-way ANOVA檢驗(yàn)：與空白對照組比較：###表示P<0.001；與模型組比較：**表示P<0.01，***表示P<0.001。

表2 肉蓯蓉提取物對便秘小鼠6 h排便粒數(shù)及6 h排便干重的影響

注：與空白對照組比較：###表示P<0.001；與模型組比較：*表示P<0.05，**表示P<0.01。

2.4 小腸推進(jìn)實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)前各組動物禁食不禁水24 h，除空白對照組給予蒸餾水外，余組均給予復(fù)方地芬諾酯 10 mg·kg-1造模。30 min后，各提取物組、空白對照組、陽性對照組和模型組分別給予含樣品的墨汁(5%的活性炭粉與10%阿拉伯樹膠和墨汁)，再過30 min頸椎脫臼處死各動物，打開腹腔分離腸系膜，剪取上端自幽門，下端至回盲部的腸管，輕輕將小腸拉成直線，測量小腸長度為“小腸總長度”，從幽門至墨汁前沿為“墨汁推行長度”，并計(jì)算墨汁推進(jìn)率(結(jié)果見表5)。用下式計(jì)算“墨汁推進(jìn)率”：

表3 肉蓯蓉提取物對便秘小鼠每小時(shí)排便干重的影響

注：與空白對照組比較：###表示P<0.001，##表示P<0.01，#表示P<0.05；與模型組比較：*表示P<0.05。

表4 肉蓯蓉提取物對便秘小鼠糞便含水量的影響

注：與空白對照組比較：#表示P<0.05，##表示P<0.01；與模型組比較：**表示P<0.01。

墨汁推進(jìn)率=墨汁推進(jìn)長度/小腸總長度×100%

取小腸，稱量濕重。將小腸置于平皿中放于干燥箱內(nèi)(105 ℃)干燥2 h后取出，稱取干重，并計(jì)算小腸水分含量(結(jié)果見表6)。用下述公式計(jì)算小腸水分含量：

水分含量(%)=(濕重-干重)/濕重×100%

3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

4 結(jié)果

4.1 排便實(shí)驗(yàn)

由表1～4可見，給予10 mg·kg-1復(fù)方地芬諾酯后，6 h內(nèi)首次排紅便的動物只數(shù)顯著減少，首次排紅便時(shí)間顯著延長；6 h內(nèi)的排便粒數(shù)、排便干重及糞便水分含量顯著減少；排便干重在造模0～1、1～2、2～4 h均顯著減少，糞便含水量在造模1～2、2～4 h顯著降低，表明小鼠便秘造模成功。

各提取物組給藥后，6 h內(nèi)總寡糖組能顯著增加便秘動物首次排紅便的動物只數(shù)，顯著提高便秘動物糞便中的含水量；總寡糖組及去半乳糖醇總寡糖組能顯著縮短便秘動物首次排紅便的時(shí)間，并顯著增加6 h內(nèi)的排便粒數(shù)、排便干重及1～2 h的排便干重。

4.3 小腸推進(jìn)實(shí)驗(yàn)

由表5可見，多糖和總苷組與便秘模型對照組相比，墨汁推進(jìn)率均沒有顯著性差異(P>0.05)。肉蓯蓉總寡糖組、半乳糖醇組和去半乳糖醇總寡糖與便秘模型對照組相比，墨汁推進(jìn)率有非常顯著的差異(P<0.001，P<0.001，P<0.01)。肉蓯蓉總寡糖組、去半乳糖醇總寡糖組和半乳糖醇組與麻仁地黃丸組相比，墨汁推進(jìn)率均沒有顯著性差異(P>0.05)。

由表6可見，模型對照組與正常對照組相比，小腸水分含量沒有顯著性差異(P>0.05)，說明10 mg·kg-1復(fù)方地芬諾酯給藥后半小時(shí)對小腸的水分含量影響不大。多糖、總寡糖組和半乳糖醇組與便秘模型對照組相比，小腸水分含量沒有顯著性差異(P>0.05)；去半乳糖醇總寡糖組和總苷組與便秘模型對照組相比，小腸水分含量有顯著的差異(P<0.01，P<0.05)。

表5 肉蓯蓉提取物對便秘小鼠小腸推進(jìn)運(yùn)動的影響

注：與模型組比較：**表示P<0.01；***表示P<0.001。

表6 肉蓯蓉提取物對便秘小鼠小腸水分含量的影響

注：與模型組比較：*表示P<0.05，**表示P<0.01。

5 結(jié)論

通過上述實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，單次口服肉蓯蓉總寡糖及去半乳糖醇總寡糖對10 mg·kg-1復(fù)方地芬諾酯造成的便秘模型小鼠的6 h內(nèi)首次排紅便時(shí)間、排便粒數(shù)及排便干重均有顯著影響，同時(shí)總寡糖顯著增加首次排紅便動物只數(shù)及糞便水分含量；肉蓯蓉總寡糖、半乳糖醇和去半乳糖醇總寡糖對便秘小鼠的小腸墨汁推進(jìn)率有非常顯著提高作用。說明肉蓯蓉總寡糖、去半乳糖總寡糖和半乳糖醇能增強(qiáng)腸蠕動，有效改善腸肌運(yùn)動功能。結(jié)果表明肉蓯蓉總寡糖(包括寡糖和半乳糖醇)為肉蓯蓉通便的有效部位，總多糖和總苷均無明顯的通便作用。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：126.

[2] 屠鵬飛，姜勇，郭玉海，等.肉蓯蓉研究及其產(chǎn)業(yè)發(fā)展[J].中國藥學(xué)雜志，2011，46(12)：882-887.

[3] 張百舜，魯學(xué)書，張潤珍，等.肉蓯蓉的通便作用[J].中藥材，1992，15(7)：33-35.

[4] 張百舜，趙學(xué)文，陳雙厚，等.肉蓯蓉分離部位通便作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2003，10(11)：31-32.

[5] 張百舜 陳雙厚 趙學(xué)文.肉蓯蓉提取物半乳糖醇通便作用的量效研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2003，10(12)：28-29.

StudyonLaxativeConstituentsinCistanchedeserticolaY.C.Ma

GAOYunjia，JIANGYong，DAIFang，HANZhiling，LIUHaiyue，BAOZhong，ZHANGTongmei，TUPengfei*

(SchoolofPharmaceuticalSciences，ModernResearchCenterforTCM，PekingUniversityHealthScienceCenter，Beijing100191，China)

Objective：To study the laxative constituents ofCistanchedeserticolaY.C.Ma.Methods：By using the different solvents and chromatographic methods，the water extract ofC.deserticolawas separated into five fractions，including total glycosides，total oligosaccharides(containing galactitol)，galactitol，oligosaccharides(removing galactitol)，and polysaccharides.The compound diphenoxylate-induced constipation model was used to observe the defecation time of the first red feces，the granule number of feces，the appearance and the water content of feces，the movement of small intestine and the water content after oral administration of the different fractions ofC.deserticola.Results：The total oligosaccharides(containing galactitol)and the oligosaccharides(removing galactitol)significantly shortened the defecation time of the first red feces，and increased the granule number and the weight of feces within six hours.The total oligosaccharides(containing galactitol)significantly increased the animal numbers which could first defecate the red feces and the water content of the feces within six hours.The total oligosaccharides(containing galactitol)，the galactitol，and the oligosaccharides(removing galactitol)could significantly increase the movement of small intestine.Conclusion：The total oligosaccharides and galactitol were proven to be the laxative constituents ofC.deserticola.

Cistanchedeserticola；oligosaccharides；galactitol；laxative activity

2015-03-20)

國家重大新藥創(chuàng)制專項(xiàng)(2012ZX09103201-034)

*

屠鵬飛，教授，研究方向：天然藥物活性成分與新藥研究、中藥質(zhì)量分析；Tel：(010)82802750，E-mail：pengfeitu@bjmu.edu.cn

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.4.003