蒙藥小白蒿的炮制工藝及炮制品的藥理研究△

珠娜，薩茹拉，那生桑*

(1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110； 2.內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010065)

·基礎(chǔ)研究·

蒙藥小白蒿的炮制工藝及炮制品的藥理研究△

珠娜1，薩茹拉2，那生桑1*

(1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110； 2.內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010065)

目的：優(yōu)選小白蒿蒙醫(yī)炮制工藝，并觀察其飲片安全有效性。方法：以炮制品綠原酸含量為主要指標(biāo)并參考槲皮素含量進(jìn)行正交試驗(yàn)，以考察炒制溫度、時(shí)間和藥材粒度的影響，確定最佳工藝；采用小白鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)，斷尾實(shí)驗(yàn)測定出血時(shí)間，眼眶靜脈叢取血測定凝血時(shí)間，斷頭采全血計(jì)數(shù)血小板總數(shù)，評價(jià)安全有效性。結(jié)果：本品在270 ℃溫度下翻動炒制20 min效果最佳，經(jīng)方差分析證明炒制溫度、時(shí)間和粒度因素對所監(jiān)測的兩種成分的含量均沒有顯著影響；小白蒿炮制后可縮短小白鼠的出血時(shí)間，顯著增高血小板計(jì)數(shù)。結(jié)論：小白蒿經(jīng)過合理的炒制后，可提高其安全性和止血藥效，為驗(yàn)證傳統(tǒng)蒙藥小白蒿用藥理論，提供了參考依據(jù)。

蒙藥；小白蒿；炮制；藥理

小白蒿是菊科多年生植物冷蒿ArtemisiafrigidaWilld.的地上部分，其植物資源豐富，北半球寒帶、亞熱帶幾乎有分布。秋季花盛開時(shí)采集，陰干[1]。小白蒿是古老而最常用的一種蒙藥[2]，蒙藥本草《蒙藥正典》中有其藥用記載。現(xiàn)代蒙醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)則更詳細(xì)描述了其功效，止血、消腫，主治各種出血、腎熱、月經(jīng)不調(diào)、瘡?fù)碵3]。關(guān)于小白蒿的炮制，《認(rèn)藥白晶藥鑒》[4]、《四部甘露》[5]等多個(gè)蒙醫(yī)藥經(jīng)典文獻(xiàn)記載基本一致，配入止血方劑時(shí)炒制。其炮制目的在于提高止血作用，《蒙藥炮制學(xué)》已予肯定[6]。此外，據(jù)報(bào)道小白蒿中的與止血功效有關(guān)系的鈣、鎂、鉀、鐵等含量炮制后呈現(xiàn)不同程度的增加[7]，支持了止血功能增加的論斷。有人也研究了小白蒿炒炭炮制工藝與藥效后提出：與凝血機(jī)制有關(guān)的無機(jī)元素含量增加，炮制使止血作用有增強(qiáng)的趨勢[8]，但未提及對血小板計(jì)數(shù)有何影響。至于炮制法有二，一為炒焦，二為燜煅至碳。故炒制程度是要探討的問題。在蒙醫(yī)古代文獻(xiàn)中表述火制(用火處理)程度沒有明顯的界限之分，凡炒或煅制使藥材變化后統(tǒng)稱為碳(或碳灰)，不能夠用中醫(yī)炒黃、炒焦或炒碳來衡量。故本文照蒙醫(yī)理論對小白蒿炒制程度以飲片性狀(炒至藥材表面深棕色，斷面見呈淺褐色)為標(biāo)準(zhǔn)優(yōu)選炮制工藝，并評價(jià)其飲片安全有效性。

1 材料

1.1 藥物與試劑

小白蒿：采集于呼和浩特大青山，由內(nèi)蒙古藥檢所康雙龍蒙藥主任藥師鑒定為正品，標(biāo)本號：NM-MP20130701；三七粉(批號：20120801，亳州市京皖中藥飲片廠)。以上藥物用于動物實(shí)驗(yàn)時(shí)制成一定年度的混懸液；綠原酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110753-201213)、槲皮素對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100081-201207)；鐵氰化鉀、三氯化鐵、十二烷基硫酸鈉等試劑均為分析純或色譜純。

1.2 動物

昆明品系小白鼠(內(nèi)蒙古大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心)，雌雄各半，體重(20±2) g。

1.3 儀器

HH-S數(shù)顯恒溫油浴鍋(金壇市雙佳實(shí)驗(yàn)儀器廠)；TU-1901雙光束紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；AC910EO型血球儀計(jì)數(shù)器(瑞典)。

2 方法與結(jié)果

2.1 炮制工藝優(yōu)選

2.1.1 小白蒿藥材 新鮮采集藥材，除去雜質(zhì)，洗凈，切1～5 mm段，陰干。

2.1.2 炒制方法 根據(jù)藥材炒制通則，取凈小白蒿藥材置恒溫炒藥鍋，用武火(220～300 ℃)不斷翻動炒至噴發(fā)香味，停止冒白煙，外表面呈棕黃色時(shí)取出，出現(xiàn)火星時(shí)噴以清水滅盡，炒干取出，放涼。

2.1.3 炮制工藝優(yōu)選正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 以炮制品綠原酸含量為指標(biāo)并參考槲皮素含量，對影響因素進(jìn)行正交優(yōu)選。具體選炒制溫度(A)、時(shí)間(B)及藥材粒度(C)3個(gè)因素，每因素設(shè)3個(gè)水平，選用正交表L9(34)進(jìn)行正交試驗(yàn)[9]。結(jié)果見表1。

表1 小白蒿炮制工藝因素水平表

2.1.4指標(biāo)檢測 取綠原酸和槲皮素對照品，用紫外分光光度計(jì)依法測定分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程式依次為Y綠=2.905 68X+0.003 64(r=0.999 6)和Y槲=5.566 99X-0.034 3(r=0.999 6)。據(jù)不同被測物質(zhì)采用相應(yīng)的溶劑和方法提取小白蒿樣品，制備兩種供試品溶液，依法測定。

2.1.5 正交試驗(yàn)結(jié)果 按綠原酸或槲皮素含量為指標(biāo)排序，各因素影響主次結(jié)果為A2﹥B1﹥C3；即藥材切5 mm段，270 ℃溫度下翻動炒制20 min效果最佳。經(jīng)方差分析證明設(shè)定的溫度、時(shí)間對檢測成分均沒有顯著影響(P>0.05)。見表2、3。

表2 小白蒿炮制工藝正交試驗(yàn)方案及結(jié)果

表3 方差分析表

注：F0.05(2，1)=18.5.00；F0.01(2，1)=98.50。

2.2 藥理實(shí)驗(yàn)

2.2.1急性毒性實(shí)驗(yàn) 據(jù)預(yù)試了解到小白蒿飲片毒性很低，測不出LD50，故將小白蒿飲片制成適宜濃度的的混懸液，常規(guī)測定小鼠最大口服耐受量。結(jié)果每次給藥量達(dá)9.4 g·kg-1，超過了臨床有效量的340倍而無死亡，未見異常反應(yīng)，14 d小鼠增長與對照組間無差異[10]。說明小白蒿飲片毒性很小。

2.2.2 對昆明小鼠出、凝血時(shí)間及血小板總數(shù)的影響 取小白鼠80只，雌雄各半，隨機(jī)分為4組，每組20只，分別為賦形劑(空白)組、三七粉(陽性)組、藥材組和飲片組。小白蒿藥材細(xì)粉制成混懸液，按13.8 mg·(10g)-1劑量連續(xù)灌胃給藥5 d，末次給藥1 h后，小鼠固定，剪于尾尖0.5 cm處橫斷，待血液自行流出開始計(jì)時(shí)，測出血時(shí)間(BT)；同時(shí)自眼眶靜脈叢取血測定凝血時(shí)間(CT)；最后斷頭采全血，用血球儀計(jì)數(shù)血小板總數(shù)。

小白蒿經(jīng)炮制可縮短正常小白鼠出凝血時(shí)間，炮制前后相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.05)，小白蒿可顯著增加血小板計(jì)數(shù)(P﹤0.05)，經(jīng)炮制可提高該作用強(qiáng)度(P﹤0.05)，見表4。證明小白蒿經(jīng)炮制，可增強(qiáng)其止血作用，其機(jī)制可能與血小板計(jì)數(shù)增加等有關(guān)。

表4 小白蒿對小白鼠出血、凝血時(shí)間及血小板總數(shù)的影響

注：與空白組比，▲P﹤0.05，▲▲P﹤0.01；與陽性組比，△P﹤0.05，△△P﹤0.01；與藥材組比，★P﹤0.05。

3 討論

小白蒿是古老而最常用的一種蒙藥[11]，多用于出血性或血液病證的治療。配入止血方或治療血液病的方劑中，需要炮制，以提高其止血作用。本文研究炮制工藝，以綠原酸和槲皮素含量為檢測指標(biāo)優(yōu)選了炒制工藝，結(jié)果藥材切成小段，在270 ℃下翻動炒制20 min效果最佳；藥理實(shí)驗(yàn)顯示小白蒿具有縮短出血時(shí)間和凝血時(shí)間、提高血小板計(jì)數(shù)作用，經(jīng)炮制后可提上述作用的強(qiáng)度，炮制前后比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，有力地證明了傳統(tǒng)蒙醫(yī)藥的有效性和科學(xué)性。

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ProcessingTechnologyofMongolianArtemisiafrigidaWilldandPharmacologicalStudiesonProcessedProduct

ZHUNa1，SARula2，NAShengsang3*

(1.InnerMongoliaMedicalUniversity，InnerMongolia，Hohhot010110，China； 2.InternationalMongolianHospitalofInnerMongoliaAutonomousRegion，InnerMongolia，Hohhot010065，China)

Objective：To optimize the Mongolian processing technology ofArtemisiafrigidaWilld and observe the safety and effectiveness of processed product.Methods：The orthogonal test was conducted with the content of chlorogenic acid in processed products and quercetin as the main indicator and reference factors.The impact of frying temperature and time and medicinal material granularity were examined to determine the optimum.The safety and effectiveness by adopting acute toxicity test in mice were evaluated，and the bleeding time was determined by tail docking experiments，the blood coagulation time was determined with orbital venous plexus，the total number of platelet was counted with whole blood.Results：When the product was flipped fryed at a temperature of 270 ℃ 20 min，the best effect was achieved.By analysis of variance，it proved that the frying temperature and the time and granularity had not significant effect on the content of the two monitored components.After processingA.frigida，it can shorten the bleeding time of mouse，significantly increased the platelet count.Conclusion：After reasonable frying，it can improve theA.frigidasafety and hemostatic efficacy.The study provided a reference basis to verify the theory of traditional Mongolian medicine onA.frigida.

Mongolian medicine；ArtemisiafrigidaWilld；processing；pharmacology

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.11.012

2015-02-06)

內(nèi)蒙古政府重大項(xiàng)目(2013-006)

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那生桑，教授，研究方向：蒙藥現(xiàn)代化研究；E-mail：nasang56@sina.com