DA-6對冬季遲緩期的艾納香生長和有效成分含量的影響△

王丹，馬青松，范佐旺，李小婷，宛駿，袁蕾，陳曉鷺，鄒純禮，龐玉新*

(1.中國熱帶農業(yè)科學院 熱帶作物品種資源研究所/農業(yè)部華南作物基因資源與種質創(chuàng)制重點開放實驗室/海南省艾納香工程技術研究中心，海南 儋州 571737； 2.海南艾納香科技發(fā)展有限公司，海南 ?？?570208)

·中藥農業(yè)·

DA-6對冬季遲緩期的艾納香生長和有效成分含量的影響△

王丹1，馬青松1，范佐旺1，李小婷1，宛駿1，袁蕾1，陳曉鷺1，鄒純禮2，龐玉新1*

(1.中國熱帶農業(yè)科學院 熱帶作物品種資源研究所/農業(yè)部華南作物基因資源與種質創(chuàng)制重點開放實驗室/海南省艾納香工程技術研究中心，海南 儋州 571737； 2.海南艾納香科技發(fā)展有限公司，海南 海口 570208)

目的：研究DA-6對冬季遲緩期艾納香生長和有效成分含量的影響。方法：以一年生艾納香種子苗為實驗材料，在冬季艾納香生長遲緩期進行3次噴施DA-6。測定艾納香的株高、地徑、葉長和葉寬等生長指標以及葉干重。分別采用紫外可見分光光度法和GC法測定艾納香葉片總黃酮和l-龍腦的相對含量，并計算絕對含量。結果：DA-6顯著促進艾納香生長，增加葉干重，其中10 mg·L-1DA-6作用的效果最顯著。DA-6抑制了艾納香葉片中總黃酮和l-龍腦相對含量的積累。CK處理組總黃酮和l-龍腦相對含量最高，顯著高于100 mg·L-1DA-6處理組77.78%和96.49%。DA-6顯著提高了總黃酮和l-龍腦的絕對含量。10 mg·L-1DA-6處理組艾納香葉片中總黃酮和l-龍腦含量最高，顯著高于其他處理組，是CK處理組的2.33倍和3.33倍。結論：因此，在冬季艾納香生長遲緩期施加DA-6可以促進艾納香生長和葉干重的增加，提高總黃酮和l-龍腦的絕對含量。

DA-6；艾納香；遲緩期；l-龍腦；總黃酮；葉

艾納香為菊科(Asteraceae)植物艾納香Blumeabalsamifera(L.) DC.的新鮮或干燥地上部分，別名大風艾、大葉艾等，具有祛風除濕、溫中止瀉、活血解毒等功效，還具有促進皮膚創(chuàng)傷的作用[1-3]。艾納香廣泛分布于我國的海南、貴州、云南等省[4]。主要含有揮發(fā)油類、黃酮類成分以及倍半萜類等化合物，其主要成分為揮發(fā)油類成分l-龍腦(l-borneol)[5-7]。施肥是提高藥材產量和質量的有效途徑[8]。在艾納香道地產區(qū)貴州省羅甸等地很少對栽培艾納香施肥或僅施少量鈣鎂磷肥。何元農等[9]施用農家肥圈肥、油枯和柴灰，以及尿素、過磷酸鈣和氯化鉀和復合肥等，結果表明施肥組的經濟產量和生物產量高于對照組，且有效成分含量不減。其中氮肥對生物產量增加作用明顯，得油率和l-龍腦含量與K肥用量呈正相關關系。何元農等[10]研究證實氮肥可以提高艾納香藥材的產量和有效成分的含量。王丹等[11]研究發(fā)現(xiàn)錳元素極顯著的提高冬季生長遲緩期的艾納香生長指標和生物量，對l-龍腦和總黃酮的相對含量的提高無顯著影響，但是極顯著提高了其絕對含量，即單株質量。因此，如何在獲得較高產量的同時，顯著增加有效成分的含量，是艾納香施肥亟待解決的問題。

DA-6(二烷氨基乙醇羧酸酯，胺鮮酯)是一種新式細胞分裂素類的植物生長調節(jié)劑[12]，具有生長素、赤霉素和細胞分裂素等多種功能。眾多研究證實，DA-6可以提高植物葉綠素、核酸和蛋白質等含量，進而促進植物光合作用，增加過氧化物酶和硝酸還原酶的活性。同時，DA-6還可以促進植物細胞分裂、伸長以及C、N代謝等[13-14]。具有安全、高效、價格低廉以及使用方便等特點，具有廣闊的應用前景[15]。根據(jù)美國農業(yè)部的報道，少量的DA-6可使甜菜等經濟作物增產50%，豆類增產60%，也可以使人參長得如香蕉一樣粗大[13]。目前未見有關DA-6對艾納香的肥效研究。因此，在課題組前期研究的基礎上，在海南的冬季艾納香生長的遲緩期，進行不同濃度的DA-6對艾納香生長指標、生物量以及有效成分相對含量和絕對含量影響的肥效研究。

1 材料與方法

1.1 材料

選擇一年生艾納香種子苗，經中國熱帶農業(yè)科學院熱帶作物品種資源研究所龐玉新副研究員鑒定為艾納香Blumeabalsamifera(L.) DC.。于2014年1月27日開始，每隔10 d進行葉面噴施DA-6，共施肥3次。于3月7日進行取樣。分別設置1、10和100 mg·L-1DA-6 處理組，另設空白對照組(CK)，不進行任何處理。

1.2 試驗儀器和試劑

7890A氣相色譜儀(美國安捷倫科技公司)，F(xiàn)ID氫火焰離子化檢測器(美國安捷倫科技公司)，G4513A 16位自動進樣器(美國安捷倫科技公司)，2012-PCS紫外分光光度計(尤尼柯(上海)儀器有限公司)，CPA225D電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司)，KQ-500DB型超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)；左旋龍腦對照品(阿法埃莎化學有限公司，批號為10147015，純度>98%)，蘆丁標準品(中國藥品生物制品檢定所，批號：100080-200707，純度：92.5%)；水楊酸甲酯(天津光復精細化工研究所)，乙酸乙酯、甲醇、氫氧化鈉(西隴化工股份有限公司)，亞硝酸鈉(國藥集團化學試劑有限公司)，九水合硝酸鋁(廣州化學試劑廠)均為國產分析純。DA-6購自鄭州神雨生物制品有限公司。

1.3 生長指標的測定

用直尺和卷尺分別測量株高、葉長和葉寬，使用電子游標卡尺測量地徑，陰干后用天平測量葉干重。

1.4 總黃酮相對含量和絕對含量測定

1.4.1 對照品溶液的配制及標準曲線的制備 對照品溶液的配制以及標準曲線的制備同王丹等[11]實驗中所用方法。

1.4.2 供試品溶液的制備 分別精密稱取艾納香葉(過20目篩)粉末1.000 0 g，至具塞錐形瓶中，加甲醇溶液50 mL，稱定重量，冷浸30 min后，在超聲頻率為80 Hz的超聲清洗器中超聲提取30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻后過濾，取濾液作為供試品。

1.4.3 方法學考察 分別按照精密度、穩(wěn)定性、重復性和加樣回收試驗進行方法學考察，結果均表明該測定方法良好。

1.4.4 總黃酮相對含量測定 進行供試品溶液吸光度指測定，計算艾納香不同部位總黃酮相對含量，為質量百分數(shù)，單位為%。

1.4.5 總黃酮絕對含量計算 總黃酮的絕對含量為艾納香總黃酮產量，指艾納香不同部位中所含總黃酮的質量。

總黃酮絕對含量=不同部位總黃酮相對含量/100×對應部位藥材生物量，單位為g/株。

1.5 左旋龍腦含量測定

1.5.1l-龍腦含量測定 采用GC法測定艾納香葉片中l(wèi)-龍腦含量，具體見王丹等[11]實驗中采用方法。并且，精密度、穩(wěn)定性、重復性和加樣回收試驗均表明該方法良好。所得為艾納香葉片中l(wèi)-龍腦的相對含量。

1.5.2l-龍腦絕對含量計算l-龍腦的絕對含量為艾納香總黃酮產量，指艾納香不同部位中所含總黃酮的質量。

l-龍腦絕對含量=不同部位l-龍腦相對含量/100×對應部位藥材生物量，單位為g。

1.6 數(shù)據(jù)分析

采用Excel進行數(shù)據(jù)錄入及圖表的繪制，采用SPSS 16.0軟件進行統(tǒng)計與One-way ANOVA方差分析，并用Duncan檢驗法進行多重比較。

2 結果與分析

2.1 DA-6對艾納香生長指標的影響

方差分析結果表明，不同濃度DA-6處理，艾納香株高在各處理間差異顯著(P<0.05)，地徑、葉長和葉寬差異極顯著(P<0.01)。由表1可見，較CK處理相比，10 mg·L-1和100 mg·L-1DA-6處理組的株高顯著增加了49.71%和48.87%。1、10和100 mg·L-1DA-6處理組的葉長和葉寬均極顯著高于CK處理，其中葉長分別是CK的1.89、2.26和2.22倍。

表1 DA-6對艾納香生長指標的影響

注：*表示不同處理間在0.05水平差異顯著；**表示在0.01水平差異極顯著；表中不同小寫字母表示不同處理間在0.05水平差異顯著。

2.2 DA-6對艾納香葉干重的影響

方差分析結果表明，不同濃度的DA-6處理組，艾納香葉干重在各處理間差異極顯著(P<0.01)。由表2可見，10 mg·L-1和100 mg·L-1DA-6處理組的葉干重極顯著高于CK處理組，分別是CK處理組的5.59和3.39倍。較1 mg·L-1DA-6處理組相比，二者顯著增加了124.44%和36.14%。1 mg·L-1DA-6處理組的葉干重是CK的2.49倍。

表2 DA-6對艾納香葉干重的影響

注：**表示在0.01水平差異極顯著；表中不同小寫字母表示不同處理間在0.05水平差異顯著。

2.3 DA-6對艾納香葉片中總黃酮相對和絕對含量的影響

方差分析結果表明，不同濃度的DA-6處理，艾納香葉片中總黃酮相對含量和絕對含量均差異極顯著(P<0.01)。由表3可見，施加不同濃度的DA-6顯著降低了總黃酮的相對含量，其中CK處理組的總黃酮相對含量為2.24%，顯著高于1、10和100 mg·L-1DA-6處理組53.43%、140.86%和96.49%。10 mg·L-1DA-6處理組艾納香葉片中總黃酮含量最高，為0.91 g，顯著高于其他處理組，是CK處理組的2.33倍。

表3 DA-6對艾納香葉片總黃酮相對含量和絕對含量的影響

注：**表示在0.01水平差異極顯著；表中不同小寫字母表示不同處理間在0.05水平差異顯著。

2.4 DA-6對艾納香葉片中l(wèi)-龍腦相對和絕對含量的影響

方差分析結果表明，不同濃度的DA-6處理組，艾納香葉中l(wèi)-龍腦相對含量和絕對含量在各處理間差異極顯著(P<0.01)。由表4可見，CK處理組的l-龍腦相對含量最高，為0.16%，顯著高于10 mg·L-1和100 mg·L-1DA-6處理組60.00%和77.78%。10 mg·L-1DA-6處理組的艾納香葉片中l(wèi)-龍腦絕對含量最高，顯著高于其他處理組。

表4 DA-6對艾納香葉片中l(wèi)-龍腦相對含量和絕對含量的影響

注：**表示在0.01水平差異極顯著，表中不同小寫字母表示不同處理間在0.05水平差異顯著。

3 討論與結論

適當濃度的DA-6有助于冬季遲緩期艾納香生長：DA-6是一種細胞分裂素類植物生長素，它可以通過提高植物葉片中葉綠素的含量，進而提高植物的光合速率，促進葉片生長。研究表明，低濃度DA-6可以顯著促進秋季草莓[15]、菠菜[16]、黃燈籠辣椒[17]、野大麥[18]等葉片生長，提高葉片的生物量。周天等[19]研究發(fā)現(xiàn)，10 mg·L-1DA-6處理組可以顯著提高羊草幼苗的生物量，與對照組相比顯著增加了64.0%。何元農等[20]研究發(fā)現(xiàn)1～2月是艾納香生長遲緩期，3月為生長恢復期。本研究在海南冬季即艾納香生長遲緩期進行DA-6對艾納香的肥效研究。未進行任何處理的CK組，艾納香生長緩慢，甚至停止生長。施加不同濃度的DA-6可以顯著促進艾納香生長，提高生長指標和葉干重，其中10 mg·L-1DA-6處理組作用的效果最明顯。因此，在海南冬季，艾納香生長的遲緩期施加10 mg·L-1DA-6有利于促進艾納香植物生長和生物量的積累。

DA-6抑制了冬季遲緩期艾納香葉片中總黃酮和l-龍腦的相對含量，然而，增加了其絕對含量：本研究發(fā)現(xiàn)在冬季艾納香生長的遲緩期，施加DA-6抑制了艾納香葉片中總黃酮和l-龍腦相對含量的積累。其中100 mg·L-1DA-6處理組顯著抑制了葉片中總黃酮和l-龍腦相對含量，CK處理下相對含量最高，顯著高于100 mg·L-1DA-6處理組77.78%和96.49%。這主要可能由于總黃酮和l-龍腦是次生代謝產物，其積累代謝是一個持續(xù)而動態(tài)變化的過程，而在良好的環(huán)境條件下，植物生長的越快，其次生代謝產物數(shù)量越少[21]，并且次生代謝產物的積累也受到季節(jié)的影響[22]，這一結果說明在海南冬季艾納香生長遲緩期，總黃酮和l-龍腦的積累比較緩慢，外源施加植物激素會抑制其積累過程，導致其積累量的降低。然而，不同濃度的DA-6均顯著提高了艾納香葉片中總黃酮和l-龍腦的絕對含量。這說明在本實驗的處理階段，艾納香的初生代謝進程較快，受DA-6的影響大，效果遠超過對次生代謝過程的影響。本研究為后續(xù)進行艾納香專用肥的研究提供了數(shù)據(jù)支持和理論依據(jù)。

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EffectofDA-6onGrowthandContentsofEffectiveConstituentsinBlumeaBalsamiferainSlowGrowthPeriodofWinter

WANGDan1，MAQingsong1，F(xiàn)ANZuowang1，LIXiaoting1，WANJun1，YUANLei1，CHENXiaolu1，ZOUChunli2，PANGYuxin1*

(1.TropicalCropsGeneticResourcesInstitute，ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences/KeyLaboratoryofCropGeneResourcesandGermplasmEnhancementinSouthernChina/HainanProvincialEngineeringResearchCenterforBlumeaBalsamifera，Danzhou 571737，China；2.Hainan Xiangdaolijia Biotechnology Co.，Ltd.，Haikou 570208，China)

Objective：To investigate the effect of DA-6 on growth and contents of effective constituents inBlumeabalsamifera(L.) DC.in slow growth period of winter.Methods：The seedlings of one-year-oldB.balsamiferawere applied with DA-6 in slow growth period of winter three times.The height，ground diameter，length of leaf，width of leaf and leaf biomasses were measured.Then，the relative contents of total flavonoids andl-borneol in leaves ofB.balsamiferawere determined by UV and GC methods，respectively.The absolute contents were calculated.Results：The DA-6 significantly enhanced the growth ofB.balsamifera，and increased leaf biomass.The effect of 10 mg·L-1DA-6 treatment group was the most obvious.The application of DA-6 significantly inhibited the accumulation of relative contents of total flavonoids andl-borneol.The relative contents of total flavonoids andl-borneol under CK treatment were the highest，which were over 100 mg·L-1DA-6 treatment with 77.78% and 96.49%.However，DA-6 significantly increased the absolute contents of total flavonoids andl-borneol in leaves.The absolute contents of total flavonoids andl-borneol under 10 mg·L-1DA-6 treatment were the highest，which were 2.33 and 3.33 times than that of CK.Conclusion：Therefore，the DA-6 could significantly promote the growth and the accumulation of leaves，as well as the absolute contents of total flavonoids andl-borneol inB.balsamiferain slow growth period of winter.

DA-6；Blumeabalsamifera；slow growth period；l-borneol；total flavonoids；leaf

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.11.017

2015-01-08)

國家自然科學基金項目(81403035)；科技型中小企業(yè)技術創(chuàng)新基金(14C26214602908)

*

龐玉新，副研究員，研究方向：南藥資源研究與開發(fā)；Tel：(0898)23300268，E-mail：blumeachina@126.com