風(fēng)葉止咳口服液止咳、平喘、化痰的實(shí)驗(yàn)研究

陸賽衛(wèi)，玄振玉

(蘇州玉森新藥開發(fā)有限公司，江蘇 蘇州 215123)

·基礎(chǔ)研究·

風(fēng)葉止咳口服液止咳、平喘、化痰的實(shí)驗(yàn)研究

陸賽衛(wèi)，玄振玉*

(蘇州玉森新藥開發(fā)有限公司，江蘇 蘇州 215123)

目的：探討風(fēng)葉止咳口服液止咳、平喘、化痰、抗炎的功能。方法：采用小鼠氨水引咳法及豚鼠枸櫞酸引咳實(shí)驗(yàn)，觀察風(fēng)葉止咳口服液的止咳作用；采用在體豚鼠噴霧致喘法及離體豚鼠氣管螺旋條實(shí)驗(yàn)，觀察平喘效果；采用小鼠酚紅排泌實(shí)驗(yàn)及大鼠毛細(xì)管排痰實(shí)驗(yàn)，觀察祛痰作用；采用小鼠耳殼腫脹法實(shí)驗(yàn)，觀察抗炎作用。結(jié)果：1)風(fēng)葉止咳口服液能顯著延長小鼠(豚鼠)濃氨水(枸櫞酸)引咳的潛伏期，減少咳嗽次數(shù)；2)可有效促進(jìn)小鼠氣管酚紅排泌，增加大鼠毛細(xì)管排痰量，有明顯祛痰作用；3)對組胺引起的豚鼠離體氣管平滑肌痙攣有顯著解痙作用，且減輕乙酰膽堿和組胺所致豚鼠呼吸困難，并延長引喘潛伏期；4)對二甲苯所致小鼠耳廓炎癥有明顯抑制作用。結(jié)論：風(fēng)葉止咳口服液具有良好的止咳、平喘、化痰、抗炎作用。

風(fēng)葉止咳口服液；止咳；平喘；化痰；抗炎

風(fēng)葉止咳口服液是蘇州玉森新藥開發(fā)有限公司研發(fā)的中藥六類新藥，有清宣肺氣、祛痰、止咳、平喘的功能。主治感冒咳嗽，風(fēng)熱、痰熱咳喘痰多，表寒里熱咳嗽氣喘等證。適用于急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作時(shí)中醫(yī)辨證屬風(fēng)熱、痰熱、表寒里熱型咳喘。筆者根據(jù)風(fēng)葉止咳口服液的功能和主治，進(jìn)行較全面地藥效學(xué)研究，觀察其鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘、抗炎以及其他有關(guān)藥理作用，進(jìn)而評價(jià)風(fēng)葉止咳口服液的有效性，為臨床研究提供參考。

1 材料與儀器

1.1 藥品

受試藥物：按照風(fēng)葉止咳口服液處方比例稱取矮地茶、苦杏仁、薄荷、陳皮、魚腥草提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集；藥渣與枇杷葉、麻黃、竹茹、炙甘草加水煎煮2次，每次1.5 h，合并煎液，濾過，濾液和蒸餾后的水溶液合并，濃縮至適量。加入乙醇使其沉淀，靜置，取上清液減壓回收乙醇，并濃縮至一定體積，加入揮發(fā)油和聚山梨酯的混合物，即得質(zhì)量濃度為5.35 g·mL-1(以生藥計(jì))的提取物，避光冷藏保存。實(shí)驗(yàn)設(shè)低、中、高3個(gè)劑量組，臨用時(shí)用蒸餾水稀釋成所需濃度。大鼠、豚鼠給藥質(zhì)量濃度分別為0.32、0.64、1.28 g·mL-1(以生藥計(jì))，臨用時(shí)原浸膏加水配制。10 mL·kg-1灌胃，相當(dāng)于60 kg人體臨床用量的3倍、6倍、12倍；小鼠給藥質(zhì)量濃度分別為0.54、1.07、2.14 g·mL-1(以生藥計(jì))，臨用時(shí)原浸膏加水配制。10 mL·kg-1灌胃，相當(dāng)于60 kg人體臨床用量5倍、10倍、20倍。

陽性對照藥物：急支糖漿(太極集團(tuán)重慶涪陵制藥廠，規(guī)格：100 mL/瓶，批號：88071328)實(shí)驗(yàn)給藥劑量：大鼠、豚鼠每天9 mL·kg-1(相當(dāng)于臨床日服劑量的6倍)，小鼠每天15 mL·kg-1(相當(dāng)于臨床日服劑量的10倍)；氨茶堿(山東新華制藥股份有限公司，批號：1108103，規(guī)格0.1×100片)實(shí)驗(yàn)給藥劑量：豚鼠每天0.1 g·kg-1；阿司匹林(山東魯抗辰新藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號：1101062012，規(guī)格：25 mg×100片)實(shí)驗(yàn)給藥劑量：大鼠每天0.1 g·kg-1，小鼠每天0.2 g·kg-1；0.9%氯化鈉溶液組：灌胃給予與藥物組等體積的0.9%氯化鈉溶液；磷酸組胺；氯化乙酰膽堿(SCRC國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號：Lot.No.WL20100603，規(guī)格：5.0 g×1瓶)；酚紅；氯化銨；濃氨水；二甲苯；鈉石灰；枸櫞酸；碳酸氫鈉。

1.2 動(dòng)物

Wistar大鼠40只，雌雄各半，體重180～220 g，SPF級；豚鼠40只，雌雄兼用，體重150～200 g；豚鼠40只，雌雄兼用，體重(300±20)g，普通級；昆明種小白鼠200只，雌鼠80只，雄鼠120只，體重18～22 g，SPF級。由山東魯抗醫(yī)藥有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號：scxk(魯)20120002。

1.3 儀器

離體組織器官恒溫灌流系統(tǒng)(HV-4，成都泰盟科技有限公司)；生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(BL-420，成都泰盟科技有限公司)；紫外-可見分光光度計(jì)[UV-2102C型，尤尼柯(上海)儀器有限公司]；超聲噴霧器(402A，江蘇魚躍醫(yī)療設(shè)備有限公司)；分析天平(RS-232，上海恒平科學(xué)儀器有限公司)；玻璃毛細(xì)管(華西醫(yī)科大學(xué)儀器廠)；針頭(上海順昌醫(yī)療器械有限公司，規(guī)格：0.6×25)；塞多利斯電子天平(BS124S，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。

2 數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用Excel軟件錄入數(shù)據(jù)并建立數(shù)據(jù)庫，用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，組間均數(shù)比較采用Dunnet-t檢驗(yàn)。

3 方法

3.1 止咳實(shí)驗(yàn)

3.1.1 小鼠氨水引咳法 取健康小鼠于第1次給藥前24 h進(jìn)行篩選，篩選后再分組。咳嗽標(biāo)準(zhǔn)：腹肌收縮，同時(shí)張大嘴，有時(shí)可有咳聲。若潛伏期小于1 min，且在1 min內(nèi)出現(xiàn)3次以上典型咳嗽者為“有咳嗽”敏感動(dòng)物，否則淘汰。取合格小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組：空白對照組、急支糖漿組、風(fēng)葉止咳口服液低、中、高劑量組。灌胃給藥，劑量按小鼠給藥濃度，每日給藥1次，連續(xù)給藥3 d。第3天給藥1 h后，同上劑量重復(fù)給藥1次。于末次給藥后0.5 h，將小鼠置于4000 mL玻璃鐘罩內(nèi)，應(yīng)用超聲噴霧器將氨水(28%)噴入鐘罩，噴霧5 S，然后觀察記錄小鼠的咳嗽潛伏期及咳嗽次數(shù)(3 min)[1-3]。

3.1.2 豚鼠枸櫞酸引咳法 取300 g左右健康豚鼠，雌雄兼用，預(yù)先篩選。將豚鼠分別放入玻璃鐘罩內(nèi)，超聲霧化器噴入17.5%枸櫞酸霧化氣5 s。噴霧停止后，觀察6 min內(nèi)豚鼠咳嗽次數(shù)，少于10次者不予選用。取合格的豚鼠40只，次日隨機(jī)分為5組：空白對照組、急支糖漿組、風(fēng)葉止咳口服液低、中、高劑量組。灌胃給藥，劑量按豚鼠給藥濃度，每日給藥1次，連續(xù)給藥3 d。第3天給藥1 h后，同上劑量重復(fù)給藥1次。于末次給藥后0.5 h，進(jìn)行引咳實(shí)驗(yàn)，噴霧1 min，然后觀察記錄5 min內(nèi)豚鼠的咳嗽潛伏期及咳嗽次數(shù)[4-5]。

3.2 平喘實(shí)驗(yàn)

3.2.1 豚鼠噴霧致喘法 取體重150～200 g豚鼠，放入玻璃鐘罩內(nèi)，應(yīng)用超聲霧化器恒速、恒量噴入2%氯化乙酰膽堿(Ach)和0.1%磷酸組胺混合液15 s，觀察引起豚鼠呼吸急促、抽搐及跌倒翻滾時(shí)間，并以跌倒翻滾時(shí)間小于120 s為哮喘合格豚鼠。取哮喘合格的豚鼠40只，隨機(jī)分為5組：空白對照組、氨茶堿組、風(fēng)葉止咳口服液低、中、高劑量組。每組8只，灌胃給藥，劑量按豚鼠給藥濃度，每日給藥1次，連續(xù)給藥3 d。第3天給藥1 h后，同上劑量重復(fù)給藥1次。于末次給藥后0.5 h，依上述方法噴霧引喘，以5 min內(nèi)豚鼠跌倒翻滾開始的時(shí)間為引喘潛伏期，超過5 min者按300 s計(jì)[6-7]。

3.2.2 離體氣管螺旋條實(shí)驗(yàn)法 取體重(350±20)g豚鼠，按文獻(xiàn)[1]方法制備豚鼠離體氣管螺旋條(2 mm寬，3～4個(gè)氣管環(huán)長)，上端與張力換能器相連，下端掛于通氣鉤上，置于盛有10 mL(37.0±0.5)℃克-亨液的麥?zhǔn)显」軆?nèi)，其中通以95%O2和5%CO2，負(fù)荷為2 g，每0.5 h更換1次營養(yǎng)液。平衡1 h后加入組胺(0.1 mg·mL-1)0.5 mL，氣管收縮達(dá)峰值后，立即依次加入按豚鼠給藥濃度的風(fēng)葉止咳口服液低、中、高劑量各0.5 mL，觀察不同濃度風(fēng)葉止咳口服液對組胺所致氣管條張力增加的影響，然后用(37.0±0.5)℃克-亨液沖洗氣管螺旋條3～5次?；€恢復(fù)正常后，復(fù)加入組胺(0.1 mg·mL-1)0.5 mL，依次加入0.9%氯化鈉溶液及5 mg·mL-1氨茶堿各0.5 mL，觀察記錄5 min內(nèi)張力的變化[8-10]。依下式計(jì)算氣管收縮抑制率：

氣管收縮抑制率(%)=(給組胺后氣管的張力-用藥后的氣管的張力)/給組胺后氣管的張力×100%

3.3 祛痰實(shí)驗(yàn)

3.3.1 酚紅法 酚紅最大吸收峰的波長為560 nm。取體重18～22 g小白鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分成5組：空白對照組、急支糖漿組、風(fēng)葉止咳口服液低、中、高劑量組。灌胃給藥，劑量按小鼠給藥濃度，每日給藥1次，連續(xù)給藥3 d。第3天給藥1 h后，同上劑量重復(fù)給藥1次。于實(shí)驗(yàn)前禁食12 h，不禁水。于末次給藥后0.5 h，由腹腔注射2.5%酚紅溶液0.2 mL/10 g體重，0.5 h后脫頸處死小鼠，剪開頸中皮膚，分離氣管，剪下自甲狀軟骨下至氣管分支處的一段氣管，放入盛有2.5 mL 0.9%氯化鈉溶液的試管中，再加入1 mol·L-1的氫氧化鈉溶液0.1 mL，離心后振搖，放置1 h。取上清液置比色管中，用分光光度計(jì)測OD值[11-12]。

3.3.2 大鼠毛細(xì)管排痰量法 取體重180～220 g大鼠40只，雌雄各半，每組8只，隨機(jī)分成5組：空白對照組、急支糖漿組、風(fēng)葉止咳口服液低、中、高劑量組。灌胃給藥，劑量按大鼠給藥濃度，每日給藥1次，連續(xù)給藥3 d。于實(shí)驗(yàn)前禁食12 h，不禁水。于末次給藥后0.5 h，烏拉坦(1.0 g·kg-1)腹腔注射麻醉后，仰位固定。剪開頸正中部皮膚，分離出氣管，在甲狀軟骨下緣正中的軟骨環(huán)之間用尖銳的注射針頭扎一個(gè)小孔，然后插入一根玻璃毛細(xì)管，使其剛好接觸氣管底部表面，借以吸取氣管后部的痰液。當(dāng)毛細(xì)管內(nèi)痰液充滿時(shí)，立即另換一根。以毛細(xì)管吸取痰液的重量作為評價(jià)藥物的祛痰效果。記錄給藥前2 h的正常分泌量，灌胃給藥后(在給藥1 h后，再按同等劑量重復(fù)給藥1次)繼續(xù)再觀察4 h痰液分泌量。比較給藥前后平均每小時(shí)分泌量，并作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析[13-14]。

3.4 抗炎實(shí)驗(yàn)

取雄性小鼠40只，隨機(jī)分為5組：空白對照組、阿斯匹林組、風(fēng)葉止咳口服液高、中、低劑量組。灌胃給藥，劑量按小鼠給藥濃度，每日給藥1次，連續(xù)給藥3 d。第3天給藥1 h后，同上劑量重復(fù)給藥1次。末次給藥0.5 h后，以二甲苯棉球，在小鼠右耳殼正反兩面均勻涂抹(每面為5 s，每鼠用量為0.2 mL)，15 min后，將小鼠頸椎斷裂，沿耳廓基線剪下兩耳，對齊，用打孔器沖下圓耳片(直徑為7 mm)，用扭力天平稱重，以兩耳重量差值為炎癥腫脹度[15-16]，依下式計(jì)算用藥組的腫脹抑制率：

腫脹抑制率(%)=(0.9%氯化鈉溶液對照組腫脹度均值-用藥組腫脹度均值)/0.9%氯化鈉溶液對照組腫脹度均值×100%。

4 結(jié)果

4.1 風(fēng)葉止咳口服液對氨水致小鼠咳嗽的影響

結(jié)果顯示，與0.9%氯化鈉溶液組相比，風(fēng)葉止咳口服液高、中、低劑量組咳嗽潛伏期均延長，高劑量組與0.9%氯化鈉溶液組比較差異極具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與0.9%氯化鈉溶液組相比，風(fēng)葉止咳口服液高、中、低劑量組咳嗽次數(shù)均明顯減少，差異極具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；急支糖漿對照組與0.9%氯化鈉溶液對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。提示風(fēng)葉止咳口服液對氨水導(dǎo)致的小鼠咳嗽止咳效果優(yōu)于陽性對照藥急支糖漿。見表1。

表1 風(fēng)葉止咳口服液對氨水致小鼠咳嗽的治療作用

注：與0.9%氯化鈉溶液對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。下同。

4.2 風(fēng)葉止咳口服液對枸櫞酸致豚鼠咳嗽的影響

結(jié)果顯示，與0.9%氯化鈉溶液組相比，風(fēng)葉止咳口服液高、中、低劑量組咳嗽潛伏期均延長，其作用隨劑量加大而增強(qiáng)，高劑量組與0.9%氯化鈉溶液組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；風(fēng)葉止咳口服液高、中劑量組咳嗽次數(shù)明顯減少(P<0.01或P<0.05)，其作用隨劑量加大而增強(qiáng)，且呈量效依賴關(guān)系。結(jié)果見表2。

表2 風(fēng)葉止咳口服液對枸櫞酸致豚鼠咳嗽的治療作用

4.3 風(fēng)葉止咳口服液對豚鼠噴霧引喘時(shí)間的影響

結(jié)果顯示，與0.9%氯化鈉溶液組相比，風(fēng)葉止咳口服液高、中、低劑量組豚鼠引喘潛伏期均延長，高、中劑量組與0.9%氯化鈉溶液組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，低劑量組引喘出現(xiàn)潛伏期與對照組比較有一定延長趨勢，但未見顯著性差異。風(fēng)葉止咳口服液能有效延長組胺和乙酰膽堿聯(lián)合誘發(fā)的豚鼠哮喘潛伏期，有較好的平喘作用。結(jié)果見表3。

4.4 風(fēng)葉止咳口服液對豚鼠離體氣管的影響

結(jié)果顯示，風(fēng)葉止咳口服液高、中、低劑量組對組胺導(dǎo)致的豚鼠離體氣管螺旋條的痙攣均有顯著的松弛作用，與0.9%氯化鈉溶液組比較差異極具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。其中，中劑量組與氨茶堿對照組松弛作用相當(dāng)。提示風(fēng)葉止咳口服液具有顯著的平喘作用。見表4。

表3 風(fēng)葉止咳口服液對豚鼠噴霧引喘時(shí)間的影響

表4 風(fēng)葉止咳口服液對豚鼠離體氣管的影響

4.5 風(fēng)葉止咳口服液對小鼠酚紅分泌的影響

結(jié)果顯示，風(fēng)葉止咳口服液高、中劑量組OD值均較0.9%氯化鈉溶液對照組增大，酚紅排泌量明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，高劑量組酚紅排泌量多于急支糖漿對照組。見表5。

表5 風(fēng)葉止咳口服液對小鼠酚紅分泌量的影響

4.6 風(fēng)葉止咳口服液對大鼠毛細(xì)管排痰量的影響

結(jié)果顯示，風(fēng)葉止咳口服液高、中劑量組明顯增加大鼠毛細(xì)管的排痰量，較急支糖漿對照組增多，與0.9%氯化鈉溶液組比較差異極具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與給藥前相比差異極具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01或P<0.05)。提示風(fēng)葉止咳口服液有顯著的祛痰效果。見表6。

4.7 風(fēng)葉止咳口服液對二甲苯致小鼠耳殼腫脹的影響

結(jié)果顯示，風(fēng)葉止咳口服液高、中、低劑量組均有顯著抑制二甲苯導(dǎo)致的小鼠耳殼腫脹的作用，高、中劑量組與0.9%氯化鈉溶液對照組比較，P<0.01。其中以高劑量組作用最強(qiáng)，腫脹抑制率為52.4%，低于阿司匹林組(58.8%)；中、低劑量組抑制率分別為48.5%、33.2%，表明風(fēng)葉止咳口服液抗炎作用隨劑量增加而增強(qiáng)。見表7。

表6 風(fēng)葉止咳口服液對大鼠毛細(xì)管排痰量的影響

注：用藥前后比較，△P<0.05，△△P<0.01。

表7 風(fēng)葉止咳口服液對二甲苯致小鼠耳殼腫脹的影響

5 討論

風(fēng)葉止咳口服液是國家級名醫(yī)驗(yàn)方，從我國傳統(tǒng)中藥中提取而來，其配方符合傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論。方中以矮地茶、枇杷葉為君藥，其性平和，入肺經(jīng)，既清宣肺氣，止咳祛痰，又避免性味太偏，有損嬌臟之弊，而收宣降肺氣，歸于和平之功；同時(shí)臣以麻黃、薄荷、苦杏仁，宣達(dá)皮毛，肅降肺氣，以止咳平喘；陳皮、竹茹清降肺胃之氣，和中化痰，蠲除水飲；佐以魚腥草清解肺熱；使以炙甘草，調(diào)和諸藥。統(tǒng)觀全方，寒溫并用，辛涼清潤而無燥熱之弊，宣降肺氣而無攻伐之過，以維持肺臟之陰陽平衡，宣降協(xié)調(diào)，既達(dá)到清宣肺氣，止咳、祛痰、平喘之功又照顧了肺為嬌臟，不耐寒熱，喜潤惡燥之特點(diǎn)。經(jīng)長期臨床應(yīng)用，證明其治療風(fēng)熱、痰熱和表寒里熱型咳喘療效確切。

本藥效實(shí)驗(yàn)表明，風(fēng)葉止咳口服液能顯著延長小鼠(豚鼠)濃氨水(枸櫞酸)引咳的潛伏期，減少咳嗽次數(shù)；可有效促進(jìn)小鼠氣管酚紅排泌，增加大鼠毛細(xì)管排痰量，有明顯祛痰作用；對組胺引起的豚鼠離體氣管平滑肌痙攣有顯著解痙作用，且減輕乙酰膽堿和組胺所致豚鼠呼吸困難并延長引喘潛伏期；對二甲苯所致小鼠耳廓炎癥，有明顯抑制作用；對小鼠常壓缺氧耐受力無明顯影響。以上結(jié)果表明風(fēng)葉止咳口服液具有良好的止咳、平喘、化痰、抗炎作用，優(yōu)于對照藥物急支糖漿，因而該藥能顯著改善急、慢性支氣管炎咳嗽、咳痰、喘息等臨床癥狀，減輕呼吸道的阻力，為其在臨床廣泛應(yīng)用提供了藥效學(xué)依據(jù) 。

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ExperimentalStudiesonAntitussive，AntiasthmaticandExpectorantEffectsofFengyeZhikeOralLiquid

LUSaiwei，XUANZhenyu*

(SuzhouYouseenNewDrugR&DCo.，Ltd.Suzhou，Jiangsu215125，China)

Objective：To study the expectorant，anti-tussive，anti-asthmatic and anti-inflammatory effects of Fengye Zhike Oral Liquid．Methods：The antitussive effect of Fengye Zhike oral liquid was observed by using ammonia induced cough in mice and guinea pigs citric acid induced cough，The antiasthmatic effect was tested by using in vivo guinea pig asthma induced by spraying and in isolated guinea pig trachea spiral strip.The expectorant effect was observed by phenol sulfonphthalein excretion test and rat capillary expectoration method..The mouse auricle swelling test was applied to observe the anti-inflammatory effect.Results：The Fengye Zhike Oral Liquid showed (1)to prolong significantly mice (guinea pig) concentrated ammonia (citric acid) induced cough incubation period，decrease the frequency of cough；(2)to effectively promote mouse tracheal phenol red excretion in rats，increased capillary discharge sputum volume；(3)to have significant spasmolytic effects on histamine induced in guinea pig isolated tracheal smooth muscle spasm，and relieve acetylcholine and hista-mine induced dyspnea in guinea pigs and prolong the incubation period of the induced asthma；(4)to inhibit xylene induced mouse auricle swelling.Conclusion：Fengye Zhike oral liquid has significant anti-tussive，anti-asthmatic，expectorant and anti-inflammatory effects.

Fengye Zhike oral liquid，antitussive；antiasthmatic；expectorant；anti-inflammatory

2014-08-07)

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玄振玉，教授，碩士生導(dǎo)師；E-mail：xuanzhenyu@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.5.009