天津市婦女人乳頭瘤病毒感染各亞型分布的研究

黎科　李琳

天津市婦女人乳頭瘤病毒感染各亞型分布的研究

黎科1李琳2

目的 調(diào)查天津市婦女宮頸人乳頭瘤病毒（HPV）感染現(xiàn)狀和基因各亞型分布情況，為研究宮頸癌疫苗和防治宮頸癌提供依據(jù)。方法 采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）反向點(diǎn)雜交基因芯片技術(shù)對(duì)6 132名做宮頸癌篩查的女性宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行HPV基因分型檢測(cè)，分析HPV在女性人群中的感染率、基因型別和年齡分布特點(diǎn)。結(jié)果 6 132例標(biāo)本中HPV陽(yáng)性例數(shù)為1 296例，總感染率為21.14%。共檢測(cè)出23種基因亞型，其中高危型18種、低危型5種。高危型HPV52及16感染率最高，分別為11.46%和10.85%，高危型出現(xiàn)次數(shù)的排序：52＞16＞58＞53＞51；低危型HPV6感染率最高，其次為HPV43。20～29歲及30～39歲組感染率遠(yuǎn)高于其他年齡組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 天津市婦女HPV52、16型感染最常見(jiàn)，年輕婦女HPV感染率最高，HPV分型檢測(cè)在宮頸癌的早期預(yù)防、早期診斷具有重要意義。

人乳頭瘤病毒；亞型分布；篩查

1　資料與方法

1.1一般資料

對(duì)2013年1月～2014年3月在天津市金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所基因室做宮頸癌篩查的6 132例婦女進(jìn)行HPV分型檢測(cè)。年齡20～75歲，平均年齡42.5歲。所有篩查者均無(wú)妊娠，無(wú)子宮切除史，無(wú)婦科腫瘤史。

1.2研究方法

1.2.1HPV DNA取樣 窺陰器暴露宮頸，使用專用的宮頸采樣器在宮頸內(nèi)口及鱗-柱交界處沿同一方向旋轉(zhuǎn)5圈，然后刷頭放入專用細(xì)胞保存液，最后標(biāo)明篩查者信息，立即送病理科檢查。

1.2.2DNA的分離提取 取保存有宮頸脫落細(xì)胞保存液1 ml，以13 000 r/rain離心10 min，棄上清液后，按照試劑盒說(shuō)明（深圳亞能生物技術(shù)有限公司制備）提取DNA。取出PCR反應(yīng)管，分別加入已提取的待測(cè)樣本DNA 5 μl，反應(yīng)總體系為25 μl。本試劑盒利用HPV基因特點(diǎn)設(shè)計(jì)特異引物，可以擴(kuò)增出包含23種HPV基因型的目標(biāo)片段，再將擴(kuò)增產(chǎn)物與固定在膜條上的23種分型探針進(jìn)行雜交，依據(jù)信號(hào)判斷是否有這些HPV基因型的存在，可同時(shí)檢測(cè)18種高危亞型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、83；5種低危亞型：6、11、42、43、81。

1.2.3結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)判斷HPV型別，即膜條上的PC位點(diǎn)必須出現(xiàn)藍(lán)色顯色信號(hào)視為有效。每一批同時(shí)擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照各一份。HPV單一感染時(shí)，在膜條上相應(yīng)HPV亞型探針位點(diǎn)處可見(jiàn)一藍(lán)紫色圓點(diǎn)；雙重或多重感染時(shí)，在膜條上可見(jiàn)2個(gè)或2個(gè)以上顯色圓點(diǎn)。

2　結(jié)果

2.1HPV各亞型感染及分布情況

篩查6 132例標(biāo)本中檢測(cè)出2 193株病毒，高危亞型組1 687株（76.93%），低危亞型組506株（23.07%）。高危型HPV52及16感染率最高，分別為11.46%及10.85%，高危型出現(xiàn)次數(shù)的排序：52＞16＞58＞53＞51＞68＞56＞59＞66＞18；低危型HPV6感染率最高，其次為HPV43。詳見(jiàn)表1。

2.2不同年齡HPV感染情況

6 132例標(biāo)本中檢測(cè)出HPV陽(yáng)性者為1 296例，陽(yáng)性率為21.14%。隨著年齡的增加，HPV感染率逐漸降低，20～29歲組及30～39歲組感染率最高，60～75歲組感染率最低。20～29歲、30～39歲與40～49歲、50～59歲及60～75歲HPV陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2值分別為19.65、23.26、65.87、17.43、21.43、63.46，P＜0.01）；40～49歲、50～59歲與60～75歲的HPV陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2值分別為22.17、15.90，P＜0.01）。見(jiàn)表2。

3　討論

3.1HPV基因亞型分布情況分析

本研究對(duì)天津市6 132例婦女進(jìn)行HPV基因亞型檢測(cè)，感染率為21.14%。此研究HPV總感染率與湘潭地區(qū)21.79%接近，與沈陽(yáng)地區(qū)17.0%及杭州市27.8%有一些差距[2-4]。這可能與地域差異及篩查人群年齡結(jié)構(gòu)的差異有關(guān)。從亞型分布的情況看，本研究高危型感染率前5位為52、16、58、53、51型，這與湘潭、沈陽(yáng)、重慶、無(wú)錫等地區(qū)有一定的差異。從全球范圍看，歐洲地區(qū)的型別分布以HPV16、31、18型為主，亞洲地區(qū)以HPV 16、18、33為主，南美地區(qū)以HPV16、58、18型為主[5]，從中可以觀察到HPV亞型分布具有一定的地域性及人群種族分布特點(diǎn)。所以進(jìn)行本地區(qū)的HPV基因亞型分布情況的研究具有非常重要的意義。3.2不同年齡HPV感染及HPV致宮頸癌的分析

表1　HPV基因亞型分布情況（株）

表2 不同年齡HPV感染情況

本研究統(tǒng)計(jì)和分析了較大數(shù)量的婦女HPV基因亞型檢測(cè)結(jié)果，顯示20～39歲組感染率最高，隨著年齡增長(zhǎng)感染率下降，60～75歲組感染率最低。這與SmithJS[6]等研究結(jié)果基本一致。有相關(guān)研究表明HPV感染者主要是性生活活躍者。HPV是宮頸上皮內(nèi)瘤變發(fā)病的重要因素，但大多數(shù)HPV感染是一過(guò)性的。當(dāng)病毒或宿主基因突變時(shí)，可誘導(dǎo)HPV的基因片段整合到宮頸上皮細(xì)胞基因中，使宮頸上皮內(nèi)瘤變向?qū)m頸癌進(jìn)展的生物學(xué)病因使高危型HPV持續(xù)感染[7]，因此有必要早期控制年輕婦女HPV感染后轉(zhuǎn)變?yōu)閷m頸癌。本研究結(jié)果表明20～39歲組感染率最高，所以要特別重視此年齡段的HPV分型檢測(cè)。

3.3高危型HPV檢測(cè)預(yù)防宮頸癌的重要意義

本研究表明天津市婦女高危型HPV感染的主要亞型為52、16，其次為58、53、51。這項(xiàng)研究對(duì)天津市防治宮頸癌，研究本地區(qū)的HPV疫苗有參考價(jià)值。本研究顯示HPV感染率最高的年齡段為20～39歲，因此HPV分型檢測(cè)對(duì)年輕婦女宮頸癌的早期預(yù)防、早期診斷具有重要意義。

[1] 梁霽，張雪，蔣松云，等. 社區(qū)婦女宮頸癌防治認(rèn)知水平研究[J].中國(guó)婦幼保健，2013，28（35）：5773-5776.

[2] 張?jiān)伱罚芫?，龔志紅．湘潭地區(qū)HPV感染及不同亞型分布[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生，2010，48（34）：108-109，134．

[3] 張新，王純雁，石菊芳，等．沈陽(yáng)市婦女人乳頭瘤病毒感染型別分布的研究[J]．中華流行病學(xué)雜志，2007，28（10）：954-957．

[4] 李偉，范超明，陳軍，等．杭州地區(qū)女性人乳頭瘤病毒各亞型感染情況的研究[J]．中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2009，19（12）：2896-2897．

[5] Cliford GM，Gallus S，Herrero R，et a1. Worldwide distribution of human papillomavirus types in cytologically normal women in the International agency for research on cancer HPV prevalence surveys：a pooled analysis[J]．Lancet，2005，366（9490）：991-998．

[6] Smith JS，Melendy A，Rana RK，et a1. Age-specific prevalence of infection with human papillomavirus in females：A global review[J]. J Adolesc Health，2008，43（4）：S5-25．

[7] Rodon R，Wu TC. How will HPV vaccines affect cervical cancer [J]. Nature Rev.， 2006，6（10）：753-763.

Study on the Genotype Distributions of Human Papillomavirus Infection in Women of Tianjin

LI Ke1LI Lin2, 1 Department of Obstetrics and Gynecology, Tianjin University Hospital, Tianjin 300072, China, 2 Department of Gene, the Center of Tianjin KingMed Diagnostics, Tianjin 300384, China

Objective To provide theoretical basis for the development of vaccine and the treatment of cervical cancer, the status of human papillomavirus (HPV) in cervical cells of Tianjin women was investigated. Methods HPV genotype in 6 132 screening women was detected by human papillomavirus polymerase chain reaction (PCR) types diagnostic kit. The infection rate, genotype and age distribution in the female were analyzed.Results The HPV infection women was 1 296 in screening 6 132 cases and the total infection rate was 21.14%. 23 genotypes were found. 18 kinds of the high risk and 5 kinds of low risk HPV genotypes were detected. The top risk genotypes were HPV52 and HPV16, and their infection rates were 11.46% and 10.85%, respectively. The infection rate of high risk HPV sorted as HPV52>16>58>53>51. The infection rate of HPV6 was highest in the low risk genotypes and was in the second rate for HPV43. The infection rate of 20~29 and 30~39 groups was much higher than that of the other groups. The difference was statistically significant. Conclusion HPV52 and HPV16 were the major subtypes in the women of Tianjin. The infection rate of young women was higher than that of the other age groups. The detection of HPV genotypes is very meaningful in early prevention and diagnosis of cervical cancer.

Human papillomavirous, Genotype distribution, Screening宮頸癌是威脅女性生命的重要疾病之一，病死率居女性惡性腫瘤的第二位，僅次于乳腺癌[1]。有報(bào)道近20年來(lái)，宮頸癌發(fā)病率有年輕化趨勢(shì)。人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）已發(fā)現(xiàn)有120種不同的HPV亞型，其中約50余種亞型可感染生殖器官，高危亞型是女性子宮頸癌發(fā)生的直接原因。為探討天津市婦女HPV感染及HPV亞型的分布情況，對(duì)6 132名婦女進(jìn)行HPV基因分型檢測(cè)，現(xiàn)將結(jié)果歸納分析如下。

·臨床研究·

R737

B

1674-9308（2015）08-0014-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2015.08.012

1 300072 天津大學(xué)醫(yī)院婦產(chǎn)科；2 300384 天津金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所基因室

黎科，E-mail：liketd@tju.edu.cn