長(zhǎng)鏈非編碼RNAs的生物功能及其與器官發(fā)育和惡性腫瘤的關(guān)系*

張明嬌， 吳 勇， 李珉珉

(暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心，廣東廣州510632)

在組成人類(lèi)的約30億個(gè)堿基對(duì)中，蛋白編碼序列只占1.5%，而其余不編碼蛋白質(zhì)的序列曾一度被認(rèn)為是基因組進(jìn)化過(guò)程中的“垃圾序列”。2013年發(fā)布的ENCODE研究數(shù)據(jù)表明，所謂的“垃圾序列”絕大多數(shù)被轉(zhuǎn)錄成分子長(zhǎng)度超過(guò)200個(gè)核苷酸的長(zhǎng)鏈非編碼 RNAs(long noncoding RNAs，lncRNAs)。隨著高通量檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，lncRNAs的面紗逐漸被揭開(kāi)，并根據(jù)其與編碼基因的位置關(guān)系可分為正義、反義、基因間等6類(lèi)［1］。lncRNAs由RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生，不具有或少有開(kāi)放閱讀架 (open reading frame，ORF)，在多種層面調(diào)控包括細(xì)胞分化和個(gè)體發(fā)育在內(nèi)等的重要生命進(jìn)程，其異常表達(dá)還與多種人類(lèi)重大疾病密切相關(guān)。本文結(jié)合國(guó)內(nèi)外lncRNAs的研究現(xiàn)狀，對(duì)其生物學(xué)功能，包括對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控功能、在細(xì)胞分化和個(gè)體發(fā)育中的作用及其與常見(jiàn)惡性腫瘤的關(guān)系進(jìn)行綜述。

1 lncRNAs的自身表達(dá)調(diào)控

目前認(rèn)為lncRNAs主要來(lái)源于下列途徑:蛋白編碼基因在多種因素下斷裂形成lncRNAs;非編碼基因通過(guò)反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生沒(méi)有功能的非編碼反轉(zhuǎn)錄假基因lncRNAs;染色質(zhì)發(fā)生重排后過(guò)程中，2個(gè)不轉(zhuǎn)錄且相隔較遠(yuǎn)的序列合并產(chǎn)生lncRNAs;小非編碼RNA中的某段序列多次復(fù)制形成;轉(zhuǎn)錄因子中插入一段序列形成［2］。LncRNAs具有廣泛的組織和細(xì)胞表達(dá)譜，越來(lái)越多的證據(jù)顯示，在真核細(xì)胞內(nèi)lncRNAs被普遍轉(zhuǎn)錄，但不具有或很少具有蛋白編碼功能。lncRNAs與蛋白編碼基因相比具有更強(qiáng)的組織和細(xì)胞表達(dá)特異性，如它們?cè)谛∈笈咛ジ杉?xì)胞分化過(guò)程中特異表達(dá)，而在小鼠大腦中具有亞細(xì)胞精確定位功能［3］。LncRNAs還具有不同的表達(dá)模式，對(duì)大量組織和細(xì)胞都有調(diào)節(jié)作用，并且在一些疾病中其表達(dá)水平會(huì)發(fā)生變化，這涉及到許多重要的生物學(xué)過(guò)程。

2 lncRNAs調(diào)控基因表達(dá)的多種作用形式

2.1 lncRNAs的表觀遺傳學(xué)的調(diào)控 Xist RNA是最早被發(fā)現(xiàn)調(diào)控X染色體失活的lncRNAs，主要機(jī)制為Xist RNA與即將沉默的染色體區(qū)域結(jié)合形成“沉默區(qū)間”，以此招募多梳蛋白抑制物復(fù)合體2(polycomb repressive complex 2，PRC2)，通過(guò)抑制組蛋白H3第27位賴(lài)氨酸三甲基化(histone H3 lysine 27 trimethylation，H3K27me3)的刺激因素導(dǎo)致X染色體沉默，從而調(diào)控細(xì)胞的增殖和分化。近年有研究發(fā)現(xiàn)［4］，Xist基因可作為唐氏綜合癥的治療靶點(diǎn)，這一發(fā)現(xiàn)預(yù)示著lncRNAs可用于疾病治療尤其是在再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。此外，由HOX基因轉(zhuǎn)錄本的反義RNA(HOX transcript antisense RNA，HOTAIR)同樣能夠招募PRC2并將其定位到HOXD位點(diǎn)，進(jìn)而誘導(dǎo)HOXD位點(diǎn)的表觀遺傳沉默［5］。

2.2 lncRNAs的順式調(diào)控作用 由蛋白編碼基因增強(qiáng)子區(qū)轉(zhuǎn)錄的lncRNAs稱(chēng)e-RNAs，這類(lèi)lncRNAs具有類(lèi)似增強(qiáng)子的功能，通過(guò)招募轉(zhuǎn)錄激活因子與其形成復(fù)合體，增強(qiáng)鄰近靶基因的表達(dá)。由HOXA基因家族轉(zhuǎn)錄的Hottip lncRNA可進(jìn)入HOXA基因簇形成的染色質(zhì)環(huán)內(nèi)，與MLL-WDR5復(fù)合體結(jié)合使其到達(dá)HOXA基因，刺激該區(qū)組蛋白H3第4位賴(lài)氨酸三甲基化(histone H3 lysine4 trimethylation，H3K4me3)，進(jìn)而促進(jìn)HOXA下游基因的轉(zhuǎn)錄［6］。作為bHLH轉(zhuǎn)錄因子家族成員neurogenin 1，其表達(dá)依賴(lài)于 utNgn1 e-RNA的表達(dá)，而utNgn1 e-RNA編碼neurogenin 1基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游7 kb的區(qū)域。多梳家族蛋白(polycomb group proteins，PcG)可以抑制utNgn1 e-RNA及neurogenin 1的表達(dá)，并且敲低utNgn1后可直接導(dǎo)致neurogenin 1的表達(dá)量減少［7］，這一現(xiàn)象提示neurogenin 1的表達(dá)受utNgn1 e-RNA表達(dá)水平的順式調(diào)控。

2.3 lncRNAs的反式調(diào)控作用 B2 lncRNA通過(guò)與RNA聚合酶Ⅱ羧基末端結(jié)構(gòu)域(C-terminal domain，CTD)結(jié)合，通過(guò)阻止其磷酸化來(lái)抑制RNA聚合酶Ⅱ的活性，從而影響整體轉(zhuǎn)錄水平。研究表明B2 lncRNA受到壓力信號(hào)刺激時(shí)表達(dá)上調(diào)，阻止一切轉(zhuǎn)錄活動(dòng)，提示這可能是作為細(xì)胞保護(hù)的一種機(jī)制［8］。類(lèi)固醇受體激活物(steroid receptor activator，SRA)是在RNA轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)表達(dá)2個(gè)水平上發(fā)揮功能的分子。SRA基因編碼的lncRNA主要參與核受體的轉(zhuǎn)錄共激活作用［9］。除了核受體，SRA還可以促進(jìn)不同細(xì)胞和生長(zhǎng)環(huán)境中P53及MyoD的轉(zhuǎn)錄活性。SRA lncRNA的過(guò)表達(dá)連同MyoD一起能促進(jìn)小鼠成纖維細(xì)胞向骨骼肌的橫向分化，而類(lèi)固醇激素受體共激活蛋白質(zhì) (steroid receptor activator protein，SRAP)則通過(guò)結(jié)合SRA RNA阻止其與MyoD作用，進(jìn)而影響肌細(xì)胞分化［10］。這是1種基因編碼2種產(chǎn)物對(duì)轉(zhuǎn)錄有相反作用的典型例子:一個(gè)起促進(jìn)作用的lncRNA和一個(gè)起抑制作用的蛋白質(zhì)。

2.4 lncRNAs在可變剪接中的調(diào)控 研究還發(fā)現(xiàn)，多種lncRNAs是可變剪接的調(diào)控因子。肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄本1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript l，MALAT1)的lncRNA已被發(fā)現(xiàn)與多種腫瘤形成、轉(zhuǎn)移以及預(yù)后不良有關(guān)［11-13］。MALAT1位于多種細(xì)胞系的核剪接斑點(diǎn)(splicing speckle)，通過(guò)與絲氨酸/精氨酸(serine/arginine，SR)剪接因子相互作用來(lái)調(diào)控剪接因子在剪接斑點(diǎn)中的分布和磷酸化水平，從而改變mRNA前體的可變剪接模式。Bemard等［14］研究發(fā)現(xiàn)MALAT1在神經(jīng)細(xì)胞中高表達(dá)，并同樣通過(guò)調(diào)控SR剪接因子影響突觸相關(guān)基因表達(dá)。

2.5 競(jìng)爭(zhēng)性?xún)?nèi)源lncRNAs“miRNAs海綿”已逐漸發(fā)展成為一種研究策略，在此策略中設(shè)計(jì)富含多個(gè)針對(duì)特定miRNAs靶向位點(diǎn)的外源性RNA分子，通過(guò)吸附細(xì)胞中miRNAs來(lái)解除其對(duì)靶基因的負(fù)性調(diào)控作用。最近的研究報(bào)道了自然存在的“miRNAs海綿”，稱(chēng)它們?yōu)楦?jìng)爭(zhēng)性?xún)?nèi)源RNAs(competing endogenous RNAs，ceRNAs)［15］。其中，linc-MD1 作為 ce-RNAs之一，能結(jié)合miR-133和miR-135，從而解除其對(duì)編碼重要肌源性因子的靶基因的調(diào)控，進(jìn)而激活細(xì)胞分化相關(guān)基因表達(dá)。相反，如敲低linc-MD1基因，則細(xì)胞分化進(jìn)程延遲。在臨床上，杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良癥患者的成肌細(xì)胞中，linc-MD1水平顯著降低［16］。最近，有研究報(bào)道［17］內(nèi)源性環(huán)狀 RNAs(circular RNAs，circRNAs)分子在不同物種中起到”miRNAs海綿”的作用，miR-7環(huán)狀RNA海綿(circular RNA sponge for miR-7，ciRS-7)包含豐富的選擇性保守miRNAs靶位點(diǎn)，它在人類(lèi)及小鼠大腦組織中廣泛表達(dá)，通過(guò)抑制miR-7活性而導(dǎo)致miR-7靶基因水平增加。以上研究發(fā)現(xiàn)表明，ceRNAs可以調(diào)控不同的生物學(xué)功能，并且揭示這些lncRNAs內(nèi)部的相互作用機(jī)制可以為大部分的分化和病理進(jìn)程提供重要的信息。

3 lncRNAs與細(xì)胞分化和組織器官發(fā)育

3.1 干細(xì)胞多能性與分化 一些lncRNAs已被研究確認(rèn)參與維持誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞(induced pluripotent stem cells，iPSCs)及人和鼠胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cells，ESCs)的多能性，并且這些lncRNAs的表達(dá)譜與控制多能性網(wǎng)絡(luò)調(diào)控有關(guān)的核心因子OCT4、NANOG、SOX2明顯相關(guān)，功能缺失試驗(yàn)可以導(dǎo)致干細(xì)胞分化而失去多能性，或者譜系定向基因表達(dá)譜的上調(diào)［18］。在眾多的多能性相關(guān) lncRNAs中，linc-RoR(long intergenic noncoding RNA，regulator of reprogramming)在iPSCs中含量豐富，它充當(dāng)一個(gè)關(guān)鍵性 ceRNA，競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合 miR-145而保護(hù)OCT4、SOX2和NANOG轉(zhuǎn)錄本免受miR-145的負(fù)性調(diào)控。抑制其表達(dá)，可顯著降低細(xì)胞重編程的效率［19］，提示轉(zhuǎn)錄因子、miRNAs、lncRNAs在譜系定向過(guò)程中能形成彼此調(diào)控的網(wǎng)絡(luò)。

3.2 心臟發(fā)育 有大量lncRNAs參與心肌細(xì)胞發(fā)育過(guò)程，lncRNA Bvht和lncRNA Fendrr首先在小鼠中胚層細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，對(duì)心臟發(fā)育具有重要作用。Bvht在胚胎干細(xì)胞中已開(kāi)始表達(dá)，經(jīng)RNA干擾技術(shù)介導(dǎo)的敲除小鼠胚胎干細(xì)胞Bvht后，明顯影響心肌特異性基因表達(dá)水平，并阻止其分化為成熟的具有搏動(dòng)能力的心肌細(xì)胞，其機(jī)制可能是Bvht可以上調(diào)一些在新生中胚層發(fā)育為心肌細(xì)胞過(guò)程中起關(guān)鍵作用的轉(zhuǎn)錄因子，如中胚層后蛋白(mesoderm posterior 1，MesP1)［20］，提示 Bvht可能參與心肌受損后的組織重塑。此外，Bvht也能通過(guò)與染色質(zhì)修飾復(fù)合物SUZ12結(jié)合在表觀遺傳學(xué)水平發(fā)揮調(diào)控作用。Fendrr則是小鼠側(cè)板中胚層特異表達(dá)的一種lncRNA，在體內(nèi)經(jīng)RNA干擾技術(shù)降低60%的表達(dá)水平，并未顯示明顯表型改變。相反，如果敲除小鼠胚胎Fendrr，心肌細(xì)胞數(shù)量發(fā)生明顯減少，心室壁變薄，最終導(dǎo)致胚胎死亡［21］，提示心肌細(xì)胞數(shù)目的減少可能因?yàn)閭?cè)板中胚層向心肌細(xì)胞分化受阻所致。總之，Bvht與Fendrr在心臟發(fā)育中具有重要調(diào)控作用，使心肌細(xì)胞分化有序進(jìn)行。

3.3 大腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育 大腦的基因表達(dá)通常與lncRNAs有關(guān)，其中包括與大腦發(fā)育密切相關(guān)的Dlx基因家族。Guttman等［22］通過(guò)分析包括神經(jīng)前體細(xì)胞在內(nèi)的小鼠神經(jīng)元染色質(zhì)標(biāo)簽，發(fā)現(xiàn)了大于1 000個(gè)保守的基因間lncRNAs，功能分析顯示，這些lncRNAs與小鼠海馬發(fā)育、少突膠質(zhì)細(xì)胞髓鞘形成、GABA能神經(jīng)元分化、G蛋白偶聯(lián)受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶依賴(lài)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有關(guān)。

此外，lncRNAS還參與到脂肪細(xì)胞分化、骨骼肌及視網(wǎng)膜等器官和組織發(fā)育等過(guò)程。

4 lncRNAs與常見(jiàn)惡性腫瘤的關(guān)系

在多細(xì)胞生物體內(nèi)，lncRNAs作為激活或抑制因子廣泛參與到細(xì)胞分化和個(gè)體發(fā)育進(jìn)程。腫瘤為脫分化的細(xì)胞惡性增殖，理論上與這些廣泛參與到細(xì)胞分化和個(gè)體發(fā)育的lncRNAs有密切關(guān)系。腫瘤相關(guān)lncRNAs的研究正在興起，已有研究證實(shí)lncRNAs在腫瘤生物學(xué)中具有重要功能，并且在多種腫瘤中調(diào)控失調(diào)，可作為相關(guān)腫瘤早期診斷和預(yù)后判斷的重要分子生物標(biāo)志物，也可為腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移治療提供新的靶點(diǎn)和治療思路。

HOTAIR作為組蛋白修飾復(fù)合物的支架可結(jié)合PRC2及組蛋白去甲基化酶復(fù)合體，并介導(dǎo)這2種復(fù)合體至特定基因位點(diǎn)，導(dǎo)致H3K27me3，從而使腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因(如JAM2、PCDH10和PCDHB5)在表觀遺傳水平上發(fā)生沉默。HOTAIR表達(dá)水平與乳腺癌、肝癌、結(jié)直腸癌、胰腺癌、卵巢癌等腫瘤的發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)［23］。Sorensen 等［24］研究發(fā)現(xiàn)HOTAIR在乳腺癌原發(fā)灶及其轉(zhuǎn)移灶組織中的表達(dá)明顯不同，且轉(zhuǎn)移灶組織中HOTAIR普遍高表達(dá)。進(jìn)一步的生存分析研究發(fā)現(xiàn)，相比于低表達(dá)患者，HOTAIR高表達(dá)患者的無(wú)轉(zhuǎn)移生存率明顯降低。多因素分析顯示，HOTAIR的高表達(dá)是預(yù)測(cè)病人無(wú)轉(zhuǎn)移生存率危險(xiǎn)因素之一，且獨(dú)立于其它危險(xiǎn)因素，如年齡、腫瘤大小、臨床分期以及雌激素受體表達(dá)等。因此HOTAIR可預(yù)測(cè)乳腺癌的轉(zhuǎn)移，并且與患者不良預(yù)后密切相關(guān)。Ishibashi等［25］通過(guò)熒光定量 PCR方法檢測(cè)64名肝癌患者中HOTAIR表達(dá)情況，并與HOTAIR低表達(dá)患者相比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HOTAIR高表達(dá)患者總體生存率低、腫瘤體積更大，提示HOTAIR可促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖并且可作為肝癌預(yù)后的危險(xiǎn)因素。盡管眾多研究表明HOTAIR與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系，但其具體作用機(jī)制還有待進(jìn)一步探究。

印記基因H19是較早發(fā)現(xiàn)的一種lncRNA，既有致癌作用，也有抑癌作用。H19在胃癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌等中表達(dá)均異常。Li等［26］用lncR-NAs微陣列芯片技術(shù)檢測(cè)74對(duì)患者胃癌和癌旁組織發(fā)現(xiàn)，與正常的癌旁組織相比，H19在胃癌組織的表達(dá)明顯上調(diào)，且平均差異水平超過(guò)6倍，并且生存分析顯示高水平H19患者比低水平者預(yù)后較差，表明H19有望成為預(yù)測(cè)胃癌患者生存期的新型生物標(biāo)志物及新治療靶點(diǎn)。H19的第1個(gè)外顯子可轉(zhuǎn)錄出miR-675。Zhu等［27］研究中發(fā)現(xiàn)，相比非前列腺癌轉(zhuǎn)移細(xì)胞株P(guān)69，印記基因H19及mir-675在前列腺癌轉(zhuǎn)移細(xì)胞株M12中的表達(dá)水平明顯下調(diào)，并且抑制參與腫瘤轉(zhuǎn)移的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白——生長(zhǎng)因子β誘導(dǎo)蛋白(transforming growth factor β-induced protein，TGFBI)的合成，可見(jiàn)H19還有抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用。H19這種雙向調(diào)控機(jī)制是源于自身特性，還是與環(huán)境因素的共同作用，仍需進(jìn)一步研究。

結(jié)腸癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄本1(colon cancer-associated transcript 1，CCAT1)在結(jié)腸癌組織中表達(dá)高度上調(diào)。Nissan等［28］通過(guò)代表性差異分析發(fā)現(xiàn) CCAT1在結(jié)腸癌組織中表達(dá)水平高于正常黏膜組織235倍，并且在病人外周血單個(gè)核細(xì)胞中的表達(dá)水平同樣高于正常人，提示CCAT1有望成為結(jié)腸癌診斷的標(biāo)志物。Mizrahi等［29］通過(guò)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)19例胃癌組織﹑癌旁組織及正常胃黏膜組織的CCAT1表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)，其在胃癌組織中的相對(duì)表達(dá)量明顯高于癌旁組織及正常胃黏膜組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示CCAT1可作為胃癌早期診斷與監(jiān)測(cè)的生物標(biāo)志物。也有研究［30］發(fā)現(xiàn)CCAT1在膽囊組織中表達(dá)上調(diào)，并通過(guò)結(jié)合miR-218-5p來(lái)解除其對(duì)靶基因Bmi1的負(fù)性調(diào)控，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞形成。

隨著高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，越來(lái)越多腫瘤相關(guān)lncRNAs被發(fā)現(xiàn)。Peng等［31］通過(guò)熒光定量PCR方法檢測(cè)肝細(xì)胞癌組織及細(xì)胞系中l(wèi)ncRNA PANDAR表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其在肝癌組織中表達(dá)水平高于正常癌旁組織，ROC為0.9564，提示 lncRNA PANDAR有望作為肝細(xì)胞癌診斷的潛在標(biāo)志物。目前已發(fā)現(xiàn)體液中多種lncRNAs可作為腫瘤篩查、診斷的生物標(biāo)志物，例如血液中l(wèi)ncRNA POU3F3可作為食管鱗癌的診斷指標(biāo)，其與SCCA聯(lián)合檢測(cè)對(duì)于食管鱗癌的早期篩選更有意義;lncRNA PCA3在前列腺癌中表達(dá)上調(diào)，尿液中PCA3可作為前列腺癌的早期診斷標(biāo)志物，小干擾RNA介導(dǎo)的PCA3表達(dá)下調(diào)能明顯抑制前列腺癌細(xì)胞的增長(zhǎng)和靶基因的表達(dá)［32］，提示lncRNA PCA3可能作為前列腺癌的治療靶標(biāo);尿液lncRNA-UCA1診斷膀胱癌的敏感性和特異性分別為91.5%和96.5%［33］，ROC為0.975，提示尿液lncRNA-UCA1有望成為膀胱癌的早期篩查指標(biāo)。相比于腫瘤組織，體液更易獲取和檢測(cè)，因此，體液lncRNAs有潛力作為腫瘤特異標(biāo)志物應(yīng)用于臨床，并與其它腫瘤標(biāo)志物相結(jié)合對(duì)腫瘤進(jìn)行篩查、早期診斷和鑒別診斷，對(duì)患者療效和預(yù)后進(jìn)行評(píng)估。

lncRNAs調(diào)控失調(diào)對(duì)腫瘤發(fā)生﹑發(fā)展的影響見(jiàn)表1。

表1 疾病相關(guān)lncRNAsTable 1.Disease-associated lncRNAs

5 總結(jié)與展望

目前在lncRNAs研究中較成熟的技術(shù)包括熒光原位雜交﹑Northern印跡﹑實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)、RNA干擾﹑RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀、微陣列和RNA-Seq高通量測(cè)序，以及近年出現(xiàn)的新技術(shù)，如快速預(yù)測(cè) RNA與蛋白質(zhì)相互作用的catRAPID、RNA純化的染色質(zhì)分離技術(shù)等。新技術(shù)的出現(xiàn)為疾病的診斷及治療帶來(lái)希望。盡管對(duì)于lncRNAs的研究得到快速發(fā)展，仍有大量基礎(chǔ)和應(yīng)用問(wèn)題亟待解決。明確lncRNAs在不同類(lèi)型細(xì)胞分化和個(gè)體發(fā)育過(guò)程中的調(diào)控機(jī)制，將是基礎(chǔ)研究中的核心問(wèn)題。目前關(guān)于lncRNAs在疾病中的證據(jù)大多來(lái)自于表達(dá)水平上的差異，解析它們與疾病發(fā)生的因果關(guān)系和作用機(jī)制，將有可能為疾病的診斷和治療提供新的靶點(diǎn)和依據(jù)。另外，針對(duì)不同lncRNAs的結(jié)構(gòu)及作用方式設(shè)計(jì)新的研究技術(shù)體系也即將成為未來(lái)重要的研究方向。

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