復(fù)方丹皮酚醇溶液的皮膚毒性及刺激性的實驗研究

劉曉紅，孫 昕，焦 敬，宋來濤，楊 惠，張倩倩，趙 荻，江彬彬

1 材料與方法

1．1 一般資料

1．1．1 藥品及制備 復(fù)方丹皮酚醇溶液的處方組成：丹皮酚 0．5 g，麝香草酚 0．1 g，水楊酸 1 g，稀氨溶液100 ml，70%乙醇適量。制備方法：取丹皮酚，麝香草酚，水楊酸，稀氨溶液加70%乙醇適量，攪勻使溶解，濾過，加著色劑，在自濾器上添加70%乙醇使成全量 1000 ml，攪勻，即得。

1．1．2 實驗動物 健康成年無傷日本大耳白兔12只，體重 1．8～2．4 kg，健康無傷成年豚鼠 12 只，體重280～310 g，雌雄各半，雌性無孕，解放軍88醫(yī)院中心實驗室提供。實驗條件：溫度為18～29℃，相對濕度為40%～70%。

1．2 評價方法

1．2．1 皮膚急性毒性實驗 主要觀察家兔的行為活動、皮膚、飲食、體重和死亡情況。

1．2．2 皮膚刺激反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)［1］見表 1。

1．2．3 皮膚刺激強度評分標(biāo)準(zhǔn) 按皮膚刺激反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)評分，并計算平均分值以判斷刺激強度：①無刺激，分值 0～0．49；②輕度刺激，分值 0．5～2．99；③中度刺激，分值 3．0～5．99；④重度刺激，分值 6．0～8．0。

1．2．4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS16．0統(tǒng)計軟件，計量數(shù)據(jù)以±s表示，組間比較用t檢驗；計數(shù)資料用百分比表示，組間比較用χ2檢驗，P≤0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

表 4 復(fù)方丹皮酚醇溶液外用對豚鼠皮膚的刺激反應(yīng)

2 實驗方法

2．1 皮膚急性毒性實驗 將成年健康日本大耳白兔12只，隨機分3組，每組4只。在家兔右側(cè)背部脫毛50 cm2，24 h后分別涂基質(zhì)（對照組）、臨床應(yīng)用濃度（小劑量組）及臨床應(yīng)用濃度2倍（大劑量組）的復(fù)方丹皮酚醇溶液各1 ml，用膠布固定，連續(xù)觀察1周家兔的行為活動、皮毛光澤、飲食體重和死亡情況。并與對照組比較，如對完整皮膚無毒性反應(yīng)，則在其左側(cè)背部用細砂紙（＃400）在脫毛區(qū)造成擦傷，使皮膚出現(xiàn)密集出血點，在擦傷部位涂藥，觀察指標(biāo)同上［2］。

2．2 皮膚刺激實驗

2．2．1 急性皮膚刺激實驗 將健康成年豚鼠 12只，分為2組，每組6只。于實驗前24 h將豚鼠脊柱兩側(cè)去毛，不損傷表皮。分別左側(cè)去毛區(qū)涂小劑量及大劑量的復(fù)方丹皮酚醇溶液各1 ml，右側(cè)涂基質(zhì)作為對照，用膠布固定。給藥24 h后，用溫水洗去殘留藥物和基質(zhì)， 于 1、12、24、48、72 h 仔細觀察局部皮膚反應(yīng)，有無紅斑、水腫、出血點等病變，按表1進行評分［3－4］。

2．2．2 多次皮膚刺激實驗 動物分組、受試皮膚準(zhǔn)備及涂藥方法同 2．2．1，連續(xù)涂藥 7 d，1 次 ／d，停藥后觀察72 h，記錄局部紅斑水腫情況，觀察涂藥部位是否有出血點、色素沉著、皮膚粗糙（或菲薄）等情況，并記錄其發(fā)生時間及消退時間。

2．2．3 破損皮膚刺激實驗 動物分組、受試皮膚準(zhǔn)備同2．2．1，在脫毛部位造成局部擦傷，以滲血為度，分別涂以小劑量、大劑量復(fù)方丹皮酚醇溶液及基質(zhì)各 1 ml，具體方法及結(jié)果觀察同 2．2．1。

表 2 復(fù)方丹皮酚醇溶液外用完整和破損皮膚對白兔體重的影響（kg，±s）

表 2 復(fù)方丹皮酚醇溶液外用完整和破損皮膚對白兔體重的影響（kg，±s）

給藥前 完整皮膚給藥7 d后 破損皮膚給藥7 d后對照組 2．23±0．16 2．32±0．15 2．37±0．12小劑量組 2．20±0．16 2．27±0．17 2．36±0．10大劑量組 2．26±0．17 2．31±0．13 2．37±0．14

3 結(jié)果

3．1 皮膚急性毒性實驗 觀察涂藥后的白兔1周，三組白兔飲食、口腔黏膜、眼睛、皮膚毛發(fā)、四肢活動均無異常改變，體重?zé)o異常變化（表2），無中樞神經(jīng)系統(tǒng)異常表現(xiàn)，未見全身中毒反應(yīng)，無死亡。結(jié)果顯示臨床應(yīng)用濃度和臨床應(yīng)用濃度2倍的復(fù)方丹皮酚醇溶液外用在白兔完整或破損皮膚上，均未引起出現(xiàn)急性毒性反應(yīng)。

3．2 急性皮膚刺激實驗 結(jié)果顯示豚鼠的完整皮膚外用復(fù)方丹皮酚醇溶液后未見紅斑、水腫及出血點等反應(yīng)。見表3。

表 3 復(fù)方丹皮酚醇溶液對豚鼠皮膚急性刺激反應(yīng)

3．3 多次皮膚刺激實驗 結(jié)果顯示豚鼠完整皮膚多次外用復(fù)方丹皮酚醇溶液，局部未見紅斑、水腫、出血點、色素沉著、皮膚粗糙（或菲?。┑惹闆r。評分結(jié)果見表4。

3．4 破損皮膚刺激實驗 結(jié)果顯示不同濃度的復(fù)方丹皮酚溶液對豚鼠破損皮膚刺激評價的平均分值均＜0．49。

4 討論

皮膚病是日常生活中的常見病和多發(fā)病，尤其在戰(zhàn)爭中，已成為非戰(zhàn)斗減員的主要因素之一，嚴(yán)重影響官兵訓(xùn)練和作戰(zhàn)［5］。蟲咬性皮炎又名丘疹性蕁麻疹，是被蟲類叮咬，接觸其毒液或蟲體的粉毛而引起的皮炎。較為常見的有跳蚤、虱類、蠓、刺毛蟲、飛蛾、蚊、臭蟲、蜂等，以春、夏、秋季多見，尤其在野外訓(xùn)練及演習(xí)期間，發(fā)病率較高。由于昆蟲種類的不同和機體反應(yīng)性的差異，可引起叮咬處不同的皮膚反應(yīng)。一般為紅色風(fēng)團樣損害，有的可有偽足，中央可有小水皰，奇癢難忍。以往多采用激素軟膏治療，僅有治療的效果，沒有預(yù)防的作用，長期應(yīng)用還有一定的不良反應(yīng)。復(fù)方丹皮酚醇溶液不僅能有效的治療蟲咬性皮炎，還能防止蚊蟲的叮咬，做到了防治結(jié)合。丹皮酚具有很好抗炎、抗過敏作用，能顯著抑制由角叉菜膠引起的大鼠足腫脹，可明顯降低小鼠腹腔毛細血管通透性［6］。麝香草酚具有宜人的香氣和消毒抗菌止癢作用［7］。水楊酸具有抗菌、止癢止汗的作用，還可以促進藥物經(jīng)皮吸收及加速病灶消散吸收［8］。 稀氨溶液有驅(qū)蚊、防蟲蜇咬的作用［9］。

為了臨床用藥安全，本研究中做了皮膚急性毒性試驗和皮膚刺激試驗，在皮膚急性毒性試驗中，結(jié)果顯示臨床應(yīng)用濃度和臨床應(yīng)用濃度2倍的復(fù)方丹皮酚醇溶液外用在完整或破損白兔皮膚上，白兔飲食、口腔黏膜、眼睛、皮膚毛發(fā)、四肢活動均無異常改變，體重?zé)o異常變化，未引起急性毒性反應(yīng)。在皮膚刺激試驗中，結(jié)果顯示不同濃度的復(fù)方丹皮酚醇溶液外用于豚鼠的完整和破損皮膚，局部未見紅斑、水腫、出血點、色素沉著、皮膚粗糙（或菲?。┑惹闆r，均未見刺激反應(yīng)。本研究顯示了復(fù)方丹皮酚醇溶液具有良好的皮膚安全性，可安全用于臨床，為下一步臨床應(yīng)用提供了理論依據(jù)。復(fù)方丹皮酚醇溶液制作工藝簡單，原料價格低廉，安全性高，不良反應(yīng)小，有較好的應(yīng)用前景。

［1］袁伯俊，王治喬．新藥臨床前安全性評價與實踐［M］．北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院出版社，1997：152－154．

［2］徐叔云．藥理實驗方法學(xué)［M］．北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：1861－1862．

［3］吳春艷．氟曲馬唑乳膏的家兔皮膚刺激性試驗［J］．藥學(xué)與臨床研究，2010，18（5）：505－506．

［4］劉旭琴，馮玉香，程衛(wèi)東．黃連酊對家兔皮膚的刺激性研究［J］．西部中醫(yī)藥，2012，25（6）：13－14．

［5］劉曉紅，宋來濤，楊 惠，等．濟南軍區(qū)某部隊皮膚病情況調(diào)查［J］．實用醫(yī)藥雜志，2010，27（1）：73．

［6］胡云飛，徐國兵．牡丹皮及其主要成分丹皮酚的藥理作用研究進展［J］．安徽醫(yī)藥，2014，18（4）：589－590．

［7］黃 鵬，黃和平，粟進才．麝香草酚電化學(xué)檢測方法的研究［J］．中國藥事，2014，24（8）：747．

［8］段沅杏，李千鵬，張承明．水楊酸測定方法現(xiàn)狀分析［J］．云南化工，2014，37（8）：812.

［9］李建華，袁天錫，任國荃，等．中國人民解放軍醫(yī)療機構(gòu)制劑規(guī)范［S］．北京：中國人民解放軍總后勤部衛(wèi)生部，2002：128．