淫羊藿多糖含量的測(cè)定方法

于紅梅　肖傳剛　褚秀玲等

摘要： 采用苯酚-硫酸法對(duì)淫羊藿多糖含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，淫羊藿粗多糖的平均得率為5 81%，淫羊藿粗多糖中多糖的平均含量是42 36%，淫羊藿中多糖平均含量為2 46%。

關(guān)鍵詞： 淫羊藿；多糖；測(cè)定方法

中圖分類號(hào)： R284 2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2015）08-0314-02

淫羊藿是小檗科淫羊藿屬多年生草本植物，是我國(guó)傳統(tǒng)中藥之一，具有很高的藥用價(jià)值，《本草綱目》記載：“莖、葉入藥，辛溫?zé)o毒，有堅(jiān)筋骨、益精氣、補(bǔ)腰膝、強(qiáng)心力等作用 [1]。”淫羊藿的主要有效成分為淫羊藿苷和淫羊藿多糖。有研究發(fā)現(xiàn)，多糖能控制細(xì)胞分裂和分化，調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)與衰老，尤其在抗腫瘤、抗病毒、降血脂、增強(qiáng)免疫功能等方面的作用更明顯 [2-3]。淫羊藿多糖是一種具有發(fā)展前景的免疫調(diào)節(jié)劑，本研究即通過(guò)苯酚-硫酸法測(cè)定淫羊藿多糖的含量 [4]，為淫羊藿的應(yīng)用提供有利的理論依據(jù)，并為多糖更深入的研究提供部分理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1 1 儀器和試劑

HH-8恒溫水浴鍋、RE52CS旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、B-220恒溫水浴鍋、UV-1800分光光度計(jì)、粉碎機(jī)、離心機(jī)、計(jì)時(shí)器、電子分析天平等。

淫羊藿干品（購(gòu)自山東省聊城利民大藥店）、濃硫酸、95%乙醇、苯酚、葡萄糖，均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?/p>

1 2 方法

1 2 1 淫羊藿多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

將1 9 g 烘干的分析純葡萄糖溶于1 L重蒸水中，制成1 9 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液 [5]；然后取標(biāo)準(zhǔn)溶液1、2、3、4、5、6、7、8 mL分別用重蒸水稀釋到100 mL，制成濃度為19、38、57、76、95、114、133、152 μg/mL的溶液；取各濃度溶液0 6 mL置于干燥的潔凈試管中，加入 50 mg/mL 苯酚溶液1 2 mL，混合均勻，迅速加入5 0 mL濃硫酸，混合均勻，60 ℃水浴加熱30 min，于波長(zhǎng)490 nm處測(cè)定吸光度 [6]；重蒸水作為空白管對(duì)照。以糖濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)制得標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1 2 2 粗多糖的提取與純化

將購(gòu)買(mǎi)來(lái)的淫羊藿干品粉碎過(guò)40目篩，制成淫羊藿干粉。稱取3份淫羊藿干粉5 00 g，置于250 mL容量瓶中，加入125 mL蒸餾水，浸泡30 min，在90 ℃下提取3次，每次提取2 h，離心，合并濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將提取液濃縮至30 mL左右，加入95%乙醇，使得含醇量達(dá)到70%，靜置過(guò)夜，抽濾，室溫恒溫干燥，得到淺棕黃色的淫羊藿粗多糖固體，備用。

1 2 3 粗多糖的得率 將干燥得到的淫羊藿粗多糖稱質(zhì)量，減去濾紙的質(zhì)量，計(jì)算可得淫羊藿粗多糖的得率。

1 2 4 樣品溶液的制備 稱取0 19 g淫羊藿粗多糖，溶解于100 mL容量瓶中定容，作為樣品液。

1 2 5 精密度試驗(yàn) 精確吸取同一種樣品溶液4 mL，加水至100 mL；再精確吸取上述樣品液0 6 mL，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線方法操作，測(cè)吸光度，重復(fù)測(cè)定5次 [7-8]。

1 2 6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精確吸取同一種樣品溶液4 mL，加水至100 mL；再精確吸取上述樣品液0 6 mL，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線方法操作，每隔30 min測(cè)1次吸光度 [7-8]。

1 2 7 重復(fù)性試驗(yàn) 精確吸取同一種樣品溶液4 mL，加水至100 mL；再精確吸取上述樣品液0 6 mL，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線方法操作，測(cè)吸光度，重復(fù)測(cè)定5次 [7-8]。

1 2 8 加樣回收試驗(yàn) [7-8] 精確吸取同一種樣品溶液 4 mL，加水至100 mL，精確吸取上述樣品液2 mL，分別加入濃度不同的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液2 mL；再精確吸取上述樣品液 0 6 mL，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線方法操作，測(cè)吸光度。

1 2 9 樣品的含量測(cè)定 精確吸取樣品溶液4 mL，加水至100 mL；再精確吸取上述樣品液0 6 mL，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線方法操作，測(cè)吸光度。采用苯酚-硫酸法對(duì)淫羊藿多糖含量進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2 1 淫羊藿多糖測(cè)定方法的建立

通過(guò)對(duì)不同濃度葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液吸光度D的測(cè)定，結(jié)果顯示不同濃度葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液與相應(yīng)的吸光度D線性關(guān)系良好（圖1）。線性方程為y=0 005 7x+0 006 5，r2=0 999，表明葡萄糖濃度在19～152 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2 2 粗多糖的得率

將干燥得到的淫羊藿粗多糖稱質(zhì)量，減去濾紙的質(zhì)量，計(jì)算可得淫羊藿粗多糖的得率（表1），淫羊藿粗多糖得率的平均值為5 81%。

2 4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果如表3，樣品1、樣品2、樣品3在150 min內(nèi)的穩(wěn)定性RSD分別為0 49%、0 38%、0 44%，即試驗(yàn)在150 min之內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3 結(jié)論

采用苯酚-硫酸法對(duì)淫羊藿多糖含量進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得淫羊藿粗多糖的平均得率為5 81%，淫羊藿粗多糖中多糖的平均含量是42 36%，淫羊藿中多糖平均含量為2 46%。淫羊藿中的主要成分是淫羊藿苷和淫羊藿多糖，因此，對(duì)于淫羊藿多糖含量進(jìn)行測(cè)定是評(píng)價(jià)其質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)之一，為淫羊藿的應(yīng)用提供更有利的理論依據(jù)，同時(shí)也為多糖的研究提供部分理論基礎(chǔ)。本試驗(yàn)采用水提醇沉法提取淫羊藿多糖，該方法簡(jiǎn)單、易操作，并對(duì)提取的多糖進(jìn)行醇沉純化，使得結(jié)果更準(zhǔn)確。通過(guò)精密度試驗(yàn)和加樣回收試驗(yàn)結(jié)果可知，苯酚-硫酸法方法可靠、重復(fù)性高、顯色性穩(wěn)定性較好等，適合作為淫羊藿多糖含量的測(cè)定方法。

參考文獻(xiàn)：

[1] 陳 旋，張 翼，張劍波 植物多糖的研究進(jìn)展[J] 中國(guó)新藥雜志，2007，16（13）：1000-1005

[2]郭寶林，羅崇念，肖培根 淫羊藿多糖研究進(jìn)展[J] 中國(guó)中藥雜志，1998，23（7）：52-53

[3]茍春林，張 艷，李 健 寧夏構(gòu)杞多糖的提取分離與組成[J] 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（6）：246-247

[4]徐曉飛，陳 健 多糖含量測(cè)定的研究進(jìn)展[J] 食品科學(xué)，2009，30（21）：443-448

[5]劉寶巖 淫羊藿多糖提取方法的優(yōu)化[J] 廣西輕工業(yè)，2009，25（12）：7-8，23

[6]柳鳳祥，張萬(wàn)福 淫羊藿多糖的超聲波提取與含量測(cè)定研究[J] 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2008，39（4）：533-535

[7]胡 濤，黎云祥 四川淫羊藿多糖的含量測(cè)定[J] 西華師范大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2006，27（4）：400-402

[8]王 超，張曜武 改良-差示酚硫法的建立及對(duì)淫羊藿多糖的含量測(cè)定[J] 西北藥學(xué)雜志，2011，26（4）：257-259endprint