不同濃度激素、活性炭對紅顏草莓莖尖組培的影響

王瑋瑋　汪國蓮　孫玉東等

摘要： 研究不同濃度6-BA、KT、GA3、活性炭對紅顏草莓莖尖組培的影響。結果表明：6-BA主要影響紅顏草莓莖尖增殖，KT、GA3、[JP2]活性炭影響其生長；適宜紅顏草莓莖尖誘導的培養(yǎng)基配方為[JP3]MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L GA3+ 0.1 mg/L KT+0.2 mg/L IBA+1.0 g/L活性炭，增殖培養(yǎng)基配方為MS+1.0～1.5 mg/L 6-BA+0～0.1 mg/L GA3+0.1 mg/L KT+0.2 mg/L IBA+1.0～1.5 g/L活性炭，可根據(jù)瓶苗具體長勢進行微調。

關鍵詞： 草莓；激素；活性炭；莖尖；組培

中圖分類號： S668.404+.3 文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2015）08-0046-03

紅顏草莓別稱紅臉頰、日本99號，是從日本引進的大果型草莓新品種 [1]，也是2012年世界草莓大會推薦的主栽品種。紅顏草莓生長勢強，果個大，濃香，長圓錐形，糖度高，硬度大，耐貯運。近年來紅顏草莓在江蘇省淮安地區(qū)得到廣泛推廣，獲得眾多農(nóng)戶好評，逐漸發(fā)展成為當?shù)刂髟云贩N之一。但紅顏草莓育苗不易，擴繁系數(shù)及移栽成活率普遍不高，莖尖萌發(fā)率低且脫毒效果差，污染及玻璃化問題嚴重，給生產(chǎn)造成了較大損失。本研究分析了不同濃度6-BA、KT、GA3、活性炭對紅顏草莓莖尖組培的影響，以期為發(fā)展紅顏草莓脫毒快繁技術提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

選取健壯、無病蟲害的脫毒紅顏草莓新生匍匐莖作為試驗材料。

1.2 培養(yǎng)基

以MS為基本培養(yǎng)基，添加7～8 g/L瓊脂、30 g/L蔗糖，同時添加6-BA促進增殖，添加IBA促進生根，添加GA3、KT、活性炭促進生長。

1.3 試驗設計

參考國內(nèi)紅顏草莓組培的相關資料 [2]，設計MS+05 mg/L 6-BA+ 0.1 mg/L GA3+0.1 mg/L KT+0.2 mg/L IBA+1.0 g/L活性炭為誘導培養(yǎng)基，在解剖鏡下切取不同大小的莖尖進行誘導試驗，其大小分別為<0.5、0.5～1.0、1.0、1.5、2.0 mm，分析莖尖大小對其誘導的影響。

[JP3]以MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L GA3+0.1 mg/L KT+ 0.2 mg/L IBA配方為基礎，將活性炭濃度分別調為0、0.5、10、1.5、2.0 g/L，切取相同大小的莖尖進行誘導，分析不同濃度活性炭對其誘導的影響。

以MS+ 0.1 mg/L GA3+0.1 mg/L KT+0.2 mg/L IBA配方為基礎，添加相同濃度的活性炭，將6-BA濃度分別調為0.5、0.8、1.0、1.5、2.0 mg/L，分析不同濃度6-BA對其增殖的影響。

以MS+0.2 mg/L IBA配方為基礎，添加相同濃度的 6-BA、活性炭，同時調節(jié)GA3、KT濃度，使兩者濃度保持一致，分別為0、0.05、0.10、0.15、0.20 mg/L，分析不同濃度GA3、KT對其增殖的影響。

以MS+0.2 mg/L IBA配方為基礎，添加相同濃度的 6-BA、GA3、KT，將活性炭濃度分別調為0、0.5、1.0、1.5、2.0 g/L， 分析不同濃度活性炭對其增殖的影響。

1.4 試驗方法

將1 L誘導培養(yǎng)基分裝為30瓶，接種后置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：溫度25 ℃、濕度80%、光照度1 800～2 000 lx、每天光照10 h，每隔5 d觀察并記錄莖尖誘導情況。

將1 L增殖培養(yǎng)基分裝為25瓶，接種后置于培養(yǎng)室中進行光培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：溫度25～27 ℃、濕度80%、光照度 2 000～3 000 lx、每天光照16 h，每隔5 d觀察并記錄增殖情況。

本試驗具有連續(xù)性、相關性，根據(jù)上一組試驗結果，合理調節(jié)濃度，進行下一組試驗。

2 結果與分析

2.1 莖尖誘導試驗

紅顏草莓莖尖接入誘導培養(yǎng)基后，置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。第2天有明顯褐變發(fā)生，3～5 d后生長點適應了培養(yǎng)環(huán)境，表現(xiàn)出生命跡象，同時形成愈傷組織；7～10 d后開始萌動，生出嫩葉，此時可轉至培養(yǎng)室中培養(yǎng)；20 d后長成幼株，伴有新芽生出；40 d后形成完整植株，株高2 cm左右，可轉至增殖培養(yǎng)基中。

2.1.1 莖尖大小對紅顏草莓誘導的影響

由表1可見，紅顏草莓莖尖誘導時，莖尖大小對誘導的影響占主導地位，激素及活性炭的作用相對較小。莖尖小于0.5 mm時，成苗率較低且瓶苗長勢弱，組培難度極大，難以滿足規(guī)?；a(chǎn)的需求；莖尖為1.0 mm時，褐變程度一般，具備萌發(fā)的生命力，能夠形成適宜的愈傷并增殖；莖尖為1.5～2.0 mm時，莖尖生命力強，但增殖能力降低、污染率上升，對擴繁不利。

2.1.2 活性炭濃度對紅顏草莓誘導的影響

由表2可見，紅顏草莓莖尖誘導時，隨著活性炭濃度增大，有利于減輕紅顏草莓褐變程度，提高生長點生命力，促進愈傷形成，對成苗率有較大影響?；钚蕴繚舛葹?～0.5 g/L時，減輕生長點褐變作用不明顯；活性炭濃度為1.0 g/L時，生長點褐變程度一般，相對容易成活，幼苗長勢健壯，增殖系數(shù)較大；活性炭濃度為1.5～2.0 g/L時，對減輕生長點褐變和促進生長點生命力作用沒有顯著提升。

[FK（W8][HT6H][STHZ][JZ]表2 活性炭濃度對紅顏草莓誘導的影響

[HJ*5][BG（！][BHDFG3，WK8，WK6*2。8W]活性炭濃度（g/L） 接種數(shù)（個） 褐變 生命力 成活率（%） 污染率（%） 成苗率（%） 增殖系數(shù) 株高（cm）

2.2 增殖試驗

紅顏草莓莖尖誘導成苗后，將幼苗轉至增殖培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)室中培養(yǎng)。3～5 d后幼苗適應了新的培養(yǎng)環(huán)境，經(jīng)過8～10 d的營養(yǎng)儲備，開始表現(xiàn)出明顯的生長，形成愈傷，生出新葉、新芽、新根；15 d后進入快速增殖期；40～50 d后，瓶苗增殖放緩、長勢衰退，須轉至新的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

2.2.1 6-BA濃度對紅顏草莓增殖的影響

由表3可見，6-BA 濃度主要是對紅顏草莓增殖產(chǎn)生影響，并延長其增殖周期。當6-BA濃度在1.0 mg/L以下時，瓶苗單株長勢較壯、增殖緩慢；當6-BA濃度為1.0～1.5 mg/L時，愈傷形成相對整齊、大小合適，瓶苗健壯、無玻璃化，增殖系數(shù)較高；當6-BA濃度為2.0 mg/L時，愈傷組織偏大，葉片較小、葉柄細長，瓶苗有玻璃化傾向。

2.2.2 GA3、KT濃度對紅顏草莓增殖的影響

的促進作用不明顯；當GA3、KT濃度為0.10 mg/L時，瓶苗長勢較為健壯、旺盛，生長期較長，紅顏草莓增殖系數(shù)、株高有明顯提升，參考相關資料選擇KT濃度為0.1 mg/L，GA3濃度為0～0.1 mg/L較適宜；當GA3、KT濃度為0.15 mg/L及以上時，瓶苗長勢較快，但葉片瘦弱、葉柄較長，有徒長傾向，部分瓶苗在缺乏營養(yǎng)時出現(xiàn)開花現(xiàn)象，可能是GA3濃度過高所致。

2.2.3 活性炭濃度對紅顏草莓增殖的影響

由表5可見，在紅顏草莓增殖過程中，活性炭具有促進生長、提升瓶苗品質的作用 [3]。當活性炭濃度為0～0.5 g/L 時，其對紅顏草莓增殖的作用不明顯；當活性炭濃度為1.0～1.5 g/L時，瓶苗的適應期、儲備期明顯縮短，有利于形成壯苗，增殖期延長，增殖系數(shù)有所增加；當活性炭濃度為2.0 g/L時，活性炭產(chǎn)生一定的吸附作用，對紅顏草莓增殖產(chǎn)生抑制。

3 結論與討論

理論上說，當紅顏草莓莖尖為0.2～0.3 mm時，生產(chǎn)出的紅顏草莓組培苗具有較好的脫毒效果，但實際生產(chǎn)中卻較難實現(xiàn)，難以規(guī)?；a(chǎn)。其原因主要有：（1）生長點幼嫩、細微，在解剖鏡下切取時間較長導致活性喪失，具有較高的死亡率；同時難以準確切取，無法保證每個莖尖都達到脫毒水平；（2）操作過程中，乙醇燈高溫、送風等環(huán)境因素，以及刀片、鑷子造成的損傷和污染等情況，直接導致其死亡率大幅增加；（3）培養(yǎng)環(huán)境、培養(yǎng)基配方也是決定最終成苗率的關鍵。本研究表明，切取1 mm左右的莖尖較為實際、合理，能夠在短時間內(nèi)建立紅顏草莓的組培快繁體系，規(guī)?；a(chǎn)紅顏組培苗。在提升種苗品質方面，可以通過以下方法達到脫毒效果：（1）引進紅顏脫毒瓶苗進行擴繁；（2）引進脫毒種苗進行隔離栽培，培養(yǎng)匍匐莖并建立組培體系；（3）采用高溫處理結合莖尖誘導的方式，直接脫去大部分病毒 [4]。

紅顏草莓莖尖組培過程中，激素、活性炭對其影響較大，適宜的激素、活性炭濃度是高效生產(chǎn)組培苗的關鍵。本研究表明：紅顏草莓莖尖誘導期間，培養(yǎng)基配方MS+0.5 mg/L 6-BA+ 0.1 mg/L GA3+0.1 mg/L KT+0.2 mg/L IBA+ 1 g/L 活性炭，能夠有效減輕褐變，顯著提升生長點的生命力，促進萌發(fā)，使幼苗健壯；增殖擴繁期間，配方MS+1.0～15 mg/L 6-BA+0～0.1 mg/L GA3+0.1 mg/L KT+0.2 mg/L IBA+1.0～1.5 g/L活性炭，能夠有效縮短瓶苗的適應期、儲備期，促進瓶苗生長增殖，瓶苗品質較高，增殖后期能生出完整的根系，邊繼代邊生根，省時省工 [5]。

實際生產(chǎn)中，對每批種苗應根據(jù)生長情況，在合理范圍內(nèi)微調激素與活性炭的用量。紅顏草莓誘導時難以形成叢生芽，初代增殖低，但繼代1～2次后增殖系數(shù)會顯著增加，達到3～5倍以上。理論上，以1 000株作為基數(shù)，增殖系數(shù)3倍，成活率90%，1年6～8個增殖周期，可生產(chǎn)紅顏組培苗50萬株左右，可解決生產(chǎn)紅顏草莓脫毒種苗擴繁上的難題，能夠創(chuàng)造較大的經(jīng)濟效益和社會效益。

參考文獻： [HJ1.8mm]

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