兩種培養(yǎng)方法聯(lián)合檢測(cè)在女性生殖道支原體感染中的應(yīng)用

代 莉，吳鴻君，司志霖

（遂寧市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川遂寧629000）

支原體是引起人類泌尿生殖道感染的重要病原體，是能在無生命培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖的最小原核細(xì)胞型微生物，可引起女性陰道炎、宮頸炎及不孕癥等［1］。所以，如果能夠準(zhǔn)確檢測(cè)人型支原體（Mh）和解脲支原體（Uu）將對(duì)臨床臨床診斷和治療有非常大的幫助。已有的文獻(xiàn)報(bào)道表明，支原體培養(yǎng)應(yīng)當(dāng)包括液體增菌和固體平板培養(yǎng)這2個(gè)步驟才算完整［2］，但是目前臨床上普遍采用的方法是單一的液體培養(yǎng)法，用于Uu和Mh的培養(yǎng)檢測(cè)。僅僅通過第一步的培養(yǎng)結(jié)果，從而報(bào)告支原體感染的陽(yáng)性或者陰性是不嚴(yán)謹(jǐn)?shù)?，非常容易造成臨床上的誤診、誤治，應(yīng)引起醫(yī)務(wù)工作者的高度重視。所以聯(lián)合應(yīng)用液體培養(yǎng)法與固體培養(yǎng)法檢測(cè)具有重要意義，筆者對(duì)兩種方法聯(lián)合檢測(cè)的臨床意義進(jìn)行了探討分析，現(xiàn)將本研究的結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年2月至2013年5月于本院婦產(chǎn)科門診就診的女性患者，這些患者均為疑似生殖道支原體感染，共340例，年齡22～56歲。

1.2 標(biāo)本采集 按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》采集，由臨床醫(yī)生取宮頸或陰道后穹窿分泌物立即送檢。

1.3 儀器與試劑 選用普通的光學(xué)顯微鏡（CX21奧林巴斯）與HF151UVCO2培養(yǎng)箱。支原體固體培養(yǎng)平板由中山達(dá)安基因有限公司提供；液體培養(yǎng)基由鄭州安圖綠科生物工程有限公司提供。

1.4 方法 嚴(yán)格按試劑說明書進(jìn)行檢測(cè)及結(jié)果判斷。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以百分率表示，組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 支原體的檢出情況 經(jīng)液體培養(yǎng)鑒定，340例生殖道疑似支原體感染者的標(biāo)本中共檢出支原體陽(yáng)性177例，總檢出率為52.1%（177／340），其中檢出的Uu單一感染者144例，檢出率為42.4%（144／340）；Mh 單 一 感 染 者 檢 出9 例，檢 出 率 為2.6%（9／340）；Uu和Mh雙重感染檢出24例，檢出率為7.1%（24／340），Uu檢出率明顯高于Mh檢出率。經(jīng)固體培養(yǎng)法，檢出支原體陽(yáng)性148例，總檢出率為43.5%。見表1。

表1 兩種培養(yǎng)方法檢測(cè)結(jié)果（n）

2.2 藥敏試驗(yàn) 分離出的支原體對(duì)11種抗菌藥物的耐藥率見表2

表2 177例陽(yáng)性標(biāo)本對(duì)11種抗菌藥物的耐藥率（%）

3 討 論

支原體介于細(xì)菌與病毒之間，是一類沒有細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物，是能在無生命培養(yǎng)基中繁殖的最小微生物。致病性支原體對(duì)人體上皮細(xì)胞具有極強(qiáng)的親和性，支原體定位于人體呼吸道和生殖道黏膜，從而能造成黏膜的局部細(xì)胞損傷，這可能是其致病原因［3］。

目前人類泌尿生殖道中分離到的支原體致病力較強(qiáng)的主要是Uu和Mh。Mh在泌尿生殖道中分解精氨酸，支原體中Uu在生長(zhǎng)過程中分解尿素。國(guó)內(nèi)外商品化的支原體液體培養(yǎng)基所依據(jù)的原理如下，Uu、Mh對(duì)尿素和精氨酸的分解，使液體培養(yǎng)基pH 值上升，導(dǎo)致指示劑呈紅色來提示支原體的生長(zhǎng)。液體培養(yǎng)法簡(jiǎn)便快速，還可以提供陽(yáng)性標(biāo)本的藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果，為臨床醫(yī)生合理使用抗菌藥物提供依據(jù)。但是由于是以化學(xué)反應(yīng)來判斷支原體的有無。雖然試劑的研發(fā)者已經(jīng)在里面添加了抑制革蘭陰性、陽(yáng)性菌的藥物，但并不能抑制除支原體外所有微生物的生長(zhǎng)。這導(dǎo)致了化學(xué)反應(yīng)的特異性有限，會(huì)受到許多因素的干擾，試驗(yàn)容易產(chǎn)生假陽(yáng)性。所以，僅憑顏色的變化來判斷支原體的生長(zhǎng)的方法是不準(zhǔn)確的，并不能確定有支原體的生長(zhǎng)，這種方法僅能作為支原體的初篩實(shí)驗(yàn)。Uu 和Mh能夠于固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，同時(shí)形成特征性較強(qiáng)的菌落［4］，以此作為確診實(shí)驗(yàn)比較繁瑣，難以掌握且缺乏較好的培養(yǎng)基［5］。筆者對(duì)兩種培養(yǎng)方法進(jìn)行研究分析，固體培養(yǎng)法陽(yáng)性率為43.5%，液體培養(yǎng)法檢出率為52.1%，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，兩種檢測(cè)方法比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

本研究中，感染的支原體種類主要為Uu，而且以Uu單獨(dú)感染為主。Uu可引起宮內(nèi)感染，導(dǎo)致胎兒或嬰兒多種問題，其傳播途徑主要是性傳播，并因慢性持續(xù)性感染導(dǎo)致男性和女性不育癥［6］。本實(shí)驗(yàn)中Uu和Mh混合感染不多，Mh單獨(dú)感染較少，結(jié)果與其他文獻(xiàn)報(bào)道一致［7－9］。由于支原體無細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，因此β－內(nèi)酰胺類藥物對(duì)其治療無效，四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類和喹諾酮類藥物在這類支原體的感染治療中較為常用，但抗菌藥物的濫用易誘導(dǎo)生成支原體耐藥株［10］。從藥敏試驗(yàn)結(jié)果來看，Mh對(duì)美滿霉素、強(qiáng)力霉素耐藥率較低，Uu對(duì)美滿霉素、強(qiáng)力霉素、交沙霉素耐藥率較低。已有的國(guó)外研究表明，Mh對(duì)16環(huán)Jos 較敏感，而對(duì)14、15 環(huán)大環(huán)內(nèi)酯藥物ERY、Rox、AZM 具有“天然耐藥性”［11］。本研究的結(jié)果與其一致。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，四環(huán)素類藥物敏感性較好，傳統(tǒng)治療泌尿生殖道感染的一些抗菌藥物如喹諾酮類氧氟沙星、司帕沙星、加替沙星，Uu、Mh對(duì)其都具有較高的耐藥率（22.2%～71.7%），可能與此類藥物濫用現(xiàn)象嚴(yán)重有關(guān)，也可能是病原體獲得tetM 耐藥基因所致［12］。從研究結(jié)果來看，不經(jīng)支原體培養(yǎng)及藥敏實(shí)驗(yàn)而經(jīng)驗(yàn)用藥很容易導(dǎo)致支原體感染治療的失敗。對(duì)有泌尿道感染癥狀的患者進(jìn)行支原體培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)十分重要，在臨床應(yīng)根據(jù)藥敏有選擇地使用。

綜上所述，用固體培養(yǎng)法提高檢驗(yàn)特異性，用液體培養(yǎng)法進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)，兩者聯(lián)合應(yīng)用是控制支原體培養(yǎng)假陽(yáng)性的可靠方法，同時(shí)治療時(shí)根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選擇抗菌藥物，是避免經(jīng)驗(yàn)用藥的無效性和減緩耐藥株產(chǎn)生的有效方法，具有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

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