尿沉渣細(xì)菌定量檢查與尿培養(yǎng)檢測結(jié)果的相關(guān)性分析

李靜芳，文 麗，周友全，郭鳳麗，楊 麗△

（1.云南省腫瘤醫(yī)院／昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南昆明650118；2.會澤縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南曲靖654200）

成年人最常見的感染性疾病是尿路感染，也是泌尿系統(tǒng)常見的疾病之一。男女比例約為1∶9［1］，尿路感染如果不及時(shí)治療常會變成慢性感染，嚴(yán)重地影響患者的生活質(zhì)量。尿路感染實(shí)驗(yàn)室診斷的金標(biāo)準(zhǔn)是中段尿細(xì)菌培養(yǎng)［2］，對泌尿系統(tǒng)感染的診斷有著非常重要的價(jià)值，但是尿液的細(xì)菌定量培養(yǎng)從標(biāo)本的采集、培養(yǎng)到出具報(bào)告，耗時(shí)比較長，常超過48h，一般是3 d，不能及時(shí)地為臨床提供診療依據(jù)。而尿沉渣細(xì)菌定量計(jì)數(shù)檢查耗時(shí)較短，當(dāng)天可作出診斷。UF－1000i尿有形成分分析儀采用紅色半導(dǎo)體激光、核酸熒光染色、流式細(xì)胞等技術(shù)進(jìn)行尿的有形成分分析，通過測定其前向散射光、側(cè)向散射光、熒光強(qiáng)度和電阻抗的變化可報(bào)告12個(gè)參數(shù)，對白細(xì)胞、細(xì)菌等5種尿有形成分進(jìn)行定量分析［3］。若尿沉渣細(xì)菌定量計(jì)數(shù)可作為篩選尿路感染的一項(xiàng)指標(biāo)，就會為臨床縮短確診時(shí)間，及時(shí)為患者治療尿路感染。

1 資料和方法

1.1 一般資料 2013年9月至2013年12月臨床疑似尿路感染患者191例，其中女97例，男94例。在帶塞的無菌試管中留取清潔的中段尿10mL 立即送檢，同時(shí)進(jìn)行尿細(xì)菌定量培養(yǎng)和UF－1000i尿有形成分分析。

1.2 儀器與試劑 UF－1000i全自動(dòng)尿有形成分分析儀（日本Sysmex公司產(chǎn)品和配套試劑），哥倫比亞血瓊脂平皿、MAC 平皿和沙保弱平皿（鄭州安圖生物工程股份有限公司）、細(xì)菌鑒定使用法國梅里埃公司的Vtike－2 Compact全自動(dòng)微生物分析儀。

1.3 方法

1.3.1 尿細(xì)菌定量培養(yǎng)和菌種鑒定 用1μL 定量接種環(huán)按SOP文件取充分混勻的清潔中段尿一環(huán)接種在哥倫比亞血平皿上，再用相同的方法分別接種MAC 平皿和沙保弱平皿，置于35 ℃孵育箱培養(yǎng)18～24h，用于細(xì)菌菌落計(jì)數(shù)。若革蘭陽性球菌菌落計(jì)數(shù)104CFU／mL 或是革蘭陰性菌菌落計(jì)數(shù)105CFU／mL則判斷為尿細(xì)菌培養(yǎng)陽性［4］。（當(dāng)尿中有2 種致病菌生長時(shí)，選擇其菌落的計(jì)數(shù)接近或者104CFU／mL 的細(xì)菌為陽性統(tǒng)計(jì)菌，如果有兩種以上的雜菌生長則視為污染）［3］，并對尿培養(yǎng)為陽性的菌落進(jìn)行進(jìn)一步的菌種鑒定。

1.3.2 UF－1000i尿有形成分分析 將接種后剩余的尿液在2 h內(nèi)用UF－1000i全自動(dòng)尿有形成分分析儀進(jìn)行檢測，記錄白細(xì)胞和細(xì)菌定量計(jì)數(shù)結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 將尿細(xì)菌培養(yǎng)的結(jié)果和尿沉渣分析的結(jié)果用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，以細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果陽性為標(biāo)準(zhǔn)，繪制受試者工作特征曲線（ROC）曲線、計(jì)算和分析曲線下面積（AUC），求出尿沉渣白細(xì)胞和細(xì)菌定量計(jì)數(shù)的診斷閾值。

2 結(jié) 果

2.1 尿液細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果 191例尿液標(biāo)本中有12例培養(yǎng)出3種菌，疑似污染，視為不合格標(biāo)本。余下179例合格標(biāo)本中培養(yǎng)陽性為71例，陽性率為39.7%，其中男性標(biāo)本27 例，女性標(biāo)本44例。培養(yǎng)結(jié)果為：革蘭陰性桿菌50 株，占70.4%（其中大腸埃希菌有41 株，占57.8%），革蘭陽性球菌21 株，占29.6%（其中腸球菌有15株，占21.1%）。

2.2 UF－1000i尿沉渣分析儀檢測白細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)菌計(jì)數(shù)的ROC曲線 用UF－1000i檢測179例尿標(biāo)本，白細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)菌計(jì)數(shù)結(jié)果用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件繪制篩選尿路感染的ROC曲線。見圖1。以ROC 曲線的左上角距離最近點(diǎn)，即約登（Youden）指數(shù)最大者作為最佳陽性的判斷值。UF－1000i尿沉渣分析儀用于診斷尿路感染的閾值，細(xì)菌計(jì)數(shù)為1 024.5個(gè)／微升，白細(xì)胞計(jì)數(shù)為135.8個(gè)／微升，細(xì)菌和白細(xì)胞的AUC 分別為0.946和0.713。見表1。

圖1 UF－1000i檢測尿液白細(xì)胞和細(xì)菌的ROC曲線

表1 白細(xì)胞和細(xì)菌定量的ROC曲線指標(biāo)

2.3 UF－1000i尿沉渣分析儀結(jié)果 以細(xì)菌計(jì)數(shù)1 024.5個(gè)／微升和白細(xì)胞計(jì)數(shù)135.8個(gè)／微升為診斷閾值。179例標(biāo)本檢出細(xì)菌陽性59例，白細(xì)胞陽性45例。兩者與尿細(xì)菌定量培養(yǎng)之間的關(guān)系詳見表2。根據(jù)上述的檢測結(jié)果制作三線表，可計(jì)算出在該診斷閾值下的細(xì)菌和白細(xì)胞計(jì)數(shù)及其聯(lián)合應(yīng)用于診斷尿路感染的評價(jià)數(shù)據(jù)，結(jié)果見表3。

表2 UF－1000i檢測白細(xì)胞數(shù)、細(xì)菌和與尿定量細(xì)菌培養(yǎng)的關(guān)系（n）

表3 細(xì)菌、白細(xì)胞單獨(dú)或聯(lián)合在篩選尿路感染中的價(jià)值（%）

3 討 論

實(shí)驗(yàn)室診斷尿路感染的金標(biāo)準(zhǔn)一直以來都是中段尿尿細(xì)菌定量培養(yǎng)，但是從培養(yǎng)到出具報(bào)告，時(shí)間均在2d以上，耗時(shí)長，費(fèi)用高。本試驗(yàn)按照尿中革蘭陽性球菌菌落計(jì)數(shù)104CFU／mL，或是革蘭陰性菌菌落計(jì)數(shù)105CFU／mL判斷為尿細(xì)菌培養(yǎng)陽性，作為尿路感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)。在179份尿標(biāo)本中有71份標(biāo)本細(xì)菌培養(yǎng)為陽性，陽性率為39.7%，其中革蘭陰性桿菌占70.4%，尤以大腸埃希菌多見（57.8%）；革蘭陽性球菌21株，占29.6%，以腸球菌多見（21.1%）。因?yàn)槟蚣?xì)菌培養(yǎng)可直接查到患病的病原，所以在本試驗(yàn)中作為標(biāo)準(zhǔn)。

UF－1000i全自動(dòng)尿有形成分分析儀采用紅色半導(dǎo)體激光、核酸熒光染色技術(shù)、流式細(xì)胞等技術(shù)，對尿液有形成分進(jìn)行多角度散射光、多級別熒光和電子基團(tuán)的檢測，而且UF－1000i的檢測通道是雙通道，分別為沉渣通道和細(xì)菌通道，單獨(dú)的細(xì)菌通道可以對細(xì)菌進(jìn)行特異性的核酸熒光染色，有效地避免了其他成分的干擾，使UF－1000i對細(xì)菌的檢出和定量更為準(zhǔn)確［5］。有文獻(xiàn)報(bào)道，對尿液細(xì)菌計(jì)數(shù)UF－1000i具有良好的重復(fù)性和線性［6］。

根據(jù)尿沉渣分析和尿培養(yǎng)結(jié)果繪制ROC曲線得出診斷尿路感染的閾值，細(xì)菌計(jì)數(shù)為1 024.5 個(gè)／微升，白細(xì)胞計(jì)數(shù)為135.8個(gè)／微升，細(xì)菌和白細(xì)胞的AUC分別為0.946和0.713。AUC越接近1，說明診斷效果越好。AUC在0.5～0.7時(shí)有一定的準(zhǔn)確性；AUC在0.9以上有較高的準(zhǔn)確性。

從表3 可以看出，作為獨(dú)立的檢測項(xiàng)目，細(xì)菌計(jì)數(shù)（1 024.5個(gè)／微升）要比白細(xì)胞計(jì)數(shù)（135.8個(gè)／微升）的診斷性能更好。單獨(dú)以細(xì)菌作為篩查指標(biāo)時(shí)，其靈敏度為78.9%，特異度為97.2%，陽性預(yù)測值為94.9%，陰性預(yù)測值為87.5%，假陽性率為2.8%，假陰性率為21.1%，準(zhǔn)確性為89.9%。UF－1000i細(xì)菌計(jì)數(shù)在臨床使用中存在21.1%假陰性，分析其病原菌時(shí)發(fā)現(xiàn)有6株腸球菌和4株牛鏈球菌，此類細(xì)菌在同類研究假陰性標(biāo)本中也有發(fā)現(xiàn)［7］。在感染早期，腸球菌類細(xì)菌因?yàn)樯L的營養(yǎng)要求比較高會造成尿標(biāo)本細(xì)菌計(jì)數(shù)結(jié)果偏低而呈假陰性。其中存在2.8%的假陽性，筆者分析其原因可能是：（1）儀器將其他有形成分誤認(rèn)為是細(xì)菌。（2）患者已服用過抗菌類藥物，菌量過少或被抑制不能培養(yǎng)出來。單獨(dú)以白細(xì)胞為篩查指標(biāo)時(shí)，其靈敏度為44.9%，特異度為87.0%，陽性預(yù)測值為68.9%，陰性預(yù)測值為71.2%，假陽性率為13.0%，假陰性率為55.1%，準(zhǔn)確性為69.8%。所以白細(xì)胞計(jì)數(shù)對尿路感染的診斷起到了一定的作用，但假陰性率較高。當(dāng)白細(xì)胞發(fā)生變性、崩解或聚集成團(tuán)時(shí)，易被儀器誤認(rèn)，從而導(dǎo)致前向散射光和熒光強(qiáng)度的改變，使檢測結(jié)果為假陰性，可致尿白細(xì)胞漏檢［8］。當(dāng)兩者聯(lián)合檢測，以滿足其中任一條件作為尿路感染的篩查指標(biāo)時(shí)，雖然靈敏度有所提高，但假陽性也跟著上升，陽性患者不能被及時(shí)有效地診斷。當(dāng)以同時(shí)滿足兩者的條件作為篩查尿路感染的指標(biāo)時(shí)，可得到較好的診斷效果，特異度達(dá)98.1%，準(zhǔn)確度達(dá)83.8%，陽性預(yù)測值達(dá)95.7%，陰性預(yù)測值為79.6%，但假陰性也高達(dá)37.5%，表明在臨床使用中漏檢的概率也很高。

本試驗(yàn)中得出診斷尿路感染的閾值為細(xì)菌計(jì)數(shù)1 024.5個(gè)／微升和白細(xì)胞計(jì)數(shù)135.8個(gè)／微升，和文獻(xiàn)報(bào)道中所得閾值細(xì)菌計(jì)數(shù)2 944.5個(gè)／微升和白細(xì)胞計(jì)數(shù)91.5個(gè)／微升有所差異［3］。筆者分析其原因可能是：（1）收集的尿液總樣本量較少，采集的標(biāo)本以住院患者為主，細(xì)菌計(jì)數(shù)的數(shù)據(jù)主要集中在0～5 000個(gè)／微升，白細(xì)胞計(jì)數(shù)主要集中在0～100個(gè)／微升，得到的數(shù)據(jù)不呈正態(tài)分布。（2）不同細(xì)菌的營養(yǎng)要求和生長速度有差異。（3）尿培養(yǎng)和尿細(xì)菌定量的測定存在有時(shí)間差，會對結(jié)果造成一定的影響。

綜上所述，對臨床疑似尿路感染的標(biāo)本，UF－1000i全自動(dòng)尿有形成分分析儀能夠快速有效地進(jìn)行檢測，細(xì)菌和白細(xì)胞計(jì)數(shù)的聯(lián)合分析可篩除大部分陰性結(jié)果，對尿細(xì)菌培養(yǎng)的陽性預(yù)測性高，可降低檢驗(yàn)成本和減輕工作負(fù)擔(dān)，但存在一定的假陰性，故不可替代尿細(xì)菌培養(yǎng)。

［1］賴?yán)A，夏云，馬朦朦，等.尿液的4種檢測方法在尿路感染診斷中的有效性比較［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2010，39（24）：3350－3352.

［2］盧國光，方美丹，阮奕，等.ROC曲線在UF－1000i尿沉渣分析儀篩查尿路感染中的價(jià)值［J］.浙江實(shí)用醫(yī)學(xué)，2012，17（5）：328－329.

［3］湯玲，嚴(yán)子禾，胡仁靜.UF－1000i尿沉渣分析儀在診斷尿路感染中的應(yīng)用［J］.職業(yè)與健康，2010，26（23）：2768－2769.

［4］劉成玉，羅春麗.臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)［M］.北京：科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2005：182－183.

［5］吳華軍，呂青山，侯史文，等.UF－1000尿液分析儀在尿路感染診斷中的應(yīng)用［J］.浙江實(shí)用醫(yī)學(xué)，2010，15（4）：324－326.

［6］黃松音，胡俊庭，林海雄，等.UF－1000i全自動(dòng)尿沉渣分析儀的應(yīng)用評價(jià)［J］.中國醫(yī)藥導(dǎo)刊，2009，11（8）：1352－1353.

［7］黃春光，楊潔飛，李小平.UF－1000i尿沉渣分析系統(tǒng)在尿路感染快速診斷中的應(yīng)用［J］.實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2009，27（5）：489－490.

［8］高飛，桂木梅.UF－100和干化學(xué)篩檢尿路感染的臨床意義［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2004，33（8）：1166－1168.