云南白藥對(duì)金黃色葡萄球菌溶血現(xiàn)象和血漿凝固能力的影響＊

周 湧，黃少隆，王杰敏，楊衛(wèi)東，江俊兵

（東莞市第五人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東東莞523905）

金黃色葡萄球菌，尤其是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、多重耐藥菌株所導(dǎo)致的感染死亡人數(shù)不斷增加［1］，傳統(tǒng)抗菌藥物治療已經(jīng)難以應(yīng)對(duì)日益嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)［2］，這迫使研究人員必須努力尋求新型的抗菌藥物。云南白藥是我國(guó)最著名的中藥之一，由多種中草藥植物組合而成［3］，即使不需要無(wú)菌條件保存，直接將其涂抹于傷口上也無(wú)需擔(dān)心引起感染。因此，筆者推測(cè)，云南白藥可能具有抑制金黃色葡萄球菌毒力的作用。本研究通過(guò)觀察云南白藥對(duì)金黃色葡萄球菌溶血現(xiàn)象和血漿凝固現(xiàn)象的影響，探討了云南白藥與金黃色葡萄球菌毒力表達(dá)間的內(nèi)在聯(lián)系。

1 材料與方法

1.1 材料 金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株（ATCC29213）；云南白藥為云南白藥集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)；哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基購(gòu)自廣州迪景微生物科技有限公司；無(wú)菌注射用水為安徽雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司產(chǎn)品；卡尺（浙制01010235號(hào)）；人血漿由本研究的志愿者提供。

1.2 方法

1.2.1 取80g云南白藥（藥粉）溶于500mL的無(wú)菌水注射用水中，放于搖床上振蕩，24h后離心取上清液，此時(shí)上清液濃度為16%。將16%的藥液分別配制為8%、4%、2%的藥液備用。

1.2.2 取5 個(gè)9cm 血平板，編號(hào)1～5。將16%、8%、4%、2%的藥液各取200μL 加于1～4 號(hào)平板上，5 號(hào)平板加200 μL無(wú)菌注射用水，用無(wú)菌棉簽涂布均勻，待干。

1.2.3 金黃色葡萄球菌ATCC29213轉(zhuǎn)種培養(yǎng)24h后，配制為0.5麥?zhǔn)蠞岫葐挝唬∕CF）的菌液。用接種針在5個(gè)含不同藥液濃度血平板上進(jìn)行點(diǎn)種，24h后觀察并測(cè)量溶血環(huán)。重復(fù)以上試驗(yàn)10次以減少誤差。

1.2.4 取試管加入3mL 注射用水和1mL 血漿，配成1∶4血漿備用。取5個(gè)不同濃度藥液作用的金黃色葡萄球菌分別用0.1MCF的菌液加20μL于備用血漿中，37℃溫育24h，觀察凝固現(xiàn)象，測(cè)凝固物的高度。重復(fù)以上試驗(yàn)10 次以減少誤差。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SSPS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，組間比較用方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 云南白藥對(duì)金黃色葡萄球菌溶血環(huán)直徑的影響 不同濃度的云南白藥藥液對(duì)金黃色葡萄球菌的溶血作用效果不同。16%、8%、4%、2%、0%的藥液作用后的溶血環(huán)直徑分別為（2.97±0.39）、（5.00±0.53）、（6.03±0.25）、（6.51±0.25）、（7.15±0.30）mm，見(jiàn)表1。在16%的藥液作用下，基本上不出現(xiàn)溶血環(huán)，溶血直徑為菌落直徑。隨著藥液濃度的下降，溶血環(huán)隨之增大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 不同濃度云南白藥作用后金黃色葡萄球菌的溶血環(huán)直徑（mm

表1 不同濃度云南白藥作用后金黃色葡萄球菌的溶血環(huán)直徑（mm

藥物濃度（%） 藥液作用后溶血環(huán)直徑0 7.15±0.30 2 6.51±0.25 4 6.03±0.25 8 5.00±0.53 16 2.97±0.39

2.2 云南白藥對(duì)金黃色葡萄球菌血漿凝固物高度的影響 在不同濃度的云南白藥藥液作用下，金黃色葡萄球菌對(duì)血漿凝固現(xiàn)象的影響沒(méi)有一定的規(guī)律性，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 不同濃度云南白藥作用后金黃色葡萄球菌的血漿凝固物高度（mm）

3 討 論

抗菌藥物是目前臨床治療細(xì)菌感染的首選方法，但易導(dǎo)致耐藥菌的產(chǎn)生。毒力是細(xì)菌致病的前提，但不是細(xì)菌生長(zhǎng)的必要條件。抑制細(xì)菌毒力既能控制細(xì)菌感染，又不對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)產(chǎn)生選擇壓力，從而可以避免引發(fā)耐藥性的風(fēng)險(xiǎn)，因此被認(rèn)為是新型抗菌藥物研發(fā)的主要方向之一［4］。有研究表明，細(xì)菌的大部分毒力都受群體效應(yīng)（QS）系統(tǒng)調(diào)控［5］，通過(guò)干擾QS的正常調(diào)控可能減弱甚至抑制細(xì)菌毒力表達(dá)，所以QS系統(tǒng)抑制劑（QSI）正成為抗菌藥物研究領(lǐng)域的一大熱點(diǎn)［6］。研究表明，許多長(zhǎng)久以來(lái)廣泛使用的藥用和可食性植物，如田七、石榴和白茅等，被證明能夠抑制QS 系統(tǒng)從而抵抗毒力活性和減弱毒性［7－8］，具有止血、止痛等功效。云南白藥是我國(guó)最著名的中藥之一，由多種中草藥植物組合而成［3］，具有活血、消腫的功效，即使不需要無(wú)菌條件保存，直接將云南白藥涂抹于傷口上也無(wú)需擔(dān)心引起感染。在過(guò)去的100多年里沒(méi)有任何資料記載云南白藥具有殺菌或抑菌作用。目前，云南白藥已廣泛用于各種出血證，有少數(shù)研究報(bào)道云南白藥輔助治療急性痢疾和幽門螺桿菌相關(guān)性十二指腸潰瘍效果理想［9－10］。本研究表明，云南白藥可能具有抑制QS活性并導(dǎo)致β－溶血素釋放減少，但云南白藥是如何抑制金黃色葡萄球菌QS的活性導(dǎo)致毒力減弱的仍有待進(jìn)一步探討。國(guó)內(nèi)已有報(bào)道，云南白藥治療后引起溶血反應(yīng)［11］，云南白藥的成分中含有劇毒成分，本研究也發(fā)現(xiàn)用云南白藥的藥液配制血平板時(shí)，云南白藥本身就具有溶血作用，這也是沒(méi)有將藥液直接溶于瓊脂中來(lái)配制血平板的原因。

本研究表明，云南白藥藥液對(duì)多金黃色葡萄球菌的溶血能力有著較強(qiáng)的抑制作用，而對(duì)其血漿的凝固作用影響較小且沒(méi)有呈一定的規(guī)律性，不同藥液濃度間的差別也不明顯。這可能因?yàn)榻瘘S色葡萄球的溶血素與凝固酶這兩種毒力表達(dá)機(jī)制不同［12］。同時(shí)，云南白藥對(duì)多金黃色葡萄球的生長(zhǎng)過(guò)程也有存在著一定的影響。本研究發(fā)現(xiàn)，濃度越高的藥液作用下的菌落直徑越小，形狀扁平多樣不規(guī)則與正常菌落規(guī)整圓形的露滴狀有著明顯差異。因此筆者推測(cè)，雖然云南白藥沒(méi)有直接殺菌的作用，但能在一定情況下導(dǎo)致細(xì)菌生長(zhǎng)不良。

在16%藥液作用下，菌落沒(méi)有出現(xiàn)溶血環(huán)，只在菌落邊緣出現(xiàn)一條透光邊，說(shuō)明在此濃度下金黃葡萄球溶血素的產(chǎn)生受到抑制程度最大。隨著濃度的降低，溶血環(huán)也隨之?dāng)U大，2%濃度時(shí)菌落形態(tài)已經(jīng)與正常相近，溶血環(huán)直徑差別最小。而凝固酶試驗(yàn)中，云南白藥的作用效果不明顯可能因?yàn)槎玖Φ谋磉_(dá)機(jī)制不同，而云南白藥并不能干擾這個(gè)機(jī)制的表達(dá)。其次，在藥液的作用下，菌落的形態(tài)發(fā)生了變化，可能對(duì)其細(xì)胞壁造成了破壞，使得菌落表面變得濕潤(rùn)扁平，在平板上培養(yǎng)過(guò)程中凝固酶已經(jīng)大量的釋放出來(lái)，釋放的量受時(shí)間、溫度還有藥液等許多因素影響，因此血漿凝固現(xiàn)象沒(méi)有呈一定的規(guī)律性。

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