熱處理豆粕飼喂生長(zhǎng)豬的氨基酸消化率

González-Vega J C， Kim B G， Htoo J K，Lemme A，Stein H H

（伊利諾斯州立大學(xué)動(dòng)物科學(xué)系，烏爾班納市 61801）

生大豆含有多種抗?fàn)I養(yǎng)因子，熱處理能改善大豆和豆粕的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，因?yàn)闊崽幚砟苁沟鞍鬃冃裕茐牡鞍酌敢种埔蜃蛹吧蠖怪锌赡艽嬖诘钠?他 抗 營(yíng) 養(yǎng) 因 子 （Goebel 和 Stein，2011；Purushotham等，2007）。然而，過(guò)熱處理會(huì)導(dǎo)致氨基酸被破壞，并產(chǎn)生不能被生物利用的美拉德反應(yīng)產(chǎn)物（Pahm等，2008）。美拉德反應(yīng)是氨基酸的氨基和還原糖的縮合反應(yīng)，在所有氨基酸中賴氨酸是最易發(fā)生美拉德反應(yīng)的氨基酸，因?yàn)樗幸粋€(gè)暴露在外的ε-氨基，能與還原糖的羧基相結(jié)合（Pahm等，2008）。這個(gè)反應(yīng)的縮合產(chǎn)物轉(zhuǎn)變成希夫堿，經(jīng)葡糖胺重排形成1-胺基-1去氧-2酮糖化合物。1-胺基-1去氧-2酮糖化合物是早期美拉德反應(yīng)不能被測(cè)定的賴氨酸基團(tuán)的主要存在形式（Hurrel和 Carpenter，1981）。過(guò)熱處理豆粕會(huì)產(chǎn)生美拉德反應(yīng)高級(jí)產(chǎn)物，如類黑素前體，它能與其他氨基酸反應(yīng)，從而使這些氨基酸不能被生物利用。因此，熱處理的方式和程度能影響豆粕的氨基酸表觀回腸消化率（AID）（Chang 等，1987）。然而，關(guān)于熱處理時(shí)間是如何影響豆粕的氨基酸表觀回腸消化率（AID）和標(biāo)準(zhǔn)回腸消化率（SID）鮮見(jiàn)報(bào)道。因此，本試驗(yàn)的目的是測(cè)定豆粕熱處理方式和時(shí)間是否會(huì)影響生長(zhǎng)豬的氨基酸表觀回腸消化率和標(biāo)準(zhǔn)回腸消化率。

1 材料和方法

本試驗(yàn)方法通過(guò)伊利諾伊大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物保護(hù)委員會(huì)的評(píng)審和批準(zhǔn)。本試驗(yàn)使用的豬為長(zhǎng)白豬（3/4）×大白豬（1/4）的雜交閹公豬。

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 選擇初始體重為（25.3±2.0）kg的10頭閹公豬。采用Stein等（1998）所述的方法分別在試驗(yàn)豬只的回腸末端安裝一個(gè)T-型瘺管。采用5×5拉丁方試驗(yàn)設(shè)計(jì)，將試驗(yàn)豬隨機(jī)分成5個(gè)處理組，采用基于電子數(shù)據(jù)表程序來(lái)平衡潛在的殘差效應(yīng)。每個(gè)拉丁方有5種日糧，5個(gè)周期。每只試驗(yàn)豬分別圈養(yǎng)在1.2 m×1.5 m的豬欄里，豬舍內(nèi)安裝空調(diào)。豬欄為全漏縫鋼筋地板，每欄安裝一個(gè)飼喂器和一個(gè)乳頭式飲水器。

1.2 日糧和飼喂方法 常規(guī)去殼豆粕被分成4組，一組不經(jīng)過(guò)熱處理，另外3組分別在125℃高壓蒸汽處理15 min，125℃高壓蒸汽處理30 min，125℃烘箱處理30 min（表1）。制定5種日糧配方 （表2和表3）。4組豆粕分別用于一種玉米淀粉-豆粕型日糧配方中，作為該日糧唯一氨基酸來(lái)源，另外用無(wú)氮日糧來(lái)評(píng)估基礎(chǔ)內(nèi)源性蛋白和氨基酸損失量。日糧配方中的維生素和礦物質(zhì)含量滿足或超過(guò)目前生長(zhǎng)豬需要量（NRC，1998），所有日糧添加0.4%氧化鉻作標(biāo)記物。

日糧提供3倍維持能量需要量（NRC，1998），在 08∶00 和 17∶00 時(shí)提供同等的日糧。 在每個(gè)試驗(yàn)周期開(kāi)始時(shí)校正每頭豬的飼料營(yíng)養(yǎng)水平，每頭試驗(yàn)豬進(jìn)行稱重并記錄。整個(gè)試驗(yàn)周期內(nèi)豬自由飲水。

1.3 樣品采集 每個(gè)試驗(yàn)周期持續(xù)7 d。其中前5 d為預(yù)試期，第6、7天收集8 h的回腸食糜樣品。用尼龍?jiān)鷰⑺芰洗诏浌苌?，食糜流入塑料袋中被收集起?lái)。每隔30 min收集并更換塑料袋，所有食糜樣品保存于-20℃條件下，防止食糜中氨基酸被微生物降解。

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，回腸食糜樣品在室溫下解凍，混勻同一頭豬的收集樣品，用于化學(xué)分析。回腸食糜樣品凍干后碾細(xì)用于化學(xué)分析。

測(cè)定所有試驗(yàn)日糧及食糜樣品干物質(zhì)含量（AOAC 方法 930.15，2007）和粗蛋白質(zhì)含量（AOAC方法990.03，2007）。測(cè)定日糧和豆粕樣品的灰分（AOAC方法942.05，2007）和酸水解乙醚提取物含量（AOAC方法954.02，2007）。分析所有樣品氨基酸組成，用茚三酮柱前衍生，亮氨酸作內(nèi)標(biāo)（日立氨基酸分析儀L8800，日立高新技術(shù)美國(guó)有限公司，普萊森頓，加拿大）。分析之前，樣品用6 mol/L的鹽酸在110℃下水解 24 h（AOAC方法 982.30E，2007）。在水解之前，用冰甲酸氧化過(guò)夜，然后進(jìn)行蛋氨酸和半胱氨酸分析，分別以蛋氨酸砜和磺基丙氨酸/半胱氨酸形式計(jì)。硝酸-高氯酸濕灰分樣品制備（AOAC 方法 968.088D，2007）后，測(cè)定日糧和回腸食糜樣品的鉻含量，用電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法檢測(cè)（AOAC方法990.08，2007）。

表1 熱處理后豆粕的化學(xué)組成

糠氨酸含量分析，用6 mol/L鹽酸水解，用反相高效液相色譜儀梯度洗脫進(jìn)行分析 （0.1%三氟乙酸溶于去離子水作為流動(dòng)相A；0.1%三氟乙酸溶于甲醇溶液作為流動(dòng)相B）。用5個(gè)糠氨酸鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)物作為外標(biāo)法進(jìn)行定量分析（Neo MPS，Neosystems實(shí)驗(yàn)室，斯特拉斯堡，法國(guó)）。

豆粕的顏色判定用L*值、a*值和b*值來(lái)描述（美國(guó)亨特利便攜式測(cè)色儀45/0-L，美國(guó)亨特利公司，萊斯頓，維吉尼亞州），使用Holmer等（2009）所述方法用黑白色卡校準(zhǔn)光譜色度計(jì)。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 計(jì)算每種豆粕的表觀回腸消化率和標(biāo)準(zhǔn)回腸消化率（Stein等，2007）。用SAS進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

由表1可知，所有豆粕的干物質(zhì)、灰分和粗蛋白質(zhì)含量相似，與豆粕的熱處理方式無(wú)關(guān)。然而，未經(jīng)熱處理豆粕的精氨酸、賴氨酸和半胱氨酸含量分別為3.64%、3.05%和0.71%，而高壓蒸汽處理15 min的豆粕的含量分別為3.53%、2.83%和0.65%，高壓蒸汽處理30 min的豆粕的含量分別為3.40%、2.69%和0.62%。未經(jīng)熱處理的豆粕賴氨酸∶粗蛋白質(zhì)比為6.29%，但是高壓蒸汽處理15 min和30 min的豆粕的賴氨酸∶粗蛋白質(zhì)比分別為5.75%和5.57%。未經(jīng)處理的豆粕、高壓蒸汽處理15 min和30 min的豆粕的L*值分別為 77.7、61.8和 52.5，a*值分別為 3.4、10.0和12.5。這些變化表明，高壓蒸汽處理導(dǎo)致顏色更黑更紅，且能通過(guò)樣品感官評(píng)估觀察得到。用烘箱處理的豆粕樣品和未經(jīng)熱處理的樣品的賴氨酸、半胱氨酸、糠氨酸、賴氨酸∶粗蛋白質(zhì)比、L*和a*值相近。由表3可知，所有日糧配方的干物質(zhì)、灰分和粗蛋白質(zhì)含量相似。添加高壓蒸汽處理30 min的豆粕日糧，其賴氨酸和半胱氨酸濃度分別為1.06%和0.24%，而添加其他處理豆粕的日糧賴氨酸含量為1.17%～1.19%，半胱氨酸含量為0.27%～0.28%。

豆粕的粗蛋白質(zhì)表觀回腸消化率和標(biāo)準(zhǔn)回腸消化率所有氨基酸含量都隨著高壓蒸汽處理時(shí)間的增加而呈線性下降（P＜0.01）（表4和表5）。賴氨酸和天門冬氨酸含量降低的最顯著。雖然烘箱烘干處理的豆粕和未經(jīng)熱處理的豆粕相比，其大多數(shù)氨基酸的表觀回腸消化率和標(biāo)準(zhǔn)回腸消化率在數(shù)值上有降低，但在統(tǒng)計(jì)意義上均不顯著。

3 討論

未經(jīng)熱處理的豆粕營(yíng)養(yǎng)組成和現(xiàn)有報(bào)道一致 （Baker 和 Stein，2009；Cervantes-Pahm 和Stein，2008）。本試驗(yàn)用高壓蒸汽處理豆粕，其賴氨酸和半胱氨酸含量降低，這與Johannes等（2007）的研究結(jié)果一致，其研究報(bào)道，高壓蒸汽處理大豆產(chǎn)品、玉米酒精糟可溶物（DDGS）和未經(jīng)高溫處理的樣品，其賴氨酸和半胱氨酸含量均降低。高壓蒸汽處理的豆粕樣品精氨酸濃度降低，與加熱處理的小麥DDGS數(shù)據(jù)一致，其精氨酸濃度也降低（Cozannet等，2010）。 然而，與 Johannes等（2007）結(jié)果一致，其他氨基酸濃度不受熱處理的影響。研究表明，熱處理蛋白源賴氨酸和半胱氨酸濃度會(huì)降低 （Karr-Lilienthal等，2005；Shirley 和 Parsons，2000）。 這些物質(zhì)減少可能是由于美拉德反應(yīng)，這與高壓蒸汽處理豆粕顏色形成棕色一致。由于賴氨酸ε-氨基和還原糖的羥基發(fā)生反應(yīng)，賴氨酸是受美拉德反應(yīng)影響最大的氨基酸。半胱氨酸含量的降低可能是由于在美拉德反應(yīng)中形成交聯(lián)化合物（Gerrard，2002；VanBarneveld 等，1994a）。

表4 不同處理豆粕飼喂生長(zhǎng)豬的粗蛋白質(zhì)和氨基酸表觀回腸消化率

表5 不同處理豆粕飼喂生長(zhǎng)豬的粗蛋白質(zhì)和氨基酸標(biāo)準(zhǔn)回腸消化率

未經(jīng)熱處理豆粕的多數(shù)氨基酸標(biāo)準(zhǔn)回腸消化率與先前的報(bào)道一致 （Goebel和Stein，2011；Kim等，2009；Cervantes-Pahm 和 Stein，2008）。 隨著高壓蒸汽處理時(shí)間的逐漸增加，豆粕中粗蛋白質(zhì)和氨基酸的表觀回腸消化率和標(biāo)準(zhǔn)回腸消化率均降低，這與 Moughan 和 Rutherfurd（1996）的報(bào)道一致，其報(bào)道指出乳糖和酪蛋白日糧經(jīng)121℃高壓蒸汽處理3.5 min，所有氨基酸的消化率降低。Martinez-Amezcua和Parsons（2007）研究發(fā)現(xiàn)，120℃高壓蒸汽處理DDGS 45 min，家禽的氨基酸消化率降低。

美拉德反應(yīng)后期，賴氨酸和其他氨基酸及蛋白質(zhì)中的多肽鏈間會(huì)形成交聯(lián)化合物，可能會(huì)降低蛋白水解酶的效率 （Martinez-Amezcua和Parsons，2007；Moughan 和 Rutherfurd，1996）。 美拉德反應(yīng)期間，deoxyketosyl化合物繼續(xù)形成褐色素或類黑素，這也可能是高壓蒸汽豆粕能看出顏色變化的原因。類黑素可能由于空間位影響吸收，也可能會(huì)降低氨基酸和小肽的消化，最終導(dǎo)致氨基酸標(biāo)準(zhǔn)回腸消化率降低（Hurrell，1990）。

先前研究表明豬和家禽賴氨酸消化率降低是由于豆粕（Boucher等，2009a；Johannes等，2007）、玉米 DDGS （Boucher等，2009b；Pahm 等，2008）、紫花豌豆 （VanBarneveld 等，1994a、b）、 骨肉粉（Shirley 和 Parsons，2000）和魚(yú)粉 （Boucher等，2009）等物質(zhì)發(fā)生美拉德反應(yīng)。100℃烘箱干燥的DDGS賴氨酸含量和消化率降低（Pahm等，2008；Martinez-Amezcua和 Parsons，2007）。 但本試驗(yàn)表明，125℃烘箱干燥30min對(duì)豆粕標(biāo)準(zhǔn)回腸可消化氨基酸的影響極小。烘箱干燥對(duì)DDGS和豆粕影響的差異可能是由于DDGS在生產(chǎn)過(guò)程中受到了熱應(yīng)激，DDGS中糖的含量比豆粕多（Johannes等，2007）。因此，飼料成分造成熱損傷的溫度讀數(shù)不僅取決于加熱方式和時(shí)間長(zhǎng)短，也受原料本身的影響。的飼料原料本身決定。

高壓蒸汽是結(jié)合壓力、水分、高溫，而烘箱干燥只有熱處理一個(gè)因素。因此，高壓蒸汽對(duì)表觀回腸可消化氨基酸和標(biāo)準(zhǔn)回腸可消化氨基酸的影響比烘箱干燥造成的影響大，可能是由于高壓蒸汽有壓力和水分共同作用。高壓條件下氨基酸穩(wěn)定性差，濕度增加時(shí)，氨基酸的氨基團(tuán)和葡萄糖之間的反應(yīng)率增加 （（Qian等，1993；Schwartz和Lea，1952）。美拉德反應(yīng)程度取決于水分活度、溫度、pH、加熱時(shí)間，以及底物的種類和可利用程度 （Jaeger等，2010；Rufián-Henaresetal等，2009）。中間水分含量，溫度超過(guò)50℃，pH為4～7時(shí)是美拉德反應(yīng)的最合適條件 （Guerra-Hernandez等，2001）。

棕褐色的形成是美拉德反應(yīng)的指示劑 （類黑素），高壓蒸汽處理的豆粕可見(jiàn)棕褐色。近來(lái)研究表明棕色與小麥DDGS標(biāo)準(zhǔn)回腸可消化賴氨酸的減少相關(guān)（Cozannetetal，2010）。 然而，烘箱干燥的豆粕呈淡黃色，表明沒(méi)有形成美拉德反應(yīng)產(chǎn)物（Hurrell，1990）。很有可能是烘箱中水分含量太低而不能形成美拉德反應(yīng)產(chǎn)物。

糠氨酸是伴隨著糠氨酸是葡糖胺化合物經(jīng)酸水解后生成的產(chǎn)物。研究表明酸水解過(guò)程中，飼料組成32%的限制性賴氨酸轉(zhuǎn)化為糠氨酸（Pahmetal，2008）。因此，如果可以檢測(cè)飼料組成中糠氨酸含量，通過(guò)計(jì)算可能得到總限制性賴氨酸濃度（Pahm等，2008）?？钒彼徇@一過(guò)程被廣泛的應(yīng)用在檢測(cè)干燥奶產(chǎn)品熱損傷中 （Gimenez等，2004），這個(gè)過(guò)程也被成功用于評(píng)估DDGS熱損傷程度（Cozannet等，2010；Pahm 等，2008）。 研究表明，伴隨著豆粕熱損傷豆粕中糠氨酸濃度增加。本研究發(fā)現(xiàn)糠氨酸可以被用于評(píng)估豆粕熱損傷。

飼料的熱損傷程度也可以通過(guò)計(jì)算賴氨酸∶粗蛋白質(zhì)比值來(lái)評(píng)估，因?yàn)闃悠肥軣釗p傷，賴氨酸濃度降低，而蛋白濃度未降低 （Stein等，2009）。隨著高壓蒸汽時(shí)間增加，豆粕中賴氨酸∶粗蛋白質(zhì)值降低，然而，烘箱干燥豆粕的賴氨酸∶粗蛋白質(zhì)與未經(jīng)熱處理豆粕相似。這項(xiàng)發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步表明高壓蒸汽樣品可造成熱損傷，而烘箱干燥樣品則不會(huì)造成熱損傷。因此，賴氨酸∶粗蛋白質(zhì)比值支持利用糠氨酸和顏色判定結(jié)果。賴氨酸∶粗蛋白質(zhì)降低的研究曾被報(bào)道在受熱損傷的DDGS 中（Stein 等，2009；Cozannet等，2010）。 本次研究發(fā)現(xiàn)豆粕受熱損傷后賴氨酸∶粗蛋白質(zhì)降低。因此，如果豆粕受熱損傷，計(jì)算賴氨酸∶粗蛋白質(zhì)是一個(gè)快速、可靠的評(píng)判方法，并且該方法也可被用于豆粕粉碎工廠和飼料廠來(lái)評(píng)價(jià)豆粕質(zhì)量。

4 小結(jié)

125℃高壓蒸汽處理為豆粕提供了水和壓力，降低了樣品中精氨酸、賴氨酸、半胱氨酸的濃度和氨基酸表觀回腸消化率和標(biāo)準(zhǔn)回腸消化率。增加高壓蒸汽處理時(shí)間其副作用更大。相比之下，125℃烘箱干燥30 min不會(huì)降低豆粕中氨基酸濃度和消化率。因此，應(yīng)選擇最佳的熱處理方式來(lái)防止豆粕的氨基酸消化率降低。顏色、糠氨酸濃度、賴氨酸∶粗蛋白質(zhì)等指標(biāo)可以用來(lái)評(píng)估豆粕受熱損傷的程度。

[1]Baker K M，Stein H H.Amino acid digestibility and concentration of digestibleand metabolizable energy in soybean meal produced from high protein or low oligosaccharide varieties of soybeans and fed to growing pigs[J].Journal of Animal Science，2009，87：2282 ～ 2290.

[2]Boucher S E，Calsamiglia S，Parsons C M，et al.Intestinal digestibility of amino acids in rumen undegradable protein estimated usinga precision-fed cecectomized rooster bioassay：I.Soybean meal and SoyPlus[J].Journal of Dairy Science，2009，92（9）：4489 ～ 4498.

[3]Giménez E C，Bénet T，Spack L.The uncertainty in the calculation of the amount of blocked and reactive lysine in milk products，as determined by the furosine method[J].Accreditation&Quality Assurance，2004，9：605 ～ 614.

[4]Cervantes-Pahm S K，Stein H H.Effect of dietary soybean oil and soybean protein concentrate on the concentration of digestible amino acids in soybean products fed to growing pigs[J].Journal of Animal Science，2008，86 （8）：1841～1849.

[5]Chang C J，Tanksley T D，Knabe D A，et al.Effects of different heat treatments during processing on nutrient digestibility of soybean meal in growing swine[J].Journal of Animal Science，1987，65（5）：1273 ～ 1282.

[6]Cozannet P，Primot Y，Gady C，et al.Ileal digestibility of amino acids in wheat distillers dried grains with solubles for pigs[J].Animal Feed Science&Technology，2010，158（3）：177 ～ 186.

[7]Johannes F，Ulrike Z，Moughan P J，et al.Effect of heat damage in anautoclave on the reactive lysine contents of soy productsand corn distillers dried grains with solubles.Use of the results to check on lysine damage in common qualities of these ingredients[J].Journal of Agricultural&Food Chemistry，2007，55（26）：10737 ～ 10743.

[8]Gerrard J A.Protein-protein crosslinking in food：methods，consequences，applications[J].Trends in Food Science&Technology，2002，13 （12）：389 ～397.

[9]Goebel K P，Stein H H.Ileal Digestibility of amino acids in Conventional and Low-Kunitz Soybean Products Fed to Weanling Pigs[J].Asian Australasian Journal of Animal Sciences，2011，24（1）：88 ～ 95.

[10]Holmer S F，Mckeith R O，Boler D D，et al.The effect of pH on shelflife of pork during aging and simulated retail display[J].Meat Science，2009，82（1）：86 ～ 93.

[11]Hurrell R F，Carpenter K J.The estimation of available lysine foodstuffs after Maillard reactions[J].Progress in Food&Nutrition Science，1981，5 （1-6）：159 ～ 176.

[12]Jaeger H，Janositza，Knorr D.The Maillard reaction and its control during food processing.The potential of emerging technologies[J].Pathologie Biologie，2010，58（3）：207 ～ 213.

[13]Karr-Lilienthal L K，Utterback P L，amezcua C，et al.Relative bioavailability of phosphorus and true amino acid digestibility by poultry as affected by soybean extraction time and use of low-phytate soybeans[J].Poultry Science，2005，84（1）：335 ～ 335.

[14]Kim B G，Petersen G I，Hinson R B，et al.Amino acid digestibilityand energy concentration in a novel source of high-protein distillers dried grainsand their effects on growth performance of pigs[J].Journal of Animal Science，2009，87（12）：4013 ～ 4021.

[15]Martinez-Amerzcua C，Parsons C M.Effect of increased heat processing and particle size on phosphorus bioavailability in corn distillers dried grains with solubles[J].Poultry Science，2007，86（2）：331 ～ 337

[16]Moughan P J，Rutherfurd S M.A New Method for Determining Digestible Reactive Lysine in Foods[J].J Agric food Chem，1996，44（8）：2202 ～2209.

[17]NRC.1998.Nutrient Requirements of Swine.10th rev.ed[M].Natl.Acad.Press，Washington，DC.

[18]Pahma A，Pedersen C，Stein H H.Application of the reactive lysine procedure to estimate lysine digestibility in distillers dried grains with solubles fed to growing pigs[J].Journal of Agricultural&Food Chemistry，2008，56 （20）：9441～9446.

[19]Purushotham B，Radhakrishna P M，Sherigara B S.Effects of Steam Conditioning and Extrusion Temperature on Someanti-nutritional Factors of Soyabean（Glycine max）for Pet Food Applications[J].American Journal of Animal&Veterinary Sciences，2007，2（1）：1 ～ 5.

[20]Qian Y，Engel M H，Macko S A，et al.Kinetics of peptide hydrolysisand amino acid decompositionat high temperature[J].Geochimic Cosmochimicacta，1993，57（14）：3281 ～ 3293.

[21]Guerra-Hernandez E，Ramirez-Jimenez A，Garcia-Villanova B.Effect of toasting time on the browning of sliced bread[J].Journal of the Science of Food&Agriculture，2001，81（5）：513 ～ 518.

[22]Rufián-Henares J A，Delgado-andrade C，Morales F J.“Assessing the Maillard reaction development during the toasting process of common flours employed by the cereal products industry”[J].Food Chemistry，2009，114（1）：93～99.

[23]Schwartz H M，Lea C H.The reaction between proteins and reducing sugars in the dry'state.Relative reactivity of the α-and ε-amino groups of insulin[J].Biochemical Journal，1952，50（5）：713 ～ 716

[24]Shirley R B，Parsons C M.Effect of pressure processing on amino acid digestibility of meat and bone meal for poultry[J].Poultry Science，2000，79（12）：1775～1781.

[25]Stein H H，Connot S P，Pedersen C.Energy and nutrient digestibility in four sources of distillers dried grains with solubles produced from corn grown withina narrow geographical area and fed to growing pigs[J].Asian-Australasian Journal of Animal Sciences，2009，22（7）：1016 ～ 1025.

[26]Stein H H，Sève B，F(xiàn)uller M F，et al.Invited review：amino acid bioavailability and digestibility in pig feed ingredients：Terminology and Application[J].Journal of Animal Science，2007，85（1）：172 ～ 180.

[27]Stein H H，Shipley C F，Easter R A.Technical note：a technique for insertinga T-cannula into the distal ileum of pregnant sows[J].Journal of Animal Science，1998，76（5）：1433 ～ 1436.

[28]VanBarneveld R J，Batterham E S，Norton B W.The effect of heat on amino acids for growing pigs.1.A comparison of ileal and faecal digestibilities of amino acids in rawand heat-treated field peas（Pisum sativum cultivar Dundale）[J].British Journal of Nutrition，1994a，72（2）：221 ～ 241.

[29]VanBarneveld R J，Batterham E S，Norton B W.The effect of heat on amino acids for growing pigs.3.The availability of lysine from heat-treated field peas （Pisum sativum cultivar Dundale）determined using the slope-ratio assay[J].British Journal of Nutrition，1994b，72（2）：257 ～ 275.