虎眼萬年青提取物降血糖作用的實(shí)驗(yàn)研究

曹海玲，徐 暘，閆 靜

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，哈爾濱150040)

虎眼萬年青(Ornithogalum caudatum Ait)，又名珍珠草、伯利恒之星，是虎眼萬年青屬單子葉植物，原產(chǎn)于非洲南部，其花為頭狀花序，是很有名的觀賞植物，種植地廣泛.成分研究表明，虎眼萬年青含有多糖、皂苷及生物堿等成分，可全草入藥[1－2].虎眼萬年青多糖具有對機(jī)體的免疫增強(qiáng)作用和對免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用[3－4].虎眼萬年青皂苷具有抗腫瘤活性[5]和抗氧化作用[6].民間多有使用虎眼萬年青用于抗炎消毒，治療肝病、肝癌、膽囊炎癥等.近年來有虎眼萬年青抗炎活性的藥理研究報(bào)道[7].

目前，世界范圍內(nèi)，糖尿病的發(fā)病率快速上升，已成為人類健康的重大威脅，糖尿病防治已成為醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn).從天然藥物尤其是植物中尋找降血糖的有效成分是一條重要的途徑.多糖有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、降血糖、抗氧化等作用.據(jù) Frang[8－9]等報(bào)道，已有近百種植物多糖被分離提取鑒定出來，其來源廣泛且沒有細(xì)胞毒性，應(yīng)用于生物體毒副作用小.研究表明虎眼萬年青有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗氧化等作用，但其是否具有降血糖作用還尚未見文獻(xiàn)報(bào)道.本文對虎眼萬年青多糖的降血糖作用進(jìn)行了研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可為虎眼萬年青藥材的進(jìn)一步開發(fā)和應(yīng)用提供依據(jù).

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

選用健康的昆明種小鼠72只(由青島派特福白鼠養(yǎng)殖專業(yè)合作社提供)，雌雄各半，體重(25±2)g清潔級，隨機(jī)將雌雄小鼠各分為6組，每組12只.

1.2 藥材

虎眼萬年青藥材購于吉林長白研究所，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)李延冰教授鑒定.

1.3 試劑

鹽酸二甲雙胍(哈爾濱同一堂藥業(yè)有限公司);四氧嘧啶(原裝Sigma).甘油三酯試劑盒(長春匯力生物技術(shù)有限公司);總膽固醇試劑盒(長春匯力生物技術(shù)有限公司);注射用生理鹽水(哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司);乙醇.

1.4 實(shí)驗(yàn)儀器

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申勝生物技術(shù)有限公司);烘箱(DGX－9143B－1);電熱套;圓底燒瓶;冷凝管;離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠);721型可見分光光度計(jì);水浴鍋;三諾穩(wěn)豪型血糖儀及配套試紙.

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 藥物提取

取已粉碎的虎眼萬年青全草200 g放入圓底燒瓶，加配好的70%乙醇2 000 mL，浸泡1 h，60℃下加熱回流提取2 h.過濾.虎眼萬年青殘?jiān)^續(xù)加入70%乙醇1 600 mL，60℃下回流提取2次，每次2 h.過濾，合并三次所得濾液.經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，溫度50℃，回收乙醇.回提后剩余液體約800 mL，水浴蒸發(fā)，并先后加入2次100 mL雙蒸水，使酒精充分蒸發(fā)，得浸膏.再將浸膏放于40℃烘箱中低溫干燥得粉末狀虎眼萬年青70%乙醇提取物.

2.2 糖尿病模型復(fù)制

小鼠常規(guī)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，(正常進(jìn)食、飲水，特定時(shí)間內(nèi)除外)稱重，小鼠禁食(不禁水)約12 h，腹腔注射新鮮配置的四氧嘧啶溶液200 mg/kg.72 h后再次禁食(不禁水)12 h后，尾靜脈取血，血糖儀測空腹血糖值，大于11.1 mmol/L為糖尿病模型小鼠.

2.3 分組及給藥

72只昆明種小鼠，每組12只，雌雄各6只，共分6組，即空白對照組，模型對照組，陽性藥物組，70%乙醇提取物高、中、低劑量組.按動(dòng)物體表面積比率換算等效劑量灌胃給藥;每日1次，連續(xù)給藥2周.空白對照組為健康小鼠按0.1 mL/g給與生理鹽水灌胃;模型對照組為高血糖小鼠按0.1 mL/g給與生理鹽水灌胃;陽性藥物組(鹽酸二甲雙胍)，陽性藥物碾碎成粉末狀溶于生理鹽水中，制成12.8 mg/mL質(zhì)量濃度的溶液，按0.1 mL/g給與灌胃;70%乙醇提取物干粉分別以2、1、0.5 g/kg質(zhì)量濃度制成生理鹽水溶液，按0.1 mL/g給與灌胃.

2.4 檢測指標(biāo)

2.4.1 血糖質(zhì)量濃度

分別在灌胃給藥第7天及第14天尾靜脈取血，用血糖試紙及血糖儀測定其血糖質(zhì)量濃度的變化.

2.4.2 總膽固醇質(zhì)量濃度

于灌胃給藥第14天眼球取血，嚴(yán)格按照試劑盒操作說明測定血漿總膽固醇質(zhì)量濃度.

2.4.3 甘油三酯質(zhì)量濃度

于灌胃給藥第14天眼球取血，嚴(yán)格按照試劑盒操作說明測定血漿甘油三酯質(zhì)量濃度.

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

虎眼萬年青全草70%乙醇提取物，不同劑量對糖尿病昆明種小鼠血糖質(zhì)量濃度、血漿總膽固醇質(zhì)量濃度以及血漿甘油三酯質(zhì)量濃度的影響.見表1.

表1 虎眼萬年青全草提取物對糖尿病模型小鼠血糖值及其他指標(biāo)的影響

對小鼠空腹血糖的影響:經(jīng)口灌胃14 d后，虎眼萬年青70%乙醇提取物高中劑量組與對照組相比較有顯著性差異(P＜0.05)，陽性藥組與對照組相比較有顯著性差異(P＜0.05)，虎眼萬年青70%乙醇提取物低劑量組與對照組相比較無顯著性差異(P＞0.05).虎眼萬年青70%乙醇提取物高中劑量組相比較無顯著性差異(P＞0.05)，虎眼萬年青70%乙醇提取物高中劑量組與陽性藥組相比較無顯著性差異(P＞0.05).表明虎眼萬年青70%乙醇提取物對四氧嘧啶誘導(dǎo)的高血糖昆明種小鼠有一定的輔助降血糖作用且有劑量依賴性.

對小鼠總膽固醇、甘油三酯的影響:虎眼萬年青70%乙醇提取物高中劑量組、陽性藥物組與對照組相比較無顯著性差異(P＞0.05)，虎眼萬年青70%乙醇提取物低劑量組與對照組比較差異性不大(0.10＞P＞0.05).表明虎眼萬年青70%乙醇提取物對四氧嘧啶誘導(dǎo)的高血糖昆明種小鼠的膽固醇、甘油三酯水平有一定的控制作用，且呈劑量依賴性.

4 討論

隨著社會的發(fā)展，生活水平的提高，心腦血管病的發(fā)病率也呈逐年上升的趨勢，且死亡率位于各種疾病之首，所以研究開發(fā)治療和預(yù)防心腦血管疾病的保健品就顯得非常重要[10];糖尿病是一種由于遺傳因素、免疫功能紊亂、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等各種致病因子作用于機(jī)體導(dǎo)致胰島功能減退、胰島素抵抗等而引發(fā)的糖、蛋白質(zhì)、脂肪、水和電解質(zhì)等一系列代謝紊亂綜合征，血糖一旦控制不好會引發(fā)多種并發(fā)癥，導(dǎo)致腎、眼、足等部位的衰竭病變，且無法治愈[11].很多種皂苷類以及多糖類含量高的中草藥或植物也相繼被研究發(fā)現(xiàn)具有治療或輔助治療糖尿病的功效.

本文對多糖及皂苷含量較高的虎眼萬年青全草進(jìn)行分析研究，以期其對糖尿病有治療或輔助的治療作用.目前制作糖尿病動(dòng)物模型的方法主要有三類[12]，一類是自發(fā)性糖尿病動(dòng)物模型;第二類是轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型;因經(jīng)費(fèi)和試驗(yàn)條件等客觀條件限制，這兩類均應(yīng)用不廣泛.第三類是通過手術(shù)、化學(xué)藥物損傷、病毒感染等方法造模.目前常用化學(xué)藥物有STZ、四氧嘧啶.本實(shí)驗(yàn)以腹腔注射四氧嘧啶方法造模.

對昆明種小鼠造模及給藥治療的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，中、高劑量的虎眼萬年青全草70%乙醇提取物能夠使糖尿病小鼠的血糖水平降低并趨于穩(wěn)定，且對糖尿病小鼠的三高癥狀有所緩解.而低劑量組與糖尿病模型組相比較則無明顯差異，可能劑量太低效果不明顯.此亦能說明虎眼萬年青提取物對于糖尿病的治療作用存在劑量差異，為以后的深入研究提供參考與佐證.

[1]孫志偉，鄒 翔，曲中原，等.虎眼萬年青(Ornithogalum Caudatum)化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J].黑龍江醫(yī)藥，2013，26(3):378－380.

[2]徐暾海，徐雅娟，劉大有，等.虎眼萬年青的化學(xué)成分[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2000，35(1):32－36.

[3]SHI L，LIU Z Q，LIU S Y.Chemical characteristic of polysaccharides isolated from Ornithogalum caudatum Ait[J].Chem Res Chin Uni，2003，19(3):286.

[4]石 磊，王 勇，石 勇，等.虎眼萬年青多糖的原子力顯微鏡觀察[J].吉林大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2003，29(1):32.

[5]曹秀萍.虎眼萬年青中抗腫瘤活性成分的研究[D].北京:北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國藥學(xué)科學(xué)院，2010.

[6]何滟澦.虎眼萬年青提取物抗氧化功能的研究[D].哈爾濱:黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，2012.

[7]何滟澦，陳 健，葛京城，等.虎眼萬年青提取物體外清除自由基活性的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39(31):19103－19104，19109.

[8]FRAN Z G.Polysaccharides in phainmacology[J].Planta Med，1998，55(6):493－497.

[9]劉洪玲，姜惠卿，侯玉梅，等.黃芪多糖治療糖尿病的藥理作用探要[J].中國藥師，2004，7(8):585－587.

[10]黃建東.蘆丁鉻的合成及其輔助降血糖功能研究[D].北京:北京林業(yè)大學(xué)，2011.

[11]李芳芳.蘆根乙醇提取物對糖尿病小鼠降血糖作用的實(shí)驗(yàn)研究[D].吉林:延邊大學(xué)，2012.

[12]孫子林，葛祖愷.糖尿病動(dòng)物模型及其進(jìn)展[J].中國糖尿病雜志，1997，7(4):227.