不同炮制方法對珠子參中竹節(jié)參皂苷IVa含量的影響

曹紅云 牛延菲 羅宗斌 游藏

摘要：目的探究干熱烘制和濕熱蒸煮制對珠子參中竹節(jié)參皂苷Ⅳa含量的影響。方法 采用直接烘干、蒸制和煮制后烘干對珠子參進(jìn)行炮制加工，以HPLC測定不同炮制品中竹節(jié)參皂苷Ⅳa的含量。結(jié)果相比直接烘干，蒸制和煮制烘干的珠子參中竹節(jié)參皂苷Ⅳa含量有降低。結(jié)論直接干燥對珠子參中竹節(jié)參皂苷Ⅳa含量影響不大，該方法適合珠子參藥材的加工炮制。

關(guān)鍵詞：珠子參；炮制方法；竹節(jié)參皂苷Ⅳa

中圖分類號：R283.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1007-2349（2015）04-0066-03

珠子參又名珠兒參，扣子七，鈕子七。為五加科植物珠子參[ Pan，ax japonicus C.A.Mey.var. major（ Burk.）C.Y.Wu etK.M.Feng]或羽葉三七[Pan，ax japonicus C.A.Mey.var.bipin-natifidus（ Seem.）C.Y.Wu et K.M.Feng]的干燥根莖。主產(chǎn)于云南、四川、貴州、陜西、西藏等西部山區(qū)。具有補(bǔ)肺、養(yǎng)陰、活絡(luò)、止血等功效。用于陰氣兩虛、煩熱口渴、虛勞咳嗽、跌撲損傷、關(guān)節(jié)痹痛、咳血、吐血、崩漏、外傷出血等癥狀[1-2]。現(xiàn)代研究表明，珠子參主要化學(xué)成分為皂苷、多糖、氨基酸和多種微量元素[3-5]，其主要成分皂苷以齊墩果烷型三萜皂苷為主，具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜[6]、抗炎[7]、提高機(jī)體細(xì)胞免疫功能[8]抗腫瘤[9]等活性。2010年版中國藥典中記載珠子參秋季采挖，直接干燥或蒸（煮）透后干燥可用，但民間藥農(nóng)多采用直接曬干后銷售使用。為了客觀的評價(jià)珠子參藥材的質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)采用低溫烘干和煮制、蒸制后烘干等加工方法炮制珠子參，研究不同加工炮制對珠子參中竹節(jié)參皂苷Ⅳa含量的影響，為珠子參質(zhì)量控制提供依據(jù)。1 儀器與試藥1.1 儀器及試液 Agilent 1100高效液相色譜儀；SK-3200LH型超聲清洗儀（180W，59kHz）；AG285分析天平（梅特勒，瑞士）；乙腈（色譜純，默克公司）；其余為分析純；水為云南省藥物研究所自制超純水。1.2試藥 竹節(jié)參皂苷Ⅳa對照品（購于中檢所，批號：111861 - 201001）。藥材來自麗江珠子參基地。經(jīng)云南省藥物所究所天然藥物資源研究中心高麗正高級工程師鑒定為五加科植物人參屬珠子參Panax japonicus C，A.Mey.var.major（ Burk）C.Y.Wu et K.M.Feng。2方法與結(jié)果2.1 色譜條件 色譜柱Waters XTerral C18，0.46×250 mm，5μm；流動相乙腈-0. 2%磷酸（37：63）；檢測波長203 nm；流速1.0 mL.min-1；進(jìn)樣量20μL；理論塔板數(shù)以竹節(jié)參皂苷Ⅳa峰計(jì)算不低于3000。竹節(jié)參皂苷Ⅳa對照品HPLC圖見圖l。2.2對照品溶液的制備精密稱取竹節(jié)參皂苷Ⅳa對照品適量，加60%乙醇溶液配制成1.198 mg.mL-l的貯備液，待用。精密吸取2 mL于10 mL量瓶中，加60%乙醇至刻度，搖勻，作為對照品溶液。2.3供試品溶液的制備取藥材粉末（過2號篩）約0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60%乙醇25 mL，稱定重量。超聲處理40 min，取出放冷，再稱定重量，加60%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。2.4線性關(guān)系的考察分別精密吸取上述貯備液0.5，1，2，3，4，5mL，于10 mL量瓶中，加60%乙醇至刻度，搖勻，配制成0. 0599 ，0. 1198 ，0. 2396，0.3594，0.4792，0.5990 mg·mL-l的系列溶液，分別進(jìn)樣20μ L，測定峰面積，以竹節(jié)參皂苷Ⅳa對照品的進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，計(jì)算的回歸方程：Y=362. 28385X+9.03649（R=0.99998），線性范圍：1.198～11. 980μg，見圖2。2.5精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液，照2.1項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次測定竹節(jié)參皂苷Ⅳa峰面積。計(jì)算得RSD0. 71%，結(jié)果表明本法精密度良好。2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液分別于0、2、4、8、18、24 h內(nèi)進(jìn)樣，照2.1項(xiàng)下色譜條件測定竹節(jié)參皂苷Ⅳa峰面積。計(jì)算得RSD l.43%，結(jié)果表明樣品在24 h內(nèi)峰面積穩(wěn)定。 2.7重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取同一批號的樣品6份，按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照2.1項(xiàng)下色譜條件測定竹節(jié)參皂苷Ⅳa峰面積。計(jì)算得RSD l.47%，結(jié)果表明本法具有良好的重復(fù)性。2.8加樣回收率分別精密稱取已測定含量的樣品6份（每份約0.5 g），精密加入竹節(jié)參皂苷Ⅳa對照品適量，按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照2.1項(xiàng)下色譜條件測定竹節(jié)參皂苷Ⅳa含量，測得平均加樣回收率為102. 50%，RSD l.17%。3炮制品的制備

直接烘干珠子參三個不同地下部位，分別為大珠（直徑約為5～6 cm）、中珠（直徑約為2.5～3.5 cm）、小珠（直徑約1.5 cm），各自取新鮮藥材300 g置于40qC的烘箱中烘干，即得。

煮制烘干珠子參三個不同地下部位，分別為大珠、中珠和小珠，各自取新鮮藥材300 g三份，分別在沸水中煮沸5 min、10 min和15 min，濾去水分，置于40C的烘箱中烘干，即得。蒸制烘干珠子參三個不同地下部位，分別為大珠.中珠和小珠，各自取新鮮藥材300 g三份，分別在蒸籠中蒸制5 min、10 min和15 min，濾去水分，置于40C的烘箱中烘干，即得。4樣品含量測定

分別稱取不同加丁炮制的珠子參藥材粉末0.1 g，按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果見表1。5討論不同加工炮制方法對珠子參藥材中竹節(jié)參皂苷Ⅳa的含量有較明顯影響，從表1中結(jié)果可見，珠子參珠子越大，竹節(jié)參皂苷Ⅳa的含量越高；相比較直接烘干，煮制和蒸制后藥材中竹節(jié)參皂苷Ⅳa的含量都有不同程度下降，而且隨著煮制和蒸制時間的延長，珠子參藥材中竹節(jié)參皂苷Ⅳa的含量也有逐漸下降的趨勢。分析其主要原因可能是由于竹節(jié)參皂苷Ⅳa為熱敏感性成分，不耐高溫，在高溫下其成分結(jié)構(gòu)有一定的破壞，因而含量降低?？傊煌谥品椒▽χ樽訁⒒瘜W(xué)成份的影響很大，為了提高有效藥物含量，選擇正確的炮制方法，研究其炮制前后化學(xué)成份變化、作用機(jī)制和原理是十分必要的。參考文獻(xiàn)：[1]國家藥典委員會中華人民共和國藥典[S]一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：254.[2]趙仁，趙毅，等，珠子參研究進(jìn)展[J].中國現(xiàn)代中藥，2008，10（7）：3-6.[3]王答祺，樊娟，李淑蓉，等羽葉三七根莖的三萜皂苷成分及其化學(xué)分類意義[J].云南植物研究，1988，10（1）：101[4]池群，郭建文.珠子參的微量元素分析比較[J].西北藥學(xué)雜志，1993，8（2）：61.[5]宋小妹，李林，楊光明，等不同產(chǎn)地珠子參竹節(jié)參皂苷Ⅳa含量測定[J].中國中藥雜志，2010，35（7）885-887.[6]李巧云，趙恒，岳松健，等.大葉珠子參總皂苷的鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛作用研究[J].華西藥學(xué)雜志，1993，8（2）：90.[7]賀海波，石孟瓊，陳濤，等，珠子參水提物抗炎鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].第三軍醫(yī)大學(xué)報(bào)，2010，32（ 20）：2224-2227.[8]陳濤，陳茂華，胡月琴，等.珠子參多糖抗肝癌作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2010，21（6）：1329-1331[9]陳濤，陳茂華，胡月琴，珠子參多糖提取及抗癌活性研究[J].中國中藥雜志，2010，35（7）：912-914.（收稿日期：2014-10-10）