干拌料方式添加液態(tài)酵益的菌群活性變化

姜曉君

摘要 研究全價料中添加液態(tài)酵益在存放期內(nèi)菌群活性的動態(tài)變化，將活菌制劑液態(tài)酵益7.5 mL加入3 kg飼料中，再加入6 g紅糖進行無氧發(fā)酵，分別取發(fā)酵后第0、2、4、6、8、10、14、21、28天的樣品進行檢測微生物數(shù)量變化情況。結果表明：酵益此類微生態(tài)制劑加入飼料中發(fā)酵，代表性微生物啤酒酵母、枯草芽孢桿菌和植物乳酸桿菌的數(shù)量均在前6 d之內(nèi)達到最大值，也就是在飼料發(fā)酵后的4～8 d飼喂動物，這樣有益性最大，而在保存30 d后，有益菌的數(shù)量下降到較低水平，不適宜繼續(xù)保存。

關鍵詞 微生態(tài)制劑；液態(tài)酵益；啤酒酵母；植物乳酸桿菌；枯草芽孢桿菌

中圖分類號 S816.7 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2015）12-0255-01

微生態(tài)制劑是利用動物體內(nèi)正常微生物成員及其代謝產(chǎn)物或生長促進物質經(jīng)特殊加工工藝制成的制劑，能夠補充動物腸道內(nèi)減少或缺乏的正常微生物，具有無毒副作用、無耐藥性、無殘留、成本低、效果顯著等特點。微生態(tài)制劑可以增強機體免疫力，提高飼料轉化率和畜禽生產(chǎn)性能，降低畜禽產(chǎn)品中膽固醇含量，減少養(yǎng)殖環(huán)境及糞便中有害物質的含量，經(jīng)濟效益和社會效益顯著[1-3]。

試驗液態(tài)微生態(tài)制劑選用芽孢桿菌（枯草芽孢桿菌和酪酸菌）、乳酸球菌（屎腸球菌）和酵母菌（釀酒酵母和異常畢赤酵母）。其中，枯草芽孢桿菌具有多種酶活性，能降解許多復雜的碳水化合物，利于促進動物消化吸收、改善飼料轉化率，并且芽孢桿菌與雙歧桿菌有共生作用，能促進雙歧桿菌的生長；釀酒酵母和異常畢赤酵母不僅蛋白含量較高，而且能抑制大腸桿菌，破壞其致病機制，能吸附有害物質和病原菌（如金黃色葡萄球菌），促進有益菌生長；屎腸球菌粘附能力很強，能定植于腸道中并發(fā)揮一定的益生作用。每種菌混合后協(xié)同配合，在動物體內(nèi)起到營養(yǎng)和調(diào)節(jié)微生態(tài)作用[1-4]。

1 材料與方法

1.1 飼料發(fā)酵

用液體微生態(tài)制劑對飼料進行接種發(fā)酵，尤其是厭氧發(fā)酵是充分發(fā)揮微生態(tài)制劑促生長、抗病增產(chǎn)、增收和消除惡臭等作用的主要技術之一。原料配比：3 kg全價飼料+6 g紅糖+7.5 mL微生態(tài)制劑（酵益）。厭氧發(fā)酵：將接種后的飼料加入罐、缸和密閉性較好的塑料袋中，充分壓實后密封發(fā)酵（注意密封能否嚴格是厭氧發(fā)酵成功的關鍵），發(fā)酵溫度為15～35 ℃。

1.2 培養(yǎng)基配方

啤酒酵母培養(yǎng)基：酵母膏10 g、葡萄糖20 g、蛋白胨20 g、瓊脂20 g、蒸餾水1L；枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基：肉膏3 g、氯化鈉5 g、蛋白胨10 g、瓊脂20 g、蒸餾水1 L；植物乳酸桿菌培養(yǎng)基：蛋白胨10 g、酵母膏5 g、葡萄糖5 g、乙酸鈉5 g、吐溫-80 1 g、KH2PO4 2 g、MgSO4·7H2O 0.2 g、MnSO4·7H2O 0.05 g、CaCO3 20 g、瓊脂20 g、蒸餾水1 L。

將3種菌所需的培養(yǎng)基原料配好，加入水后加熱溶解，然后放在高壓滅菌鍋里121 ℃高壓滅菌15 min備用。

1.3 試驗方法

將活菌制劑酵美樂7.5 mL加入3 kg飼料中進行無氧發(fā)酵，分別取發(fā)酵后第0、2、4、6、8、10、14、21、28天的樣品，從中稱取10 g（精確到0.01 g），加入帶玻璃珠的盛有100 mL無菌水的三角瓶中，在旋轉式搖床上200 r/min充分震蕩30 min，靜止片刻待用。

用無菌吸管吸取1 mL上述菌懸液加入盛有9 mL無菌水的試管中，混成1∶10的菌懸液。這樣依次稀釋，分別得到1∶100、1∶1 000稀釋度（每個稀釋度必須更換無菌吸管），每個樣品均稀釋約102倍。

用無菌吸管分別吸取1 mL稀釋102倍菌懸液加入培養(yǎng)皿內(nèi)，分別與啤酒酵母、枯草芽孢桿菌和植物乳酸桿菌的培養(yǎng)基混勻，每一稀釋度重復2次，同時用無菌水作為空白對照，枯草芽孢桿菌（蠟樣芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌）培養(yǎng)基倒置于37～40 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，植物乳酸桿菌培養(yǎng)基倒置于37～40 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～5 d，啤酒酵母培養(yǎng)基倒置于28～30 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1～2 d。培養(yǎng)完畢后記錄所得數(shù)據(jù)。

1.4 統(tǒng)計分析

將每次得到的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計，計算公式如下：

發(fā)酵后飼料含菌量=菌落平均數(shù)×菌懸液體積×稀釋倍數(shù)

2 結果與分析

由圖1可知，每種代表菌在加入飼料后數(shù)量迅速增加，而枯草芽孢桿菌則比另2種菌相對增加得遲緩些，在第6天時才達到最大值。在拌入飼料的第4～6天內(nèi)，3種菌數(shù)量比較可觀，但在第8天后數(shù)量就開始遞減。其中，啤酒酵母菌在第8～10 天時下降的幅度比其他2種菌要劇烈，另2種菌則下降的比較平緩。在干拌料上來看，當酵益加入飼料后，最好能在第4～6天時飼喂動物，在保存30 d以后菌種數(shù)量已經(jīng)下降的相對較低。由此可以看出，酵益加入飼料后的保存期限最好在30 d內(nèi)，否則飼料內(nèi)加入的酵益則起不到預期的效果。

3 結論與討論

（1）本試驗利用菌種之間的協(xié)作共生，初步確定了多菌種混合液態(tài)微生態(tài)制劑的發(fā)酵溫度為室內(nèi)常溫（約25 ℃）。這種工藝所選用生產(chǎn)原料價格低廉，生產(chǎn)工藝簡化，能回收利用包括菌體及其代謝產(chǎn)物和底物在內(nèi)的所有發(fā)酵物，既保留活性成分又沒有廢液污染[1-3]。

（2）多菌種混合液態(tài)微生態(tài)制劑蛋白含量和營養(yǎng)成分較高，可減少畜禽疾病的發(fā)生，降低養(yǎng)殖成本，應用前景廣（下轉第257頁）

闊。本試驗證明了多菌種混合液態(tài)發(fā)酵的可行性，但只是初步確定了生產(chǎn)發(fā)酵工藝，在菌體共生協(xié)作機理方面還研究得較少，對于實踐缺乏有效的理論指導，并且發(fā)酵周期較長，所以需要進一步優(yōu)化發(fā)酵參數(shù)[1-3]。

（3）3種菌的的生長趨勢有所不同，啤酒酵母和植物乳酸桿菌均是在第4天時達到最大值，而枯草芽孢桿菌則是在第6天時達到最大值。在最高值上，是啤酒酵母菌的數(shù)量最高，植物乳酸桿菌其次，枯草芽孢桿菌則最低。

4 參考文獻

[1] 孫媛.液態(tài)復合微生態(tài)制劑的研制及在仔豬生產(chǎn)上的應用[D].長春：吉林農(nóng)業(yè)大學，2006.

[2] 初冠群.淺談微生態(tài)制劑的研究應用與發(fā)展現(xiàn)狀[J].中國畜禽種業(yè)，2012（2）：21-22.

[3] 李桂杰，張鈞利.動物微生態(tài)制劑的研究進展[J].飼料工業(yè)，2000（11）：6-8.

[4] 周淑芹，孫文志.酵母培養(yǎng)物[J].中國飼料，2003（5）：31-32.endprint