禽類病料采集

李岳娟 丁勇 袁梟龍

(河北省懷安縣畜牧水產局，076150)

隨著養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴大與集約化快速發(fā)展，動物防疫水平不斷提升，疫病監(jiān)測在各級動物防控部門實驗室內被啟動，準確評價免疫水平與身體狀況的需要實驗室血清學檢測和檢測（包括組織器官、糞便及各種棉試子）樣品的實驗研究方法。監(jiān)測就需要大量的血清和檢測樣品，采血是取的血清的主要手段。采血是一項提前準備性工作，采血的質量，直接影響到監(jiān)測與實驗結果的判定，而采樣時間、保存、運送等因數(shù)都影響著結果的準確性、可靠性。

1 禽的采血技術

1.1 采血前的準備工作。按常規(guī)操作來完成。

1.1.1 采血用具的消毒。按常規(guī)操作來完成。

1.1.2 采血部位按常規(guī)規(guī)程進行剪毛、清洗與消毒。

1.1.3 采血過程要防止擴散與傳染，殘余血液及所用的器具全部進行焚燒與消毒深埋。

1.1.4 抗凝劑的選用（指用全血的樣品），常用的抗凝劑有：①枸椽酸鈉，常用3.8%的溶液，適用于血鈣的測定和血測定時的抗凝。②肝素：按要求標準配置肝素鈉0.1%水溶液，分裝于小試管（或小玻璃管）可使5—10ml血液不凝固，肝素對血中有機成分和無機成分測定均無影響。③雙草酸鹽抗凝劑，可用市售藥品配制，適量加入供采血用的試管（或小瓶）中，一般0.5—1ml，置干燥箱內，80—100℃烘干備用。④乙二胺四乙酸二鈉配成20%的溶液2滴可使7ml全血抗凝。

1.1.5 分離血清時，放置血液的試管，小玻璃瓶要傾斜成45℃角靜置，利于血清析出。

1.1.6 人員自我防護，如戴眼鏡、口罩、頭盔與穿防護服等。

1.2 血液的采集方法

1.2.1 禽冠采血法：用針頭刺破禽冠（或在禽冠尖端剪開一個小口子）吸取血液可用手擠壓禽冠吸取50—60UI血，供作血涂片用。多用于需血量較小的采血，注意消毒工作，同時作好止血，可用碘酒涂抹傷口。

1.2.2 禽頸靜脈采血法：右側頸靜采血，左手食指和中指壓夾住禽頭部，并使頭偏的一側，無名指、小指和手掌握住軀干，拇指壓靜脈心臟端以使靜脈充血舒張。右手持注射器、針頭由翼根部向翅膀方向沿靜脈平行刺入羽翼、傾斜30--45℃沿血管方向一側0.4cm挑破皮膚前行0.4cm刺入靜脈，再與血管平行進針0.35cm抽取血液。用酒精棉球壓迫針刺處止血。適用于30日齡內的禽類。

1.2.3 禽翅內側靜脈采血法：可采血10—20ml，①器械及用具的準備與消毒：棉球、小試管或細塑料管、試管架、鑷子、7＃針頭的一次注射器。②手提保定。助手一手抓住兩條禽腿，一手抓禽翅根部，以拇指按壓靜脈。③確定部位選擇：注意術者左手大拇指捏住雞禽內側，其余四指捏住禽翅外側展平禽翅，右手握針，沿血管方向刺入。

1.2.4 禽心臟采血法：①禽左側向上橫臥保定、拔去胸上部羽毛，尋找由胸骨走向肩胛的皮下大靜脈，用酒精棉球消毒，后碘酊棉球標記部避開胸骨7#針頭刺入，邊刺邊抽動活塞，若刺入心臟，便有血液涌入注射器。②仰臥保定，禽頭部朝向術者，拔去胸上部少許羽毛，用手指在胸骨上一方、嗉囊下方摸得一凹窩，右手持7#針頭自持有血液涌入注射器，取血后做止血與消毒工作。

2 禽類的病料采集

2.1 采集病料樣品是診斷檢測中至關重要的，采集的樣品具有代表性、時效性、普遍性。病料采集應符合以內容：①典型性：選取癥狀最典型或病變最明顯，具有代表性、普遍性，最好未經藥物治療過的病料。②病料采樣的比例：根據診斷檢測規(guī)程的具體要求，嚴格按照規(guī)程要求采集足夠樣品，不同疫病的所需樣品不同，按凝似疫病的具體要求病料來采集。③根據檢測要求及檢測對象和檢驗項目的不同，選適當?shù)牟蓸訒r機，對檢測結果很重要，應嚴格按規(guī)定的規(guī)程時間范圍取樣。④無菌操作條件下采樣。采集檢驗樣品，要供病理組織學檢驗、病原學、血清學檢驗，要無菌操作，對用具、容器須事先作好消毒滅菌工作，按具體規(guī)程來操作。特別是尸體剖檢時需先采集樣品，后剖檢，以免人為污染。病理組織學檢查可選用典型病的剖檢后的樣品。樣品數(shù)量要滿足診斷檢測的需要，有剩余，以備復檢使用。⑤一個樣品一個容器，立即密封，作冷藏、冷凍或其他處理，供病毒學檢驗的樣品，數(shù)小時內要送到實驗室，超時應冷凍保存，裝樣品的容器應貼上標簽（要防止因凍結而脫落），標明采集時間、地點、禽名稱、發(fā)病時間、死亡等具體相關信息。⑥人員安全與樣品包裝。首先采樣人自身防護按規(guī)程要求來做，同時防止病原擴散條例技術規(guī)程來操作以防范病原外泄，同時防止它本身被外部環(huán)境的污染、包裝樣品應防止損壞、污染和外泄等。按規(guī)定的時間送往實驗室，否則影響檢測質量和結果的真實性、可靠性。

2.2 血液的采集

2.2.1 病毒學檢驗血液樣品，在禽發(fā)病初體溫升高期時采樣。全血樣品必須是抗凝血，可選用肝素。因為杞緣酸鈉對病毒有輕微的毒性作用可殺死病毒。按常規(guī)操作規(guī)程準備真空采血等或其他滅菌容器內每ml血液樣品外加1ml的0.1%肝素，加入血液應搖均混合。用脫纖血時，先在容器內加入適量小玻璃球，加入血液后，反復震蕩（亦可用震蕩器震蕩）、各1000單位每毫升血液加入量。

2.2.2 細菌學檢驗樣品，在發(fā)病初期或發(fā)病高峰期最好為未經抗生素藥物治療。同時加抗血凝劑，同上，但值得注意不加雙抗（青鏈霉素）或慶大或其它抗生素，貼標簽送檢，置4℃冰箱備用，但存放時間不宜過久，以免發(fā)生溶血。

2.2.3血清血學，按常規(guī)操作，便于擴出血清多為主，亦可用離心機折出血清。

2.2.4 寄生蟲檢驗，一般在取血時直接做成血涂片送檢即可。

2.3 組織樣品采集：按常規(guī)要求采取內臟，注意應用PBS液即可。

2.4 糞便樣的采集：病毒學檢驗樣品，用新鮮糞便滅菌的棉試子從置腸深處或泄殖腔粘膜上蘸取糞便，并立即放人裝有PBS液的試管內密封。細菌寄生蟲檢驗樣品與之相似。

2.5 禽流感樣品采集及相關運輸保存:禽流感病毒主要在呼吸道粘膜細胞內增殖，一般最少要求8只頻臨死亡的病禽采集樣品，泄殖腔試子、器官試子、肺與氣管混合樣、腸及內容物的混合樣，肝、脾、腎和腦、肺等組織混合樣各8個放入PBS液。

2.5.1 泄殖腔棉試子將醫(yī)用棉試子插入禽肛門并旋轉，使糞便粘在棉試子上，后放人PBS液的緩沖液中送檢運輸。

2.5.2 氣管棉試子：活禽采樣時，將置棉試子插入活禽的氣管內，輕輕擦試氣管壁并放人緩沖液中。

2.5.3 糞便，取頻臨或剛死亡禽的新鮮糞便，用醫(yī)用棉試子沾取糞便，放在PBS緩沖液中。

2.5.4 采集15只病禽血液樣本，采血樣為3—5ml，自然折出血清或離心均可，同時棉試子為防制感染可用下列PBS液；PH值調為7.0—7.4的PBS值，加入3000UI/ml青霉素、鏈霉素3mg/ml、慶大霉素1—2萬UI/ml、制霉菌素（10000UI/ml），但糞便和泄殖腔試子抗生素分為：1.5萬UI/ml，制霉菌素（50000UI/ml），PH值應調至7.4。而新城疫，以腦和肺含毒量最高，骨髓含毒時間最長。

2.6 操作規(guī)程

2.6.1 人員自我護服規(guī)程。

2.6.2 采樣環(huán)境要求規(guī)程。

2.6.3 采樣單填寫要求規(guī)程。