高效液相色譜儀與聯(lián)用技術(shù)在藥物分析及藥物質(zhì)量控制中的應(yīng)用

黃潔瓊

（蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)部藥學(xué)院，江蘇 蘇州 215006）

高效液相色譜法是現(xiàn)代藥物分析與藥物質(zhì)量控制的一種重要手段。高效液相色譜法引用了氣相色譜的理論，用高壓輸送流動相，用小粒徑的填料填充色譜柱，使得柱效率遠(yuǎn)高于經(jīng)典液相色譜。色譜柱后連有高靈敏度的檢測器，色譜柱分離出的樣品組分和含量被轉(zhuǎn)化成可供檢測的信號，可以對樣品進(jìn)行定性和定量分析以及各組分分離情況的判斷，因此檢測器的好壞直接決定藥物分析的準(zhǔn)確度和靈敏度。筆者查閱相關(guān)文獻(xiàn)，對高效液相色譜儀與不同的檢測器聯(lián)用技術(shù)及其在藥物分析與藥物質(zhì)量控制中的應(yīng)用做一小結(jié)。

1 高效液相色譜儀聯(lián)用二極管陣列檢測器（HPLC-DAD）

二極管陣列檢測器是一種光學(xué)多通道檢測器，20世紀(jì)80年代開始使用。其原理是由光源發(fā)出的光線經(jīng)過樣品池，然后經(jīng)分光技術(shù)，使所有波長的光在檢測端同時(shí)被檢測，得到時(shí)間、波長和光強(qiáng)度的三維譜圖。在實(shí)際應(yīng)用中，二極管陣列檢測器可以同時(shí)檢測出多個(gè)波長的色譜圖，寬譜帶檢測和計(jì)算不同波長的相對吸光度，所以一次進(jìn)樣就能得到樣品所有組分的信息，而每個(gè)組分都有全波段的光譜吸收圖，從而對樣品進(jìn)行定性、定量分析。劉欣榮等[1]采用高效液相色譜儀聯(lián)用二極管陣列檢測器對羥基喜樹堿人血清白蛋白納米顆粒中的藥物含量進(jìn)行了測定，該方法準(zhǔn)確可靠、簡單易行。林佶等[2]采用高效液相色譜儀聯(lián)用二極管陣列檢測器對三七中人參皂苷Rb1的純度進(jìn)行了鑒定，選擇203nm作為DAD檢測人參皂苷Rb1的波長，用外標(biāo)法準(zhǔn)確測得三七樣品中人參皂苷Rb1的平均含量。

2 高效液相色譜儀聯(lián)用熒光檢測器（HPLC-FLD）

熒光檢測器也是高效液相色譜儀常用的一種檢測器，用于檢測能產(chǎn)生熒光的化合物。熒光檢測器由激發(fā)光源、激發(fā)光單色器、樣品池、發(fā)射光單色器、和檢測發(fā)光強(qiáng)度的光電檢測器組成。光源發(fā)出的光經(jīng)過激發(fā)光單色器后得到所需波長的激發(fā)光，激發(fā)光通過樣品池被熒光物質(zhì)吸收，熒光物質(zhì)受激發(fā)后發(fā)射熒光，經(jīng)發(fā)射光單色器后由光電檢測器接收。熒光檢測器選擇性高，只對熒光物質(zhì)有響應(yīng)；靈敏度也高，最低檢出限可達(dá)10-12ug/ml，適用于多環(huán)芳烴及各種熒光物質(zhì)的痕量分析，也可用于檢測不發(fā)熒光但經(jīng)化學(xué)反應(yīng)后可發(fā)熒光的物質(zhì)。孫麗等[3]采用反相高效液相色譜聯(lián)用熒光檢測器，準(zhǔn)確測定了維壓靜片中利血平的含量。

3 高效液相色譜儀聯(lián)用示差折光檢測器（HPLC-RID）

示差檢測器是根據(jù)折射原理設(shè)計(jì)的一種檢測器，可連續(xù)檢測樣品流路與參比流路間液體折光指數(shù)差值的檢測器。光從一種介質(zhì)進(jìn)入到另一種介質(zhì)中時(shí)，由于兩種物質(zhì)的折射率不同就會產(chǎn)生折射。當(dāng)樣品組分和流動相的折光率不同時(shí)，就可被檢測。示差折光檢測器是一種濃度型檢測器，在一定濃度范圍內(nèi)檢測器的響應(yīng)信號與溶質(zhì)濃度成正比，但其不適用于梯度脫洗。戴立波等[4]用高效液相色譜儀聯(lián)用示差折光檢測器建立了一種簡單、快速、準(zhǔn)確分析肌醇的方法，能及時(shí)得到生產(chǎn)各個(gè)環(huán)節(jié)中肌醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)的指標(biāo)，可用于監(jiān)測肌醇生成的整個(gè)過程。

4 高效液相色譜儀聯(lián)用蒸發(fā)光散射檢測器（HPLC-ELSD）

20世紀(jì)80年代澳大利亞的Union Carbide研究實(shí)驗(yàn)室的科學(xué)家研制開發(fā)第一臺ELSD，并將其轉(zhuǎn)化為商品。此后，通過不斷改進(jìn)，ELSD的操作性能得到不斷提高?，F(xiàn)在ELSD越來越多的作為通用型檢測器用于高效液相色譜、超臨界色譜和逆流色譜中。蒸發(fā)光散射檢測器的檢測原理是先將柱洗脫液霧化形成氣溶膠，然后在加熱的漂移管中將溶劑蒸發(fā)，最后剩下的不揮發(fā)性溶質(zhì)顆粒在光散射檢測池中得到檢測。蒸發(fā)光散射檢測器不需要樣品含有發(fā)色基團(tuán)即可檢測揮發(fā)性低于流動相的任何樣品。蒸發(fā)光散射檢測器靈敏度比示差折光檢測器高，對溫度變化不敏感，基線穩(wěn)定，適合與梯度洗脫液相色譜聯(lián)用。碳水化合物、類脂、脂肪酸和氨基酸、藥物以及聚合物等的檢測均可使用蒸發(fā)光散射檢測器。段瑞等[5]用高效液相色譜儀聯(lián)用蒸發(fā)光散射檢測器測定了紅藥片中三七皂苷R1及人參皂苷Rg1、Re、Rb1的含量。該方法準(zhǔn)確，分離效果好，無干擾，可用于紅藥片的質(zhì)量控制。劉亞風(fēng)等[6]采用超高效親水作用色譜聯(lián)用蒸發(fā)光散射檢測器測定了?；撬犷w粒和?；撬岬窝垡褐信；撬岬暮?。該方法省去了復(fù)雜的樣品預(yù)處理，縮短了?；撬岬姆治鰰r(shí)間，提高了檢測工作效率。

5 高效液相色譜儀聯(lián)用電化學(xué)檢測器（HPLC-ECD）

電化學(xué)檢測器可檢測具有電活性的物質(zhì)，包括極譜檢測器、庫侖檢測器、安培檢測器和電導(dǎo)檢測器等。前三種統(tǒng)稱為伏安檢測器，用于具有氧化還原性質(zhì)化合物的檢測，電導(dǎo)檢測器主要用于離子檢測。電化學(xué)檢測器靈敏度很高，尤其適用于痕量組分分析，缺點(diǎn)是干擾比較多，電極壽命有限，對溫度和流速的變化比較敏感。李海英等[7]將高效液相色譜儀—電化學(xué)檢測器聯(lián)用技術(shù)用于硫酸阿奇霉素含量的測定及有關(guān)物質(zhì)概況的分析，取得了可喜的結(jié)果。

6 高效液相色譜儀聯(lián)用質(zhì)譜檢測器（HPLC-MSD）

質(zhì)譜檢測器是一種靈敏度高、選擇性好、指紋性強(qiáng)的通用型檢測器，可用于微量或痕量分析。高效液相色譜儀聯(lián)用質(zhì)譜檢測器是一種高度自動化、常規(guī)化的分析手段，發(fā)揮了色譜分離的長處和質(zhì)譜定性結(jié)構(gòu)分析的優(yōu)勢，在中藥色譜指紋圖譜研究中發(fā)揮著重要作用。蔡爽等[8]將超高效液相色譜聯(lián)用質(zhì)譜用于2型糖尿病大鼠糞樣代謝物指紋圖譜研究，該研究有利于糖尿病的早期診斷。徐娟等[9]用超高效液相色譜聯(lián)用質(zhì)譜法同時(shí)檢測口腔衛(wèi)生用品中的5種硝基咪唑類藥物。該方法操作簡單，結(jié)果穩(wěn)定可靠，為監(jiān)管部門規(guī)范管理口腔衛(wèi)生用品市場提供了依據(jù)。

總之，高效液相色譜法吸取了經(jīng)典液相色譜和氣相色譜兩種方法的優(yōu)點(diǎn)，其檢測器也從固定單波長紫外檢測器發(fā)展到可變波長紫外一可見光檢測器、示差析光檢測器、熒光檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器、電化學(xué)檢測器、質(zhì)譜檢測器以及核磁共振檢測器等。隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，檢測器會向著靈敏度高、選擇性好、適應(yīng)范圍廣等方向發(fā)展，檢測器的聯(lián)用技術(shù)也逐步完善。將不同的檢測器聯(lián)用可以在一次進(jìn)樣分析中得到更多、更準(zhǔn)確的信息，這使高效液相色譜檢測技術(shù)在藥物分析與藥物質(zhì)量控制方面具有不可替代的作用。

［1］劉欣榮,王龍,盧懿,等.HPLC法測定羥基喜樹堿人血清白蛋白納米顆粒中的藥物含量[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2009,1:48.

［2］林佶,段志敏,萬玉萍,等.HPLC二極管陣列檢測器定量分析三七中人參皂苷Rb1[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué),2004,12(6):1273.

［3］孫麗,游強(qiáng),聞京偉.中國藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].2003,4(6).

［4］戴立波,李建橋,胡清.采用帶示差折光檢測器的高效液相色譜法檢測肌醇[J].化學(xué)工業(yè)與工程技術(shù),2006,8.

［5］段瑞,沙冬旭,楊文.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2008,5:376.

［6］劉亞風(fēng),祝偉霞,袁萍,等.超高效親水作用色譜—蒸發(fā)光散射檢測?；撬犷w粒和牛磺酸滴眼液中?；撬岬暮縖J].分析試驗(yàn)室,2011,3:101.

［7］李海英,陳悅.西北藥學(xué)雜志,2003,8:147.

［8］蔡爽,霍韜光,徐靜華,等.超高效液相色譜—質(zhì)譜用于2型糖尿病大鼠糞樣代謝物指紋圖譜研究[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2009,10:811.

［9］徐娟,陳健,邵琳智,等.超高效液相色譜法同時(shí)檢測口腔衛(wèi)生用品中的硝基咪唑類藥物[J].色譜,2011,5:450.