空心莧質(zhì)量標準初步研究

曾祥燕，顏萍花，唐玉榮，蔡毅（廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧　530001）

空心莧質(zhì)量標準初步研究

曾祥燕，顏萍花，唐玉榮，蔡毅
（廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧530001）

摘要：［目的］對空心莧質(zhì)量標準進行初步研究。［方法］通過生藥學(xué)鑒別研究，并按照2010年版《中華人民共和國藥典》附錄方法對空心莧的水分、總灰分、酸不溶性灰分及浸出物含量等進行測定。［結(jié)果］建立了空心莧的生藥學(xué)鑒別方法，初步擬定其水分不得超過15%，總灰分低于23%，酸不溶性灰分小于4%，水溶性浸出物含量大于30%。［結(jié)論］所建立的方法可為空心莧藥材質(zhì)量標準的制定提供實驗依據(jù)。

關(guān)鍵詞：空心莧；質(zhì)量標準；生藥學(xué)

空心莧，又名空心蕹、水花生、過塘蛇、水馬齒莧、肥豬菜、喜旱蓮子草、空心蓮子草等，來源于莧科植物空心莧Alternanthera philoxeroides（Mart）Griseb的全草，具有清熱、涼血、解毒功效，內(nèi)服可用于乙腦、流感初期、流行性出血性結(jié)膜炎、肺結(jié)核咯血，外用可治濕疹、帶狀皰疹、疔瘡、毒蛇咬傷等疾?。?］?，F(xiàn)代研究表明空心莧含有甾醇、三萜、皂苷和黃酮類等化學(xué)成分［2-5］，并具有抑菌、抗病毒、抗甲型H3N2流感病毒和抗呼吸道合胞病毒等藥理作用［6-11］。本文通過對其進行生藥學(xué)初步研究，旨為其質(zhì)量標準的建立提供實驗依據(jù)。

1　試藥與儀器

1.1試藥空心莧采于廣西各地，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)蔡毅教授鑒定為莧科植物空心莧Alternanthera philoxeroides（Mart）Griseb.的全草；薄層層析硅膠G（化學(xué)純，青島海洋化工公司）；其余試劑均為化學(xué)純；水為純凈水。

1.2儀器Leica Miccrosystems（德國萊卡儀器公司，型號: DFC500）；Leica光學(xué)顯微鏡（德國萊卡儀器公司，型號: DM2500）；自動輪轉(zhuǎn)切片機（德國萊卡儀器公司，RM2145）；上皿電子天平（上海精科天平，型號:FA1104）；超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，型號:KQ5200B）。

2　生藥學(xué)鑒別

2.1藥材性狀鑒別全草長短不一，扁莖圓柱形，有縱直條紋，表面黃棕色；莖節(jié)處簇生白色絨毛和棕褐色須狀根；斷面中空。葉對生，皺縮卷曲，兩面均具疏生短毛。偶見頭狀花序單生與葉腋，具總花梗；花白色。氣微，味微苦澀。

2.2顯微鑒別

2.2.1莖橫切面類圓形。表皮細胞1列，類長方形，排列緊密，外被角質(zhì)層，可見氣孔及非腺毛；厚角細胞2～3列，成不連續(xù)的環(huán)狀。皮層由4～10列薄壁細胞組成，細胞類圓形或橢圓形，排列疏松。維管束外韌型，8～15個，大小不等，排列成環(huán)。韌皮部狹窄，由韌皮薄壁細胞和篩管組成，外側(cè)可見纖維束。形成層明顯，束間形成層內(nèi)方有1～6列厚壁的木化細胞，與木質(zhì)部外側(cè)的木化細胞連接成環(huán)狀。木質(zhì)部由木薄壁細胞和導(dǎo)管等組成，管徑較大，近圓形，內(nèi)側(cè)的木薄壁細胞壁未木化。髓部寬廣，細胞較大，常形成空腔。皮層和髓部散在有異形細胞，內(nèi)含草酸鈣簇晶。見圖1、圖2。

圖1　空心莧莖橫切面詳圖

圖2　空心莧莖橫切面放大示意圖

2.2.2葉橫切面上表皮細胞1列，類圓形或長方形，外被角質(zhì)層；下表皮細胞較小，可見氣孔及非腺毛。柵欄細胞圓柱形，1～2列，不通過主脈；海綿細胞3～4列，排列疏松；兩組織間散在有異形細胞，內(nèi)含草酸鈣簇晶。主脈處有3個外韌型維管束，木質(zhì)部在上方，韌皮部在下方。上下表皮內(nèi)具1~數(shù)列厚角細胞。見圖3。

圖3　空心莧葉橫切面詳圖

2.2.3葉表面片上表皮細胞垂周壁平直或微波狀，可見直軸式氣孔及兩種多細胞非腺毛，一種短小，似蠶形；另一種較長，約由3～5個細胞構(gòu)成，具疣狀突起。下表皮細胞垂周壁波狀彎曲，氣孔較多，亦見兩種非腺毛。見圖4。

圖4　空心莧葉表面圖

2.2.4全草粉末特征非腺毛易見，一種似蠶形，約由6～8個細胞構(gòu)成，微彎曲，壁薄，粗短，先端鈍圓或鈍尖，長62～117μm，直徑18～38 μm，內(nèi)含淺棕色物；另一種非腺毛細長，約由3～5個細胞構(gòu)成，長160～380 μm，先端漸尖，近基部短小，近頂端細胞長大，壁增厚，具疣狀突起。氣孔為直軸式。大量草酸鈣簇晶散在，直徑為46～100 μm。亦見草酸鈣方晶，直徑為19～100 μm。導(dǎo)管為螺紋導(dǎo)管和梯紋導(dǎo)管，壁多木化。纖維束碎片易見。見圖5。

圖5　空心莧粉末顯微特征圖

2.3薄層鑒別

2.3.1薄層色譜條件的篩選

2.3.1.1提取溶劑的選擇取對照藥材（KXX-1）適量，分別加入乙酸乙酯、甲醇、50%乙醇、水等4種不同極性的溶劑進行提取，最終以乙酸乙酯提取液所得薄層色譜圖斑點最明顯。

2.3.1.2提取方法的選擇取對照藥材（KXX-1）適量，分別考察冷浸12 h、超聲提取30 min、水浴回流30 min等3種不同提取方法，結(jié)果表明3種方法所得薄層色譜圖基本一致，其中以超聲提取30 min最為省時簡便，故選定為提取方法。

2.3.1.3藥材取樣量的選擇取對照藥材（KXX-1）粉末3份，分別為0.5 g、1 g、2 g，分別加入乙酸乙酯各20 ml，超聲提取30 min制備供試品溶液。結(jié)果表明，藥材取樣量為0.5～2 g時，均可檢視到3個斑點。但取樣量為0.5 g時，主斑點顯色不夠清晰，取樣量為2 g時，主斑點略有拖尾；只有取樣量為1 g時，主斑點較集中且明顯，故藥材取樣量采用1 g。

2.3.1.4展開劑的選擇分別以對環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（9∶3.5∶1∶0.5）、環(huán)己烷-三氯甲烷-甲醇-甲酸（9∶3.5∶1∶0.5）、環(huán)己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（12∶3.5∶2.5∶1∶0.5）等展開系統(tǒng)進行試驗，結(jié)果顯示以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（9∶3.5∶1∶0.5）作為展開劑時，展開效果較好，斑點集中且分離較好，Rf值適中。

2.3.1.5顯色劑的選擇考察了10%磷鉬酸硫酸乙醇，10%硫酸乙醇溶液、5%香草醛濃硫酸溶液等顯色系統(tǒng)，其中以10%磷鉬酸硫酸乙醇為顯色劑所得色譜圖斑點清晰，穩(wěn)定。

2.3.1.6溫濕度的選擇試驗中考察了不同溫濕度對薄層色譜的影響，結(jié)果表明在室溫（30℃）下，相對濕度在50%～88%內(nèi)，均可使主斑點分離較好，斑點顯色集中、清晰，且比移值變化不大。

2.3.2薄層鑒別方法取樣品粉末1g，加入乙酸乙酯20ml，超聲處理30min，蒸干濃縮至1ml，照薄層色譜法（《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄ⅥB）試驗［12］附錄26，吸取供試品溶液和對照藥材溶液各2 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，在T=30℃，RT=62%條件下，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（9∶3.5∶1∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸硫酸乙醇，置于105℃下烘烤，斑點顯色清晰，結(jié)果見圖6。

圖6　空心莧薄層色譜圖

3　檢查項目

3.1浸出物測定

3.1.1浸出方法的選擇分別考察不同方法（冷浸法及熱浸法）及不同溶劑（水、不同濃度乙醇溶液）對空心莧浸出物的浸出效果，結(jié)果見表1。

表1　空心莧浸出物方法學(xué)考察（%）

結(jié)果顯示:采用熱浸法，以水為溶劑提取所得浸出物含量最高。

3.1.2樣品測定按《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄XA水溶性浸出物項下熱浸法［12］550對15批空心莧進行測定，結(jié)果見表2。

3.2水分、總灰分及酸不溶性灰分的測定按《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄IXH、IXK方法測定［12］附錄26，結(jié)果見表2。

表2　空心莧水分、總灰分、酸不溶性灰分及浸出物測定結(jié)果（%）（n=3，RSD＜3%）

表2結(jié)果顯示:空心莧水分為6.32%～12.72%，總灰分為11.55%～21.96%，酸不溶性灰分為0.43%～3.06%，浸出物為31.11%～46.16%。

4　小結(jié)

4.1空心莧的主要鑒別特征為:全草長短不一，莖節(jié)處簇生白色絨毛或棕褐色須狀根；葉對生，皺縮卷曲，兩面均有疏生短毛。莖橫切面維管束外韌型，8～15個；束間形成層內(nèi)方有1～6列厚壁的木化細胞，與木質(zhì)部外側(cè)的木化細胞連接成環(huán)狀；髓部寬廣，常裂成空腔；皮層和髓部散在有異形細胞，內(nèi)含草酸鈣簇晶。全草粉末中可見草酸鈣簇晶、方晶和兩種多細胞非腺毛。藥材粉末以乙酸乙酯提取，用環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（9∶3.5∶1∶0.5）展開，所得斑點清晰，分離度較好。上述鑒別特征明顯、穩(wěn)定，可作為藥材真?zhèn)舞b別的依據(jù)。

4.2根據(jù)15批藥材的測定結(jié)果，初步擬定空心莧藥材水分不得超過15%，總灰分低于23%，酸不溶性灰分小于4%，水溶性浸出物含量大于30%。目前對空心莧的的質(zhì)量標準研究仍處于真?zhèn)舞b定為主，其優(yōu)劣的控制方法尚需進一步研究、完善。

4.3文中數(shù)據(jù)顯示總灰分含量很高，考慮到有可能是藥材中泥土、沙石所引起，需進行酸不溶性灰分測定。結(jié)果表明空心莧中含有大量草酸鈣簇和方晶，并非含大量泥土、沙石，表明采集的藥材樣本均合格。因此，為了準確控制藥材質(zhì)量，確保臨床用藥質(zhì)量，總灰分及酸不溶性灰分的測定亦具有一定意義。

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（編輯陳明偉）

中圖分類號：R282.2

文獻標識碼：A

文章編號：2095-4441（2015）02-0071-04

收稿日期:2015-04-20

基金項目:廣西自然科學(xué)基金創(chuàng)新研究團隊項目（編號:2011GXNSFF018006）；《廣西壯藥質(zhì)量標準（第三卷）》質(zhì)量評價與標準研究項目（編號:MZY2013045）

通信作者:蔡毅，E-mail:Caiyi118@163.com