七種殺菌劑對番茄早疫病病原菌室內(nèi)毒力測定

李敏 鄧保國 吳敏娜

摘要：采用菌絲生長速率法測定異菌脲、氯溴異氰尿酸、丙森鋅、苯醚甲環(huán)唑、醚菌酯、烷基腈氧基醌、腐霉利7種殺菌劑及其復(fù)配劑對番茄早疫病菌的抑制作用。結(jié)果表明，不同殺菌劑單劑對番茄早疫病菌均有明顯的抑制作用。異菌脲、氯溴異氰尿酸、丙森鋅、苯醚甲環(huán)唑、醚菌酯、烷基腈氧基醌、腐霉利單劑濃度為0.01～5.00 mg/L時，對茄鏈格孢屬菌絲生長抑制率分別為76.15%～100%、8.76%～17.97%、2.01%～70.92%、71.82%～100%、51.35%～71.59%、42.46%～93.87%、32.16%～91.76%；EC50分別為0.033 52、77.886 50、2.268 14、0.723 80、0.049 56、0.018 972、0.018 175 mg/L。當復(fù)配劑異菌脲和腐霉利按質(zhì)量比2∶1，腐霉利和苯醚甲環(huán)唑按質(zhì)量比1∶2、2∶1，腐霉利和醚菌酯按質(zhì)量比1∶1、1∶2，苯醚甲環(huán)唑和醚菌酯按質(zhì)量比1∶1、1∶2、2∶1，異菌脲和苯醚甲環(huán)唑按質(zhì)量比1∶2時，均有明顯增效；當異菌脲和苯醚甲環(huán)唑按質(zhì)量比2∶1時，略有增效；當異菌脲和腐霉利按質(zhì)量比1∶1，腐霉利和苯醚甲環(huán)唑按質(zhì)量比1∶1，異菌脲和苯醚甲環(huán)唑按質(zhì)量比1∶1時，均有相加作用。

關(guān)鍵詞∶ 殺菌劑；復(fù)配劑；番茄早疫病菌

中圖分類號： S436 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2015）13-3142-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.13.018

Laboratory Toxicity Tests of Seven Fungicides and Their Mixtures on Alternaria solani

LI Min， DENG Bao-guo， WU Min-na

（Xinxiang Medical Microbiology Teaching and Research Section， Xinxiang 453003， Henan， China）

Abstract： In laboratory， the toxicity effects of seven commercial fungicides including Procymidone etc and their mixtures which had better preventive efficiency on Alternaria Salani were determined by measuring mycelial growth rate were teste. The results showed that each fungicide has obvious inhibitory effect on mycelial growth of Alternaria Salani. In a wide range of fungicide concentrations（0.01～5.00 mg/L），the inhibition ratio of Iprodione，Chlorobromoisocyanuric acid，Propineb， Difenoconazole， Kresoxim-methyl， Alkyl nitriles methoxy quinone and Procymidone single agent were 76.15%～100%、8.76%～17.97%、2.01%～70.92%、71.82%～100%、51.35%～71.59%、42.46%～93.87%、32.16%～91.76%；The EC50 values were 0.033 52、77.886 50、2.268 14、0.723 80、0.049 56、0.018 972、0.018 175 mg/L；The mixtures of Iprodione and Procymidone with ratio of 1∶1，Procymidone and Difenoconazole with ratio of 1∶2、2∶1，Procymidone and Kresoxim-methyl with ratio of 1∶1、1∶2， Difenoconazole and Kresoxim-methy with ratio of 1∶1、1∶2、2∶1，Iprodione and Difenoconazole with ratio of 1∶2 have particularly obvious synergistic effect.The mixtures of Iprodione and Difenoconazole with ratio of 2∶1 have obvious synergistic effect；Iprodione and Procymidone have obvious synergistic effect 1∶1，Procymidone and Difenoconazole have obvious synergistic effect 1∶1，Iprodione and Difenoconazole with ratio of 1∶1 have slightly synergistic effect.

Key words：fungicide； mixture； Alternaria solani

番茄早疫病是番茄主要病害之一，其病原菌為茄鏈格孢屬（Alternaria solani），屬半知菌亞門鏈格孢屬真菌。番茄早疫病又稱輪紋病，主要危害葉片，也能危害莖、葉柄和果實，從苗期到成株期均可發(fā)病。研究發(fā)現(xiàn)，該病是一種世界性病害，在國內(nèi)外很多地區(qū)發(fā)病率都很高，使果蔬產(chǎn)量損失嚴重[1]。20世紀80年代以來，在中國大部分地區(qū)也普遍發(fā)生，危害日趨嚴重，成為番茄生產(chǎn)中的重要病害。該病可以引起落葉、落花、落果和斷枝，對產(chǎn)量影響較大，一般減產(chǎn)20%～30%，嚴重時可以使產(chǎn)量損失50%以上甚至絕產(chǎn)[2]，而且因果實內(nèi)含有毒素，會使人體患血液病，危害人體健康[3]。由此可見，番茄早疫病給人們生產(chǎn)和健康帶來了不可低估的影響。

目前，國內(nèi)關(guān)于防治番茄早疫病的研究多都是田間防治藥效試驗報道，采用50%撲海因（異菌脲）、64%福鋅氫氧、25%敵力脫、80%的代森錳鋅等化學(xué)藥劑防治番茄早疫病均有較理想的效果[4-6]，異菌脲、氯溴異氰尿酸、丙森鋅、苯醚甲環(huán)唑、醚菌酯、烷基腈氧基醌、腐霉利7種化學(xué)殺菌劑單劑及其4種單劑的復(fù)配劑均對番茄早疫病菌具有敏感性[7-9]。本研究采用菌絲生長速率法，系統(tǒng)研究各單劑抑菌活性及其復(fù)配劑的相對毒力，通過室內(nèi)試驗篩選防治番茄早疫病菌的有效藥劑及最佳化學(xué)防治方案，為番茄早疫病的防治提供科學(xué)依據(jù)，制定出切實可行的防治措施。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株 番茄早疫病病原菌株采集于豫北地區(qū)番茄種植大棚中的病果，經(jīng)組織分離、純化獲得病原菌[10]。

1.1.2 試驗藥劑 50%異菌脲（病可丹）可濕性粉劑為山東鑫星農(nóng)藥有限公司生產(chǎn)，50%氯溴異氰尿酸（比秀）可濕性粉劑為以色列海法作用保護有限公司生產(chǎn)，80%丙森鋅（好鋅泰）水分散粒劑為陜西美邦農(nóng)藥有限公司生產(chǎn)，10%苯醚甲環(huán)唑（病可丹）水分散粒劑為山東鑫星農(nóng)藥有限公司生產(chǎn)，50%醚菌酯（信賴）可濕性粉劑為陜西美邦農(nóng)藥有限公司生產(chǎn)，32.8%烷基腈氧基醌（凱銀）水分散粒劑、35%腐霉利懸浮劑為宜賓川安高科農(nóng)藥有限責任公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 殺菌劑單劑毒力測定 將7種殺菌劑單劑與PDA培養(yǎng)基充分混勻，配制成0.01、0.05、0.10、0.50、1.00、5.00 mg/L系列濃度的平板。采用菌絲生長速率法測定，用5 mm打孔器在培養(yǎng)6 d后的番茄早疫病菌平板上打孔，用鑷子取菌絲面向下接種在含藥PDA培養(yǎng)基上，每皿1個菌碟，28 ℃倒置培養(yǎng)，以去離子水作為對照組，每個處理設(shè)3次重復(fù)，于接種后第3天檢查菌絲生長情況并用十字交叉法測量菌落生長直徑，通過菌絲生長抑制率值和各藥劑濃度對數(shù)值間的線性回歸性進行分析，求出各菌株EC50并計算相對抑菌率。抑菌率計算方法為每個菌落使用十字交叉法測量2次，取其平均數(shù)作為菌落的大小。計算7種殺菌劑對菌絲生長的抑制百分率，公式如下：

菌落增長直徑=菌落測量直徑-菌盤直徑

抑菌率=（對照菌落增長直徑-含藥培養(yǎng)基上菌落增長直徑）/對照增長菌落直徑×100%[11]

以濃度對數(shù)為橫坐標（x），相對抑制率幾率值為縱坐標（y），求出各藥劑對供試菌株的毒力回歸曲線方程y=a+bx、相關(guān)系數(shù)r與有效抑制濃度（EC50）。根據(jù)EC50分析比較不同殺菌劑對供試病菌菌絲生長的影響[12]。

1.2.2 復(fù)配劑的毒力測定 選擇抑菌活性較好的異菌脲、苯醚甲環(huán)唑、醚菌酯、腐霉利4種農(nóng)藥按其單劑濃度梯度兩兩配制成1∶1、1∶2、2∶1的含藥平板，以去離子水作為對照組，每處理設(shè)3次重復(fù)。分別以異菌脲、醚菌酯、苯醚甲環(huán)唑為標準藥劑，根據(jù)供藥試劑，計算各復(fù)配劑的實際毒力指數(shù)、理論毒力指數(shù)、聯(lián)合毒力。根據(jù)共毒系數(shù)的大小評價復(fù)配劑的增效作用，并確定最佳配比。

毒力指數(shù)（TI）=（單劑標準藥劑EC50/供試藥劑EC50）×100

混劑實際毒力指數(shù)（ATI）=（標準藥劑EC50 / 混劑EC50）×100

混劑理論毒力指數(shù)（TTI）=單劑A的TI×PA+單劑B的TI×PB（PA和PB分別為混劑中有效成分的百分含量）

共毒系數(shù)（CTC）=（混劑的實測毒力指數(shù)/混劑的理論毒力指數(shù)）×100

根據(jù)共毒系數(shù)類型的劃分標準[13]，CTC≥170為明顯增效，120≤CTC<170為略有增效，70≤CTC<120為相加作用。CTC<70為拮抗作用。

2 結(jié)果與分析

2.1 單劑抑菌率測定

異菌脲、氯溴異氰尿酸、丙森鋅、苯醚甲環(huán)唑、醚菌酯、烷基腈氧基醌、腐霉利單劑在試驗濃度下對茄鏈格孢屬菌菌絲生長抑制率分別為76.15%～100%、8.76%～17.97%、2.01%～70.92%、71.82%～100%、51.35%～71.59%、42.46%～93.87%、32.16%～91.76%（圖1，表1）。

2.2 7種殺菌劑單劑EC50

由表2可知，7種殺菌劑對番茄早疫病菌表現(xiàn)出不同的抑制效果，其中35%腐霉利懸浮劑對番茄早疫病菌絲生長具有極強的抑制作用，抑制效果最佳，EC50為0.018 2 mg/L；烷基腈氧基醌、異菌脲對番茄早疫病的抑制效果次之，EC50分別為0.019 0、0.033 5 mg/L；醚菌酯、苯醚甲環(huán)唑、丙森鋅抑制效果也較好，EC50分別為0.049 6、0.723 8、2.268 1 mg/L；50%氯溴異氰尿酸抑制效果最差，EC50為77.886 5 mg/L。

2.3 復(fù)配殺菌劑的聯(lián)合毒力測定

不同組合單劑復(fù)配對番茄早疫病菌的毒力不同，濃度為0.50 mg/L異菌脲-苯醚甲環(huán)唑1∶1、1∶2、2∶1的抑菌效果均比單劑好，分別為97.59%、99.58%、97.38%；濃度為0.10 mg/L異菌脲-腐霉利1∶1、1∶2、2∶1的抑菌效果也比單劑好，分別為82.61%、83.34%、92.35%；濃度為0.50 mg/L異菌脲-醚菌酯1∶1、1∶2、2∶1的抑菌效果比單劑好，分別為97.51%、97.08%、98.21%；濃度為0.10 mg/L腐霉利-醚菌酯1∶1、1∶2抑菌率也比單劑高，分別為80.27%、80.21%；苯醚甲環(huán)唑-醚菌酯的抑菌效果也比單劑效果好，分別為97.69%、97.73%、97.61%（圖2，表3）。計算6種復(fù)配藥劑不同比例對早疫病菌的毒力回歸方程與EC50。結(jié)果表明，醚菌酯-腐霉利1∶1抑菌效果最好，其EC50為0.001 1 mg/L，早疫病菌對異菌脲-腐霉利2∶1抑菌效果較好，EC50為0.001 6 mg/L；腐霉利-醚菌酯1∶2抑菌效果次之，EC50為0.008 9 mg/L；苯醚甲環(huán)唑-醚菌酯2∶1復(fù)配劑也表現(xiàn)較高的抑菌率，其EC50為0.013 2 mg/L；異菌脲-腐霉利1∶1、腐霉利-苯醚甲環(huán)唑1∶2、2∶1的抑菌效果較好，EC50分別為0.020 4、0.021 9、0.025 3 mg/L；異菌脲-苯醚甲環(huán)唑1∶2、2∶1、苯醚甲環(huán)唑-醚菌酯1∶1、1∶2抑菌效果較好，其EC50分別為0.049 1、0.036 3、0.031 5、0.040 2 mg/L；異菌脲-苯醚甲環(huán)唑1∶1、異菌脲-醚菌酯1∶1、1∶2、2∶1、腐霉利-苯醚甲環(huán)唑1∶1、腐霉利-醚菌酯2∶1抑菌效果一般，EC50分別為0.054 8、0.079 3、0.063 8、0.067 8、0.086 0、0.066 9 mg/L；其抑菌效果最差的是異菌脲-腐霉利1∶2配比，其EC50為0.107 7 mg/L（表4）。

根據(jù)各復(fù)配劑的共毒系數(shù)，復(fù)配劑異菌脲-腐霉利2∶1、腐霉利-醚菌酯1∶1，有特別明顯的增效作用，共毒系數(shù)分別為1 685.455、2 513.836；腐霉利-苯醚甲環(huán)唑1∶2、腐霉利-醚菌酯1∶2、苯醚甲環(huán)唑-醚菌酯1∶1、2∶1、異菌脲-苯醚甲環(huán)唑1∶2有明顯增效，共毒系數(shù)分別為237.468 1、351.722 4、294.053 5、987.179 2、187.341 9；異菌脲-苯醚甲環(huán)唑2∶1略有增效，共毒系數(shù)為135.515 8；異菌脲-腐霉利1∶1，腐霉利-苯醚甲環(huán)唑1∶1，異菌脲-苯醚甲環(huán)唑1∶1有相加作用，共毒系數(shù)分別為115.138 6、116.957 3、106.555 5；說明異菌脲-腐霉利1∶1、2∶1，腐霉利-苯醚甲環(huán)唑1∶1、1∶2、2∶1，腐霉利-醚菌酯1∶1、1∶2，苯醚甲環(huán)唑-醚菌酯1∶2、1∶2、2∶1，異菌脲-苯醚甲環(huán)唑1∶2，異菌脲-苯醚甲環(huán)唑1∶1、2∶1，抑制早疫病菌的效果明顯好于單劑。異菌脲-腐霉利1∶2，腐霉利-苯醚甲環(huán)唑1∶1，腐霉利-醚菌酯2∶1，異菌脲-醚菌酯1∶1、1∶2、2∶1有拮抗作用（表5，表6，表7）。

3 小結(jié)與討論

目前，對番茄早疫病的防治缺乏有效的抗病作物品種，主要依賴于化學(xué)藥劑進行防治，使用的藥劑主要有二硫代氨基甲酸酯類、芳烴類、二甲酰亞胺類等，常見的品種如代森錳鋅、百菌清、菌核凈、異菌脲、腐霉利等，但這些藥劑如今的施用量已經(jīng)達到原有用量的數(shù)倍，抗藥性問題嚴重，這不僅提高了農(nóng)業(yè)生產(chǎn)成本，而且由于過量用藥導(dǎo)致環(huán)境污染嚴重，危害生物安全。因此，研究使用新型高效、廣譜、作用機理不同的殺菌劑以及科學(xué)合理使用現(xiàn)有藥劑防治番茄早疫病是番茄生產(chǎn)亟待解決的問題[9，14]。本研究中7種殺菌劑對番茄早疫病菌菌絲生長的有效抑制濃度（EC50）由低到高依次為腐霉利、烷基腈氧基醌、異菌脲、醚菌酯、苯醚甲環(huán)唑、丙森鋅、氯溴異氰尿酸。

在復(fù)配劑中，異菌脲與醚菌酯復(fù)配有拮抗作用，而三唑類苯醚甲環(huán)唑與甲氧基丙烯酸酯類醚菌酯在復(fù)配時兩者的作用機理不相互影響，復(fù)配都有明顯的增效作用；異菌脲與苯醚甲環(huán)唑在復(fù)配時所使用的比例不同對其增效作用不同，但均未出現(xiàn)拮抗作用，說明二甲酰亞胺類與三唑類在混合使用時，不同濃度的配比其作用不同，但是兩者混合使用不會彼此影響其作用機理，只是比例不同增效效果不同。根據(jù)殺菌劑的作用機理及交互抗性，設(shè)計不同組合的藥劑復(fù)配，異菌脲-腐霉利2∶1，腐霉利-苯醚甲環(huán)唑1∶1、1∶2、2∶1，腐霉利-醚菌酯1∶1、1∶2，苯醚甲環(huán)唑-醚菌酯1∶2、1∶2、2∶1，異菌脲-苯醚甲環(huán)唑1∶1、1∶2、2∶1，異菌脲-腐霉利1∶1，都有相加作用；說明異菌脲-腐霉利1∶1、2∶1，腐霉利-苯醚甲環(huán)唑1∶1、1∶2、2∶1，腐霉利-醚菌酯1∶1、1∶2，苯醚甲環(huán)唑-醚菌酯1∶2、1∶2、2∶1，異菌脲-苯醚甲環(huán)唑1∶2、1∶1、2∶1，抑制早疫病菌的效果明顯好于單劑。這些在試驗條件下效果很好的復(fù)配劑及其復(fù)配比例，為早疫病菌田間藥劑防治中殺菌劑選用、復(fù)配或混用提供了理論依據(jù)，對于番茄早疫病的田間防治具重要意義。

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