高效液相色譜法測(cè)定牛黃解毒片中黃芩苷大黃素的含量

范亞剛 左文松 楊琰

摘要：目的采用高效液相色譜法測(cè)定牛黃解毒片中黃芩苷丶大黃素的含量。方法KromasilC18（150×4.6 mm，5 um）為分析柱，流動(dòng)相為0.05%磷酸溶液-乙腈（75∶25），柱溫30℃，流速1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm。結(jié)論本方法簡(jiǎn)便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，重現(xiàn)性好，適用于牛黃解毒片中黃芩苷、大黃素的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜；牛黃解毒片；含量測(cè)定；大黃素；黃芩苷

中圖分類號(hào)：R284文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-2349（2015）05-0080-02

牛黃解毒片是一種歷史悠久、療效確切的中成藥，為《中國(guó)藥典》[1]一部收載品種，由人工牛黃、雄黃、石膏、大黃、黃芩、桔梗、冰片、甘草八味藥組成，臨床主要用于清熱解毒，火熱內(nèi)盛，咽喉腫痛，牙齦腫痛，口舌生瘡，目赤腫痛，原標(biāo)準(zhǔn)僅對(duì)黃芩中的黃芩苷進(jìn)行了含量測(cè)定，文獻(xiàn)資料[2～3]中，也多為對(duì)處方中的一味藥大黃的5種成分進(jìn)行含量研究，為更好的保證藥品質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜法對(duì)大黃中的大黃素和黃芩中的黃芩苷進(jìn)行同時(shí)測(cè)定。

1儀器與試藥

1.1儀器島津LC-20A高效液相色譜儀（日本島津公司）檢測(cè)器：SPD-20A（D2+W）電子天平：CPA-225D，BP-221D

1.2試藥黃芩苷、大黃素對(duì)照品均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供（純度均為100.00%），牛黃解毒片由昆明中藥廠提供。磷酸為分析純、乙腈為色譜純，水為超純水。

2方法

2.1色譜條件：KromasilC18（150×4.6 mm，5 mm）色譜柱；流動(dòng)相為0.05%磷酸溶液：乙腈=75∶25；檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm；柱溫：30℃，見(jiàn)圖1。

2.2對(duì)照品貯備液的制備分別稱取黃芩苷16.67 mg置于50 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度搖勻；大黃素9.82 mg置于200 mL的容量瓶中加甲醇稀釋至刻度搖勻，精密量取25 mL于50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度搖勻，即得對(duì)照品貯備液。

2.3方法學(xué)考察

2.3.1線性關(guān)系考察精密量取各對(duì)照品貯備液，分別置于同一量瓶中，加甲醇分別制成含黃芩苷濃度0.006 7、0.013 0、0.033 4、0.066 7、0.100 0 mg/mL，大黃素0.000 491、0.000 982、0.002 455、0.004 910、0.007 365 mg/mL的溶液，取10ul注入液相色譜儀，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，大黃素回歸方程為y=4E+07x-140 4.6 R2=0.999 9，表明在0.000 491 mg/mL ～0.007 365 mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；

黃芩苷回歸方程為y=1E+07x-336 3.2 R2=0.999 8，表明在0.006 7 mg/mL ～0.100 0 mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系

2.3.2精密度試驗(yàn)精密稱取樣品0.252 4 g于50 mL容量瓶中，加少許50%甲醇溶液超聲30 min，再加50%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻。精密量取5 mL于10 mL容量瓶中加50%甲醇溶液稀釋至刻度線搖勻，過(guò)濾，照液相色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次（n=6），大黃素和黃芩苷的RSD分別為 0.15%和0.05%，表明精密度良好。

2.3.3穩(wěn)定性試驗(yàn)取2.3.2項(xiàng)下溶液于0、2、6、12，24 h進(jìn)樣測(cè)定，大黃素和黃芩苷的RSD分別為0.73%、0.85%，表明大黃素、黃芩苷在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.4重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取同一批次牛黃解毒片細(xì)粉六份，按樣品處理方法處理后進(jìn)行測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算各組分的含量，大黃素和黃芩苷的RSD分別為 0.93%和1.07%，表明重復(fù)性良好。

2.3.5耐用性試驗(yàn)取樣品溶液，分別采用不同比例的流動(dòng)相、不同規(guī)格的色譜柱、不同柱溫進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明該方法耐用性良好。

2.3.6回收率試驗(yàn)精密稱取牛黃解毒片細(xì)粉六份分別置于六個(gè)50 mL容量瓶中，分別加入大黃素、黃芩苷對(duì)照品適量，加50%甲醇溶液少許超聲30 min，再加50%甲醇溶液稀釋至刻度線搖勻，過(guò)濾，精密量取10 uL注入液相色譜儀，計(jì)算回收率，大黃素平均回收率為100.46%，RSD%為1.27%，黃芩苷平均回收率為102.91%，RSD%為1.94%，表明該方法的回收率良好，結(jié)果見(jiàn)表1、2。

3結(jié)果與結(jié)論

1.經(jīng)試驗(yàn)證明該法簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確，兩種組分可同時(shí)測(cè)定，能更好的保證藥品質(zhì)量。

2.經(jīng)紫外掃描，在254nm波長(zhǎng)處測(cè)定靈敏度較高，峰形較好，分離較好干擾因素較少。故選擇254nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

參考文獻(xiàn)：

[1]《中國(guó)藥典》2010版一部.

[2]牛黃解毒片中大黃五種成分的HPLC 測(cè)定 馬 寧；羅 艷；黃海萍；龔秋紅；胡良；中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志 230 2005，36（4）.

[3]李太平，丁小文，等.HPLC法測(cè)定牛黃解毒片中大黃素、大黃酸的含量中成藥 2003，25（4）；293-295.