六種復(fù)配劑對(duì)芒果細(xì)菌性黑斑病菌的室內(nèi)抑菌效果評(píng)價(jià)

蒲金基 張賀 漆艷香 張欣 喻群芳 李小娟 趙麗 劉曉妹

摘要：為篩選出有效防治芒果細(xì)菌性黑斑病菌（Xanthomonas campestris pv. mangiferaeindicae）的復(fù)配劑，采用Horsfall法對(duì)6種復(fù)配劑進(jìn)行室內(nèi)增效評(píng)價(jià)。試驗(yàn)結(jié)果表明，硫酸鏈霉素與噻菌銅各配比、敵磺鈉與中生菌素以1∶4、4∶1配比及噻菌銅與鹽酸四環(huán)素以4∶1、3∶2、2∶3配比時(shí)有明顯的增效作用；其余的組合則表現(xiàn)協(xié)同或拮抗作用。

關(guān)鍵詞：芒果細(xì)菌性黑斑病菌（Xanthomonas campestris pv. mangiferaeindicae）；復(fù)配劑；抑菌效果；評(píng)價(jià)

中圖分類(lèi)號(hào)：S481.9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2015）10-2387-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.10.021

芒果（Mangifera indica L.）屬于漆樹(shù)科植物，因其獨(dú)特的風(fēng)味和富含維生素C，被譽(yù)為熱帶水果之王[1]，熱帶和亞熱帶地區(qū)約有100多個(gè)國(guó)家和地區(qū)廣泛種植，并在熱帶和亞熱帶地區(qū)的水果出口中占有重要地位[2]。芒果細(xì)菌性黑斑病（Mango bacterial black spot）是嚴(yán)重影響芒果生產(chǎn)的細(xì)菌性病害之一，又稱(chēng)芒果細(xì)菌性角斑病、細(xì)菌性葉斑病、細(xì)菌性潰瘍病等[3]。該病在巴西[4]、南非[5]、印度[6，7]、巴基斯坦[8]等芒果種植地均有發(fā)生，在中國(guó)的海南、廣東、廣西、福建、云南等省為害嚴(yán)重，一般造成15%～30%的損失，嚴(yán)重時(shí)達(dá)50%以上，且近年來(lái)為害有加重的趨勢(shì)[1]。芒果細(xì)菌性黑斑病主要為害芒果葉片、枝條、花芽、花和果實(shí)。感病葉片最初產(chǎn)生水漬狀小點(diǎn)，逐步變成黑褐色，后擴(kuò)大呈多角形或不規(guī)則形，病斑表面隆起，周?chē)Ｓ悬S暈；枝條和花穗發(fā)病呈黑褐色潰瘍斑；果實(shí)上病斑呈水漬狀小點(diǎn)，常有膠粘汁液流出，后擴(kuò)大成黑褐色，表面隆起，潰瘍開(kāi)裂[2]。此病全年均可發(fā)生，溫度高于25 ℃，相對(duì)濕度大于90%有利于病害的發(fā)生和流行[9，10]，臺(tái)風(fēng)雨與病害發(fā)生有極其密切的關(guān)系，秋梢期的臺(tái)風(fēng)雨次數(shù)和病葉率與次年黑斑病發(fā)生的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，可以作為病害流行的預(yù)測(cè)指標(biāo)[10]。

目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)該病害的防治主要依靠單一化學(xué)藥劑，而且化學(xué)農(nóng)藥長(zhǎng)期使用不可避免地導(dǎo)致病原細(xì)菌產(chǎn)生抗藥性。向平安等[11]人在辣椒瘡痂病菌（Xanthomonas campestris pv.vesicatoria）和水稻細(xì)菌性條斑病菌（X.oryzae pv.oryzicola）中均發(fā)現(xiàn)耐鏈霉素菌株，可見(jiàn)已有部分黃單孢菌屬病原細(xì)菌對(duì)鏈霉素產(chǎn)生了抗性。此外，還有文獻(xiàn)報(bào)道水稻白葉枯病菌、柑橘潰瘍病菌等病原細(xì)菌對(duì)葉枯唑產(chǎn)生了抗藥性[12]。如何應(yīng)對(duì)病原細(xì)菌的抗藥性已成為一個(gè)突出的問(wèn)題。農(nóng)藥復(fù)配是科學(xué)用藥的一種好方法，不同作用機(jī)制的農(nóng)藥合理復(fù)配可以提高工效，擴(kuò)大使用范圍，兼治幾種病害，減少用藥量，降低成本，提高藥效，降低毒性，延緩病原菌對(duì)藥劑產(chǎn)生抗藥性等[13]。本試驗(yàn)采用含毒介質(zhì)法，以常規(guī)農(nóng)藥按“比例混合法”復(fù)配[14，15]，篩選出殺菌效果較好的復(fù)配劑，以便有效地防治芒果細(xì)菌性黑斑病。

1 材料和方法

1.1 供試菌株與藥劑

供試芒果細(xì)菌性黑斑病病原細(xì)菌（X. campestris pv. mangiferaeindicae）由本實(shí)驗(yàn)室分離純化保存，菌株編號(hào)為XCM-3。供試藥劑、生產(chǎn)廠家和藥劑濃度設(shè)置見(jiàn)表1。

1.2 方法

1.2.1 菌懸液的制備 菌懸液的制備參考劉曉妹等[16]人的試驗(yàn)方法略有改進(jìn)。將實(shí)驗(yàn)室保存的病原細(xì)菌XCM-3進(jìn)行單菌落培養(yǎng)，挑取一單菌落接種于30 mL LB液體培養(yǎng)基內(nèi)，28 ℃、150 r/min培養(yǎng)24 h，制得菌原液。取1 mL菌原液，用無(wú)菌水按101，102，…，1010倍系列稀釋后涂板于LB固體培養(yǎng)基上，28 ℃培養(yǎng)48 h，根據(jù)平板菌落計(jì)數(shù)法，推算出菌原液的濃度[17]。根據(jù)菌原液濃度，制備菌懸液，使菌懸液涂板后長(zhǎng)出的菌落數(shù)約100個(gè)。

1.2.2 復(fù)配藥劑的室內(nèi)抑菌效果評(píng)價(jià) 采用Horsfall法[18，19]進(jìn)行復(fù)配劑增效配比的篩選。據(jù)本實(shí)驗(yàn)室前期工作測(cè)得的鹽酸四環(huán)素、硫酸鏈霉素、敵磺鈉、中生菌素和噻菌銅5種單劑的抑菌最低抑菌濃度（MIC）[20]，按6個(gè)比例即5∶0、4∶1、3∶2、2∶3、1∶4、0∶5進(jìn)行配比，將單劑鹽酸四環(huán)素與硫酸鏈霉素、敵磺鈉與中生菌素、硫酸鏈霉素與噻菌銅、硫酸鏈霉素與敵磺鈉、中生菌素與噻菌銅、噻菌銅與鹽酸四環(huán)素共6種復(fù)配組合，每種復(fù)配組合設(shè)3個(gè)重復(fù)。采用含毒介質(zhì)法制成不同配比的含毒平板，涂布50 μL菌懸液于含毒平板上，以無(wú)毒平板為對(duì)照，置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，96 h后檢查菌落生長(zhǎng)情況并記錄數(shù)據(jù)。計(jì)算各配比的抑菌率，若毒力比值明顯大于1，為增效作用；反之毒力比值明顯小于1，為拮抗作用；毒力比值為1，則為協(xié)同作用。

抑菌率=（對(duì)照的平均菌落數(shù)-處理的菌落數(shù)）/對(duì)照的平均菌落數(shù)×100%

預(yù)期抑菌率=（單劑A的MIC劑量實(shí)際抑菌率×配比中的百分比）+（單劑B的MIC劑量實(shí)際抑菌率×配比中的百分比）

毒力比值=實(shí)際抑菌率（%）/預(yù)期抑菌率（%）

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)配劑鹽酸四環(huán)素與硫酸鏈霉素對(duì)病原細(xì)菌的抑菌效果

試驗(yàn)結(jié)果（表2）表明，復(fù)配劑鹽酸四環(huán)素與硫酸鏈霉素各配比的毒力比值均小于1，表現(xiàn)為拮抗作用。

2.2 復(fù)配劑敵磺鈉與中生菌素對(duì)病原細(xì)菌的抑菌效果

試驗(yàn)結(jié)果（表3）表明，復(fù)配劑敵磺鈉與中生菌素各復(fù)配比對(duì)病原細(xì)菌的抑菌效果有顯著性差異，其中復(fù)配比為1∶4時(shí)，毒力比值為2.35，增效作用最明顯；其次是復(fù)配比為4∶1，毒力比值為1.43，也表現(xiàn)出一定的增效作用；而按3∶2和2∶3復(fù)配時(shí)，毒力比值均小于1，表現(xiàn)為拮抗作用。

2.3 復(fù)配劑硫酸鏈霉素與噻菌銅對(duì)病原細(xì)菌的抑菌效果

試驗(yàn)結(jié)果（表4）表明，復(fù)配劑硫酸鏈霉素與噻菌銅中各配比毒力比值均大于1，則該復(fù)配劑各配比均表現(xiàn)為增效作用；其中按3∶2、2∶3、1∶4配比時(shí)，抑菌率達(dá)100%；按3∶2配比時(shí)毒力比值最高達(dá)2.23，但從經(jīng)濟(jì)角度考慮，生產(chǎn)上應(yīng)使用1∶4配比，可降低生產(chǎn)成本。

2.4 復(fù)配劑硫酸鏈霉素與敵磺鈉對(duì)病原細(xì)菌的抑菌效果

試驗(yàn)結(jié)果（表5）表明，復(fù)配劑硫酸鏈霉素與敵磺鈉中各復(fù)配中，只有按1∶4配比時(shí)毒力比值為1.02，未表現(xiàn)出明顯的增效作用，其余的配比毒力比值均小于1，表現(xiàn)為拮抗作用。

2.5 復(fù)配劑中生菌素與噻菌銅對(duì)病原細(xì)菌的抑菌效果

試驗(yàn)結(jié)果（表6）表明，復(fù)配劑中生菌素與噻菌銅中各復(fù)配比毒力比值均小于1，則該復(fù)配劑表現(xiàn)為拮抗作用。

2.6 復(fù)配劑噻菌銅與鹽酸四環(huán)素對(duì)病原細(xì)菌的抑菌效果

試驗(yàn)結(jié)果（表7）表明，復(fù)配劑噻菌銅與鹽酸四環(huán)素中各復(fù)配比中，配比為2∶3時(shí)毒力比值最高達(dá)2.07，表現(xiàn)為明顯的增效作用；其次是配比為3∶2、4∶1的毒力比值依次為1.53和1.21，表現(xiàn)為一定的增效作用；而1∶4時(shí)的毒力比值為0.46，表現(xiàn)為拮抗作用。

3 小結(jié)與討論

目前，噴施化學(xué)農(nóng)藥是防治芒果細(xì)菌性黑斑病的主要措施之一，鑒于一些病原細(xì)菌已產(chǎn)生抗藥性[13]，有必要篩選出一批高效、低毒、低殘留、無(wú)公害的環(huán)境友好型，且具有治療和保護(hù)性的內(nèi)吸性的復(fù)配藥劑，用于延緩病原細(xì)菌的抗藥性，提高防治效率，實(shí)現(xiàn)綠色芒果的增產(chǎn)增收。

采用Horsfall法對(duì)供試的5種單劑以不同配比進(jìn)行復(fù)配篩選，結(jié)果表明，有3個(gè)配比組合毒力比值大于2，分別是敵磺鈉與中生菌素1∶4（毒力比值為2.35）、硫酸鏈霉素與噻菌銅3∶2（毒力比值為2.23）及噻菌銅與鹽酸四環(huán)素2∶3（毒力比值為2.07），應(yīng)用潛力較大，初步推斷這些復(fù)配劑的配比具有進(jìn)一步研究的價(jià)值。硫酸鏈霉素的作用機(jī)理是抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成[21]，而噻菌銅的噻唑基團(tuán)和銅離子不僅具有殺細(xì)菌效果也具有殺真菌效果，兩種單劑的復(fù)配豐富了藥劑的作用機(jī)理，延緩病原細(xì)菌的抗藥性，亦能對(duì)芒果炭疽?。–olletotrichum gloeosporioides）也有很好的防治效果[22]。建議果農(nóng)在生產(chǎn)中，可以購(gòu)置龍克菌（噻菌銅）和農(nóng)用鏈霉素按3∶2、2∶3、1∶4比例范圍進(jìn)行復(fù)配，從而提高防效、擴(kuò)大防治譜、緩解靶標(biāo)生物的抗性及降低防治成本。

芒果生產(chǎn)上，果農(nóng)防治芒果細(xì)菌性黑斑病常會(huì)進(jìn)行農(nóng)藥復(fù)配，農(nóng)藥復(fù)配理論上雖能提高防治效果、延緩病原細(xì)菌抗藥性的產(chǎn)生，但對(duì)具有拮抗作用的藥劑進(jìn)行盲目的復(fù)配則會(huì)造成防治效果下降及農(nóng)藥的浪費(fèi)。如試驗(yàn)測(cè)得鹽酸四環(huán)素與硫酸鏈霉素、硫酸鏈霉素與敵磺鈉及中生菌素與噻菌銅復(fù)配則產(chǎn)生拮抗作用。同時(shí)，同一復(fù)配劑不同配比所表現(xiàn)的作用也不相同。如試驗(yàn)中的敵磺鈉∶中生菌素3∶2（毒力比值為0.65）與1∶4（毒力比值為2.35）配比及噻菌銅∶鹽酸四環(huán)素2∶3（毒力比值為2.07）與1∶4（毒力比值為0.46）配比。因此，在生產(chǎn)上使用合適的配比也是防效的關(guān)鍵所在。對(duì)一些抑菌效果好、增效作用明顯的復(fù)配劑如何加工生產(chǎn)出與先進(jìn)施藥技術(shù)、環(huán)境保護(hù)要求相適應(yīng)的劑型則有待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

[1] 劉曉妹，劉文波，范秀利.芒果細(xì)菌性黑斑病生防菌的篩選及防效測(cè)定[J].中國(guó)生物防治，2006，22（S）：94-97.

[2] 董 春，何漢生.芒果細(xì)菌性黑斑病研究進(jìn)展[J].果樹(shù)科學(xué)，1999，16（S）：47-51.

[3] 文衍堂，黃圣明.芒果細(xì)菌性黑斑病癥狀與病原鑒定[J].熱帶作物學(xué)報(bào)，1994，15（1）：79-84.

[4] SOM？魪 A，SAMSON R.Isoenzyme diversity Xanthomonas campestris pv.mangiferaeindicae[J]. Plant Pathology，1996（45）：426-431.

[5] MANICOM B Q，WALLIS F M.Further characterization of Xanthomonas campestris pv.mangiferaeindicae[J].International Journal of Systematic Bacteriology，1984，34（1）：77-79.

[6] DAYAKAR B V，GNANAMANICKAM S S. Biochemical and pathogenic variation in strains of Xanthomonas campestris pv. mangiferaeindicae from Southern India[J]. Indian Phytopathology，1996，49（3）：227-233.

[7] MISHRA A K，PRAKASH O M.Bacterial canker of mango：incidence and control[J]. Indian Phytopathology，1992，45（2）：172-175.

[8] STEYN P L，VILJOEN N M，KOTZ？魪 J M.The causal organism of bacterial black spot of mangoes[J]. Phytopathology，1974（64）：1400-1404.

[9] FUKUDA T，UEHARA K，AZAGAMI K，et al.Bacterial canker of mango in Japan caused by Xanthomonas compestris pv.mangiferaeindicae[J]. Annals of the Phytopathological Society of Japan，1990，56（4）：474-480.

[10] 何漢生，董 春，朱彬年，等.芒果細(xì)菌性黑斑病的發(fā)生與防治研究初報(bào)[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，1996，1（6）：35-37.

[11] 向平安，周 燕，高必達(dá). 椒瘡痂病菌（Xanthomonas vesicatoria）和水稻細(xì)菌性條斑病菌（X. oryzae pv. oryzicola）的質(zhì)粒及其與耐霉素和耐銅性關(guān)系[J]. 植物病理學(xué)報(bào)，2003，33（4）：330-333.

[12] 趙英俄，祝明亮，秦西云，等.我國(guó)植物病原細(xì)菌抗藥性的研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，35（23）：7198-7199.

[13] 張應(yīng)芝.農(nóng)藥混配四原則[J].南方科技報(bào)，2008，45（2）：61.

[14] 慕立義.植物化學(xué)保護(hù)