正交試驗優(yōu)選藍(lán)莓抗疲勞口服液提取工藝

胡一冰，聶忠莉，謝貞建，劉 濤，吳曉臘

(成都大學(xué) 生物工程學(xué)院，四川 成都 610106)

0 引 言

藍(lán)莓又稱越橘，藍(lán)漿果，為杜鵑花科越橘屬植物，營養(yǎng)豐富，藥用價值高，除含有花青素、SOD、黃酮類化合物、酚類等多種活性成分，還含有多種人體所需的維生素、微量元素、氨基酸等物質(zhì)，具有抗衰老、增強機體免疫力、抗疲勞、降低血糖、保護(hù)視力、抗腫瘤等多種功能作用［1－3］.通過對相關(guān)文獻(xiàn)資料查閱與比對分析發(fā)現(xiàn)，利用藍(lán)莓與中藥配伍組成保健食品的還不多見，為了更好地開發(fā)藍(lán)莓，本實驗選擇藍(lán)莓、白術(shù)、當(dāng)歸進(jìn)行配伍組成抗疲勞口服液，并對其提取工藝進(jìn)行了研究.

1 材料與儀器

1.1 試劑與儀器

1.1.1 試 劑.

實驗所用試劑包括:苯酚、濃硫酸、葡萄糖、乙醇、甲醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉等均為分析純;蘆丁對照品由中國藥品生物制品檢定所提供;實驗用水為純凈水.

1.1.2 儀 器.

實驗所用儀器包括:UV－3200S 型紫外分光光度儀(上海美譜達(dá)儀器有限公司);LD2000－1 型電子天平(沈陽龍騰電子有限公司);DHG－9246 型恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實驗設(shè)備有限公司);RE－52B 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);HH－4型數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州澳華儀器有限公司).

1.2 藥 材

實驗所用藥材:炒白術(shù)、當(dāng)歸購自成都北京同仁堂藥店，藍(lán)莓購自成都伊藤洋華堂(春季藍(lán)莓).

2 方 法

2.1 藍(lán)莓抗疲勞口服液正交試驗設(shè)計

在單因素試驗基礎(chǔ)上采用正交試驗優(yōu)選提取工藝，采用L9(34)正交試驗.分別以多糖的含量、總黃酮的含量為指標(biāo)，對煎煮時間、煎煮次數(shù)、配伍比、料液比4 個因素，分別設(shè)3 個水平進(jìn)行考察.其中，藍(lán)莓∶ 白術(shù)當(dāng)歸中，白術(shù)當(dāng)歸比為5∶ 1.以上因素水平見表1.

表1 正交法提取藍(lán)莓抗疲勞口服液的因素與水平表

2.2 藍(lán)莓抗疲勞口服液制備

選擇新鮮、成熟度好，并剔除病蟲害、變色、變質(zhì)等不合格藍(lán)莓，在流動水中洗凈、瀝干.白術(shù)、當(dāng)歸按物料比準(zhǔn)確稱取，并按表1 正交試驗設(shè)計要求加水煎煮提取.煎煮前，白術(shù)、當(dāng)歸先用適量水浸泡30 min，煎煮液用4 層紗布濾過，合并，濃縮至120 mL.制得9 份煎煮液，冷卻后置于冰箱冷藏備用.

2.3 多糖含量測定方法

2.3.1 多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備.

精密稱取105 ℃烘干至恒重的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖100.4mg 于100 mL 容量瓶中，加水至刻度、搖勻，吸取此液10 mL 于100 mL 容量瓶中，搖勻，制得濃度為0.1004 mg/mL 葡萄糖溶液.

精密量取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，分別置于10 mL 刻度試管中，依次加水至2 mL，搖勻.然后各加入5%苯酚溶液1 mL，濃硫酸5 mL，振搖5 min，于沸水浴中加熱15 min，冷卻.以2 mL 蒸餾水作空白.在波長490 nm 處測定吸光度.以吸光度值為縱坐標(biāo)(Y)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(Xmg/mL)進(jìn)行回歸，回歸方程為，

y=50.959x+0.017，R2=0.9980.

2.3.2 樣品含量測定.

分別精密吸取樣品溶液2 mL，按“2.3.1”項下方法測定，并用回歸方程計算多糖含量［4］，計算式為，

2.4 蘆丁含量測定方法

2.4.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備.

精密稱取在120 ℃干燥至恒重的蘆丁對照品約100 mg，置50 mL 容量瓶中，加甲醇適量，置水浴上微熱溶解，放冷至室溫后用甲醇定容至刻度.精密吸取10 mL，置100 mL 容量瓶中，加水至刻度，搖勻，制得2 mg/mL 對照品溶液.

精密量取對照品溶液0、2、3、4、5、6、7 mL，分別置于25 mL 容量瓶中，各加水至7 mL，5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加4%氫氧化鈉試液10 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15 min，以不含蘆丁相應(yīng)試劑為空白，在波長510 nm 處測定吸光度.回歸方程為，

y=10.841x+0.0016，R2=0.9997.

2.4.2 樣品含量測定.

分別精密吸取樣品溶液7 mL，按2.4.1 項下方法測定，并用回歸方程計算黃酮含量［5］，計算式為.

3 結(jié)果與分析

正交試驗結(jié)果統(tǒng)計與方差分析如表2、3、4 所示.

方差分析的結(jié)果表明:以多糖提取率為指標(biāo)，煎煮時間、煎煮次數(shù)和料液比對多糖提取率有一定影響，影響因素的順序為D ＞B ＞A ＞C.綜合考慮多糖提取率及節(jié)省能源等因素，確定最優(yōu)工藝為A2B3C1D2，即煎煮時間2 h，煎煮次數(shù)3 次，藍(lán)∶ 白術(shù)當(dāng)歸比例為2∶ 1，其中白術(shù)與當(dāng)歸之比為5∶ 1，料液比1∶ 15.以總黃酮提取率為指標(biāo)，煎煮各因素影響作用不大，影響因素的順序為C ＞A ＞D ＞B，即藍(lán)莓白術(shù)當(dāng)歸比例＞煎煮時間＞料液比＞煎煮次數(shù).綜合考慮總黃酮提取率及直觀分析等因素，確定最優(yōu)工藝為A3B2C1D3，即煎煮時間3 h，煎煮次數(shù)2次，藍(lán)∶ 白術(shù)當(dāng)歸比例為2∶ 1，其中白術(shù)與當(dāng)歸之比為5∶ 1，料液比1∶ 20.

表2 藍(lán)莓抗疲勞口服液提取L9(34)正交實驗結(jié)果

表3 藍(lán)莓抗疲勞口服液多糖提取率的方差分析

表4 藍(lán)莓抗疲勞口服液總黃酮提取率的方差分析

4 討 論

中藥煎煮過程中，藥材直徑大小、粉碎程度會影響藥材有效成分溶出.為了保證和新鮮藍(lán)莓處理的一致性，在煎煮前，本實驗對所有原料進(jìn)行了粗略剪碎.原料中水煎煮涉及較多有效成分為多糖和黃酮類，多糖常采用水提工藝，通過正交試驗結(jié)果和方差分析篩選出有顯著性差異的優(yōu)化條件.有報道指出，黃酮類成分多采用醇提工藝，熱水提的工藝得到黃酮較醇提低［6］.為了兼顧多糖提取，本研究選取水提方法.雖然方差分析顯示水提條件對黃酮成分優(yōu)化影響沒有顯著性，但是后期的抗疲勞藥理實驗證實是有顯著性差異的［7］.因此，在實驗中，保留水提黃酮的制備工藝條件.同時，本研究探討了藍(lán)莓抗疲勞口服液藍(lán)莓與白術(shù)當(dāng)歸之間，以及白術(shù)與當(dāng)歸之間的比例，取得了一些研究價值，為下一步的深入研究提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù).

［1］王瑩，王鴻，蔡東聯(lián).藍(lán)莓及其提取物保健功效的研究進(jìn)展［J］.醫(yī)學(xué)研究雜志，2013，42(7):180－182.

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