化學(xué)發(fā)光技術(shù)在梅毒抗體檢測(cè)中的應(yīng)用

許鴻昌 鄭文亮 周明君

河南省許昌市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南許昌 461000

化學(xué)發(fā)光技術(shù)在梅毒抗體檢測(cè)中的應(yīng)用

許鴻昌 鄭文亮 周明君

河南省許昌市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南許昌 461000

目的探討化學(xué)發(fā)光技術(shù)在梅毒抗體檢測(cè)中的應(yīng)用。方法應(yīng)用梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)（CLIA）三種試驗(yàn)方法檢測(cè)522例臨床標(biāo)本，通過對(duì)檢測(cè)結(jié)果的分析，比較三種檢測(cè)方法的差異。結(jié)果CLIA的敏感性為100.0%、特異性為98.5%。ELISA的敏感性為97.6%、特異性為95.6%。TPPA的敏感性為98.8%、特異性為100.0%。CLIA在檢測(cè)梅毒抗體與ELISA、ELISA相比有顯著性差異（P＜0.05）。結(jié)論CLIA敏感性、特異性高，快速、試劑無毒、安全穩(wěn)定、可自動(dòng)化、適合標(biāo)本量大和體檢篩查臨床應(yīng)用。

梅毒抗體；梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；化學(xué)發(fā)光免疫分析法

梅毒抗體是由梅毒螺旋體感染引起的性傳播疾病，具有高度傳染性。近年來在我國(guó)的發(fā)病率有上升趨勢(shì)[1]。且梅毒與HIV又相互協(xié)同，促進(jìn)艾滋病的傳播，已成為重大的公共衛(wèi)生問題和社會(huì)問題[2]。梅毒抗體是國(guó)家規(guī)定的傳染病篩檢項(xiàng)目之一，目前國(guó)內(nèi)外診斷梅毒抗體主要依賴實(shí)驗(yàn)室檢查梅毒的血清學(xué)方法。隨著檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展，梅毒螺旋體抗體的檢測(cè)方法和技術(shù)也取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步。從檢測(cè)試劑的靈敏度和特異性的提高，到化學(xué)發(fā)光技術(shù)與核酸檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用，操作從手工到半自動(dòng)至全自動(dòng)，方法有快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR），甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）、金標(biāo)法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法、梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）法、蛋白印跡技術(shù)（WB）法、化學(xué)發(fā)光（CLIA）免疫分析法、聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法。血清學(xué)檢測(cè)梅毒螺旋體抗體是診斷梅毒的重要依據(jù)之一，它在梅毒的診斷、治療及研究中均有重要意義。對(duì)于臨床實(shí)驗(yàn)室而言，選擇敏感性高、特異性強(qiáng)的檢測(cè)方法對(duì)梅毒的診治有較為重要的意義。本研究針對(duì)目前我院檢測(cè)梅毒的常用方法、包括明膠凝集法TPPA、化學(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)免疫法等比較檢測(cè)梅毒抗體，結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器

北京科美CHEMCLIN600全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀瑞典全自動(dòng)酶標(biāo)儀（MK-Ⅲ）上?？迫A生物有限公司KHB ST-12B型洗板機(jī)。

1.2 .試劑

北京科美梅毒發(fā)光配套試劑，英科廈門新創(chuàng)生物公司梅毒酶聯(lián)檢測(cè)試劑盒、日本富士瑞必歐株式會(huì)社TPPA明膠顆粒試劑盒（包含溶解液、血清稀釋液、致敏粒子、和陽性對(duì)照血清）、歐盟公司免疫印跡試劑盒。

表1 三種梅毒抗體檢測(cè)方法比較[（%）n/n]

1.3 檢測(cè)對(duì)象

我院2012年10月～2013年12月1126例門診及住院患者，對(duì)檢出的82例陽性及其中隨機(jī)抽取的68例陰性患者進(jìn)行研究，結(jié)果以免疫印跡WB為標(biāo)準(zhǔn)確認(rèn)。

1.4 標(biāo)本

清晨空腹采集靜脈血3mL，對(duì)血清標(biāo)本分別標(biāo)號(hào)，靜置30min后，3000r/min速率離心10min分離血清，保存于-20℃待檢。

1.5 檢測(cè)方法

分別用CLIA，ELISA，TPPA三種方法檢測(cè)，化學(xué)發(fā)光用北京科美全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀測(cè)試（化學(xué)發(fā)光S/CO值大于1.0為陽性，S/CO值小于1.0為陰性），實(shí)驗(yàn)前嚴(yán)格按儀器說明書進(jìn)行儀器開機(jī)前維護(hù)和保養(yǎng)，并作室內(nèi)質(zhì)控在控。酶聯(lián)試劑用酶標(biāo)儀（瑞典MK-Ⅲ）操作嚴(yán)格按照說明書和儀器說明書進(jìn)行測(cè)試，儀器自動(dòng)判讀結(jié)果。免疫印跡、TPPA手工操作，人工肉眼判讀結(jié)果。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

三種梅毒抗體檢測(cè)方法比較采用x2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

共計(jì)檢測(cè)562例血清樣品，其中TPPA確認(rèn)陽性樣品82例，陰性樣品68例，以免疫印跡WB為參照標(biāo)準(zhǔn)，化學(xué)發(fā)光CLIA的敏感性為100.0%（82/82），特異性為98.5%（67/68）。ELISA的敏感性為97.6%（80/82），特異性為95.6%（65/68）。TPPA的敏感性為98.8%（81/82），特異性為100.0%（68/68）。幾種方法檢測(cè)梅毒抗體特異性。采用行×列表x2檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，計(jì)算出x2=33.68，查x2界值表，得P＜0.05，三種檢測(cè)方法差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

3 討論

梅毒的傳播主要通過性傳播，也可經(jīng)過血液傳播、密切接觸傳播以及胎盤垂直傳播。當(dāng)人體感染了梅毒，可累及全身各組織和器官，其病程較長(zhǎng)，臨床表現(xiàn)多樣，具有嚴(yán)重的后果[3-4]。梅毒螺旋體初次感染機(jī)體后進(jìn)入潛伏期，潛伏期的梅毒感染癥狀不明顯，機(jī)體感染梅毒螺旋體后可產(chǎn)生非特異性類脂質(zhì)抗體和特異性抗螺旋體抗體[5]，受到感染5～7周可檢測(cè)出非特異性抗體，而IgM抗體在感染后2周可檢測(cè)出來，IgG抗體在感染后4周才能檢測(cè)出來[6-7]。 因此提高抗-TP抗體檢出率對(duì)于梅毒早期診斷、治療及控制傳播至關(guān)重要[8-9]。傳統(tǒng)的梅毒血清學(xué)檢查主要檢測(cè)的是非特異性梅毒螺旋體、常用甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）和（快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)）實(shí)驗(yàn)。由于是非特異性試驗(yàn)，假陽性高，陽性樣本還需作特異性確認(rèn)，所以在早期和既往梅毒感染檢出率較低，故不能作初篩試驗(yàn)。

目前實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)梅毒螺旋體抗體多采用非特異性抗體和特異性抗體兩類。非特異性的有：快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR），甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）、操作簡(jiǎn)單快速，但2種方法的特異性較差，在機(jī)體發(fā)生病毒感染，多種疾病如自身免疫性疾病，妊娠時(shí)，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡等，會(huì)出現(xiàn)生物學(xué)假陽性[10-11]。只適用于梅毒效價(jià)的檢測(cè)，用于觀察梅毒治療，根據(jù)效價(jià)的高低判斷治療效果。特異性梅毒抗體試驗(yàn)有：金標(biāo)法、ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）、TPPA（梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)）、WB（蛋白印跡技術(shù)）、化學(xué)發(fā)光免疫分析法、PCR（聚合酶鏈反應(yīng)）。金標(biāo)法方法快速，簡(jiǎn)便，但有假陽性的結(jié)果，需做進(jìn)一步的確認(rèn)試驗(yàn)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化檢測(cè)，影響因素多，老年人假陽性多[12]。明膠凝集法（TPPA）靈敏度和特異性都較高，但測(cè)定時(shí)需多次稀釋易出現(xiàn)操作誤差，但因其操作繁瑣，操作者個(gè)體差異較大，耗時(shí)長(zhǎng)，結(jié)果依賴肉眼判斷且不易保存。不適應(yīng)于批量的篩查。PCR（聚合酶鏈反應(yīng)）自動(dòng)化程度高，靈敏度和特異性都很好，但要求特殊實(shí)驗(yàn)室，不易普及?；瘜W(xué)發(fā)光具有高度的靈敏度和特異性并且自動(dòng)化程度高，無需人工干預(yù)，減少人為誤差，防止交叉污染，重復(fù)性好，結(jié)果更可靠，檢測(cè)速度快，結(jié)果重復(fù)性好，適用于大批工作量樣本的篩查。

本結(jié)果顯示化學(xué)發(fā)光檢測(cè)法檢測(cè)梅毒特異性抗體的具有極高的敏感性100.0%（82/82）和特異性98.5%（67/68），CLIA檢測(cè)梅毒抗體與ELISA法，TPPA法有很好的可比性，而且是一種自動(dòng)化、速度快、技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化、定量檢測(cè)的方法，能夠用于梅毒的準(zhǔn)確診斷和療效觀察，有較大的臨床應(yīng)用價(jià)值。具有較好應(yīng)用前景的梅毒抗體檢測(cè)方法，適合批量和體檢篩查臨床應(yīng)用。用于臨床實(shí)驗(yàn)室梅毒的篩查具有一定優(yōu)勢(shì)，對(duì)于早期準(zhǔn)確檢出梅毒，控制其傳播有重要價(jià)值。

化學(xué)發(fā)光靈敏度很高、但試驗(yàn)過程中有一些假陽性出現(xiàn)。筆者發(fā)現(xiàn)當(dāng) 結(jié)果處于臨界值 即（S/ CO1.0）S/CO值在0.8～1.2時(shí)提示結(jié)果是弱陽性，以免疫印跡法確認(rèn)后，結(jié)果是陰性。所以為保證結(jié)果的準(zhǔn)確性， S/CO值在0.8～1.2的樣本需要用另一種方法學(xué)的實(shí)驗(yàn)復(fù)檢驗(yàn)證，兩個(gè)結(jié)果均為陽性即發(fā)陽性報(bào)告，假如復(fù)檢結(jié)果不一致，一陰一陽或一陽一陰，就需要再作補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)或蛋白印跡試驗(yàn)（TPPA或WB）確診，以防誤診或漏診。沒有條件作TPPA或WB可建議患者2～4周后再?gòu)?fù)查。

[1] 羅曉群，伍啟康.TPPA 和TRUST聯(lián)合對(duì)住院病人梅毒的診斷和監(jiān)控意義[J].實(shí)用醫(yī)技雜志，2006，5（13）：56.

[2] 薛大奇.關(guān)于當(dāng)前梅毒診治中幾個(gè)問題的探討[J].中國(guó)性科學(xué)，2008，17（8）：23-25.

[3] 陳剛.梅毒血清學(xué)試驗(yàn)中特異性抗體與非特異性抗體檢測(cè)的臨床應(yīng)用[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，12（3）：128.

[4] 杜蘭英，莊輝，何軍.梅毒螺旋體TPN17重組抗原的表達(dá)及其在獻(xiàn)血員篩查中的應(yīng)用[J].中國(guó)輸血雜志2009，11（1）：1942.

[5] 鄒黎.梅毒血清學(xué)試驗(yàn)幾種檢測(cè)方法比較[J].實(shí)用醫(yī)技雜志，2006，13（21）：3788.

[6] 武衛(wèi).不同梅毒血清學(xué)檢驗(yàn)方法的比較分析[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2011，27（3）：94.

[7] 劉金石.循證檢驗(yàn)在臨床檢驗(yàn)工作中的應(yīng)用[J].健康必讀，2011，14（8）：1147.

[8] 焦繼光，鄧俊峰.梅毒檢測(cè)方法的臨床診斷意義[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2010，10（2）：181-184.

[9] Contreras MA. Andru JL，lsasi C，et al. False positiu trepone-mal test result in a patient with active systemi wpus erythematosus[J].J Rhumatol，2000，27（8）：2059.

[10] 尹建奇，李曉娥，劉平英，等.2592份血清中梅毒血清學(xué)生物學(xué)假陽性結(jié)果的臨床分析[J].中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志， 2001，15（5）：317-318.

[11] 武建國(guó).老年人抗梅毒螺旋體測(cè)定的假陽性率偏高[J]臨床檢驗(yàn)雜志，2006，24（4）：241-242.

[12] Woznicova V，Valisova Z.Performance of CAPTIA SelectSyph-Genzyme-linked immunosorbent assay in syphilis testing of a high risk population：Analysis o discordant results[J].J Clin Microbiol，2007，45（6）1794-1797.

The application of the chemiluminescence technology in the syphilis antibody detection.

XU Hongchang ZHENG Wenliang ZHOU Mingjun
Department of Clinical Laboratory, Central Hospital of Xuchang City, Xuchang 461000, China

ObjectivesTo discuss the application of the chemiluminescence technology in the detection of syphilis antibody.MethodsThree methods were applied in the detection of syphilis antibody. The methods were treponema pallidum gelatin agglutination test (TPPA), enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) and chemical luminescence immunity test(CLIA).Compared the difference of the three methods by the detection results.ResultsThe sensitivity of CLIA was 100.0% and the specificity was 98.5%; The sensitivity of ELISA was 97.6% and the specificity was 95.6%. The sensitivity of the TPPA was 98.8% and the specificity was 100.0%. CLIA has significant difference compared in detection of Treponema pallidum antibody and ELISA, ELISA(P＜0.05).ConclusionThe sensitivity and the specificity of CLIA were higher than the other two methods, the methods were rapid, the reagent are non-toxic, safety and stable, it is applicable for automation. So the methods is suitable for medical examination with large number of samples.

Syphilis antibody; Treponema pallidum gelatin agglutination test; Enzyme-linked immunosorbent assay; Chemiluminescence immunoassay

R446.6

B

2095-0616（2015）05-138-03

2014-12-09）