不同免疫程序下豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病和口蹄疫免疫效果分析

張明敬　李　峰　單玉平　孫　田（連云港市畜牧獸醫(yī)站，江蘇連云港222001）

豬病防控Swine Disease Prevention and Control

不同免疫程序下豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病和口蹄疫免疫效果分析

張明敬李峰單玉平孫田
（連云港市畜牧獸醫(yī)站，江蘇連云港222001）

摘要：本文通過(guò)6組不同免疫程序下對(duì)豬瘟（HC）、高致病性豬藍(lán)耳?。℉PRRS）和口蹄疫（FMD）免疫效果進(jìn)行跟蹤監(jiān)測(cè)，分析每一組免疫程序下各疫病的免疫抗體水平，發(fā)現(xiàn)HC的免疫抗體水平受其他疫苗的免疫程序影響較??；HPRRS的提前單獨(dú)免疫可能促進(jìn)豬瘟抗體的產(chǎn)生，HPRRS的免疫抗體水平受其他疫苗的免疫程序影響較小；口蹄疫合成肽疫苗的抗體水平在HPRRS提前單獨(dú)免疫后，下降明顯，兩者之間是否存在相關(guān)，還需要進(jìn)一步試驗(yàn)佐證。

關(guān)鍵詞：豬瘟；高致病性豬藍(lán)耳??；口蹄疫；免疫程序；免疫效果

豬瘟（Swine Fever, Hog Cholera, HC）、高致病性豬藍(lán)耳?。℉igh Pathogenicity Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, HPRRS）、和口蹄疫（Foot and Mouth Disease, FMD）是目前危害養(yǎng)豬生產(chǎn)的主要傳染病，最有效的預(yù)防方法就是免疫注射。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將HC、FMD列為A類家畜傳染病，將HPRRS列為B類傳染病，同時(shí)將這三種疫病列為世界范圍內(nèi)重要傳染病研究行列[1,2]。本試驗(yàn)通過(guò)6組不同免疫程序下對(duì)HC、HPRRS 和FMD免疫效果進(jìn)行跟蹤監(jiān)測(cè)，分析每一組免疫程序下各疫病的免疫抗體水平，旨在確定更符合連云港地區(qū)豬群的免疫程序?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1　材料和方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物

連云港市某自繁自養(yǎng)規(guī)模豬場(chǎng)提供的母豬及仔豬。

1.2疫苗

豬瘟疫苗（以下簡(jiǎn)稱HC）、高致病性豬藍(lán)耳病疫苗（以下簡(jiǎn)稱HPRRS）、口蹄疫合成肽疫苗（以下簡(jiǎn)稱VP1苗）及豬O型口蹄疫滅活濃縮疫苗(以下簡(jiǎn)稱206苗)均使用的是政府招標(biāo)統(tǒng)購(gòu)苗。

1.3檢測(cè)試劑和判定

豬瘟抗體ELISA試劑盒（批號(hào)：T4413040）和豬繁殖與呼吸障礙綜合征抗體ELISA試劑盒（批號(hào)：T4404071）購(gòu)自韓國(guó)安捷公司、豬口蹄疫病毒VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)診斷試劑盒（批號(hào)：201403004）購(gòu)自上海優(yōu)耐特生物公司以及口蹄疫O型液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：2014060301）購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，試驗(yàn)操作和結(jié)果判定按說(shuō)明書要求進(jìn)行。

1.4分組方法及免疫程序

本試驗(yàn)共分為6組進(jìn)行，分別為A、B、C、D、E和F組，每組12頭仔豬（注：免疫過(guò)程中有個(gè)別應(yīng)激死亡，所以實(shí)際試驗(yàn)數(shù)據(jù)每組不滿12頭），每組的免疫程序均有所不同，試驗(yàn)分組及免疫程序詳見表1。

表1　試驗(yàn)分組及免疫程序

1.5樣品采集及檢測(cè)方法

仔豬一免前采血，檢測(cè)血清中HC、HPRRS及FMD母源抗體水平；之后在60、70、102和135日齡分別采血，檢測(cè)血清中HC、HPRRS、FMD的抗體水平。檢測(cè)方法及步驟按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作和分析。

2　結(jié)果與分析

2.1HC苗的免疫效果

圖1為6組免疫程序下不同采血時(shí)間豬瘟抗體的檢測(cè)結(jié)果。從圖中可以看出，一免前HC的抗體水平除B組外，其他5組的HC抗體合格率都在70%以上，說(shuō)明仔豬在胎兒期間已經(jīng)獲得了母源抗體。仔豬60日齡（即HC二免后14天）時(shí)，6個(gè)試驗(yàn)組的HC抗體群體合格率均達(dá)到了很高水平，之后A組的HC抗體水平持續(xù)下降到較低的水平，可能該組的豬群受到了HC病毒的侵襲，由于仔豬本身的抗體水平較高，HC病毒只是中和了豬群本身的一部分抗體而并未對(duì)豬群致??；B組的HC高抗體水平維持到102日齡（即二免后56天）開始下降，隨后抗體水平又出現(xiàn)上升現(xiàn)象，可能該豬群中存在HC病毒的一過(guò)性感染；C、D、E、F組的HC抗體均在很長(zhǎng)一段時(shí)間維持在一個(gè)較高的水平，完全符合加強(qiáng)免疫后，抗體在14～21天迅速上升至很高的水平并維持很長(zhǎng)一段的時(shí)間的規(guī)律，因此本試驗(yàn)中的C、D、E、F組的豬瘟免疫程序能較好地抵抗HC病毒的侵襲，保護(hù)豬群。與A組相比，C組是HPRRS提前免疫組，C組的HC的抗體水平在二免后的24天、55天和89天均高于A組，這說(shuō)明HPRRS的提前免疫有利于HC的免疫效果。

圖1　HC苗免疫抗體結(jié)果

2.2HPRRS苗的免疫效果

從圖2中可以看出，免疫前HPRRS的抗體水平都較低，群體抗體合格率均在40%以下，本次試驗(yàn)仔豬免疫前的采樣日齡是15天，文獻(xiàn)報(bào)道HPRRS的母源抗體可以維持到斷奶前后，也就是28天左右，說(shuō)明仔豬在胎兒期間沒(méi)有獲得足夠的母源抗體，有的甚至沒(méi)有獲得母源抗體。到60日齡時(shí)，即HPRRS免疫后的30天，6個(gè)試驗(yàn)組的HPRRS群體合格率均達(dá)到了很高水平，除A組外，其他5組的群體抗體合格率都在80%以上，直到135日齡時(shí)豬血清中的抗體水平仍較高，群體合格率均達(dá)到100%。本次試驗(yàn)所使用的是HPRRS弱毒疫苗，因此可以看出只需使用HPRRS弱毒疫苗對(duì)豬群進(jìn)行一次免疫，就能使豬群得到很好的保護(hù)，而不受其他免疫程序的影響，這也符合金光明[3]等的研究，其研究表明仔豬進(jìn)行HPRRS弱毒苗免疫后的第110天采用同源強(qiáng)毒感染，動(dòng)物可得到完全保護(hù)，而且對(duì)強(qiáng)毒感染的保護(hù)甚至是終生的。

2.3VP1苗的免疫效果

從圖3中可以看出，免疫前VP1的抗體水平都較高，群體抗體合格率都在70%以上，說(shuō)明仔豬在胎兒期間已經(jīng)獲得了很好的VP1母源抗體。A、B及C組對(duì)口蹄疫的免疫，未采用VP1苗，兩次免疫都采用206苗，結(jié)果顯示，二免后A、B及C組VP1抗體水平持續(xù)下降。D、E及F組對(duì)口蹄疫的免疫，首免采用206苗，二免采用VP1苗，結(jié)果顯示二免后此3組VP1的抗體都維持在較高的水平。根據(jù)免疫學(xué)原理：206疫苗是O型口蹄疫的全病毒滅活疫苗，經(jīng)206疫苗免疫后產(chǎn)生的是全病毒抗體，同時(shí)因?yàn)槭菧缁钜呙?，所以免疫后產(chǎn)生抗體的時(shí)候較長(zhǎng)，且必需經(jīng)過(guò)二免才能達(dá)到理想的免疫抗體水平。而VP1疫苗是口蹄疫病毒結(jié)構(gòu)蛋白上的一個(gè)多肽片段，經(jīng)VP1疫苗免疫后所產(chǎn)生的是病毒結(jié)構(gòu)蛋白抗體，由于VP1是表達(dá)蛋白，且蛋白抗原小而單一，純度高，免疫進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)后不需要像病毒那樣需要復(fù)雜的識(shí)別和提呈過(guò)程，所以能很快產(chǎn)生針對(duì)病毒結(jié)構(gòu)蛋白的抗體。筆者曾經(jīng)做過(guò)206苗和VP1苗免疫后的免疫抗體水平對(duì)比試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)豬的VP1苗在一免后14天就能產(chǎn)生較高水平的抗體，并且高抗體水平能維持很長(zhǎng)一段時(shí)間，而豬的206苗二免后抗體群體合格率都很難達(dá)到80%，這次的試驗(yàn)結(jié)果也與之前相符。同時(shí)對(duì)比A和C兩組免疫程序與結(jié)果發(fā)現(xiàn)，206苗同樣的免疫劑量與免疫日齡，C組的抗體下降較A組更快些，這可能與HPRRS的免疫先后有關(guān)。

圖2　HPRRS苗免疫抗體結(jié)果

圖3　VP1苗免疫抗體結(jié)果

圖4　206苗免疫抗體結(jié)果

2.4206苗的免疫效果

從圖4中可以看出，一免前豬O型口蹄疫抗體都處在極低的水平，調(diào)查發(fā)現(xiàn)生產(chǎn)該豬群的母豬之前的免疫程序中所使用的均為口蹄疫VP1疫苗，所以血清中沒(méi)有檢測(cè)到針對(duì)206苗的母源抗體的存在。A、B、C、F四組的O型口蹄疫抗體在60日齡（即二免后14天）均有不同程度的提高。而二免使用VP1苗的D、E兩組的O型口蹄疫抗體滴度均很低，群體抗體合格率均不合格。其中A組的豬O型口蹄疫抗體水平在二免后24天開始下降；B組的豬O型口蹄疫抗體水平維持在一個(gè)較高的水平，直至135日齡（即二免后89天）；C組的O型口蹄疫抗體水平呈現(xiàn)起伏狀態(tài)，60日齡（即二免14天）時(shí)，抗體水平得到提高，70日齡時(shí)迅速下降，102日齡時(shí)抗體水平再次上升，但群體的合格率始終沒(méi)有達(dá)到70%，疫病風(fēng)險(xiǎn)始終存在，猜測(cè)當(dāng)HPRRS先于206苗免疫時(shí)，會(huì)影響206苗的初次免疫效果。此外，與A組相比，B組分別在一免和二免時(shí)增加了1 mL 206苗的免疫劑量，結(jié)果顯示B組在二免后不同時(shí)間點(diǎn)的抗體水平均高于A組，這表明增加206苗的免疫劑量與提高豬O型口蹄疫的免疫效果可能存在正相關(guān)關(guān)系。

3　討論

從本次試驗(yàn)的結(jié)果中可以看出，HC免疫后抗體水平受其他疫苗的免疫程序影響較小，只要肉豬在養(yǎng)殖期間進(jìn)行兩次免疫，就能刺激機(jī)體產(chǎn)生較高水平的抗體，保護(hù)肉豬免受HC病毒的感染而引起生產(chǎn)性能的下降，同時(shí)，如果對(duì)肉豬進(jìn)行HPRRS的提前單獨(dú)免疫可能對(duì)豬瘟抗體的產(chǎn)生具有促進(jìn)作用。HPRRS免疫后抗體水平受其他疫苗的免疫程序影響較小，只要對(duì)豬群進(jìn)行一次弱毒苗的免疫，就能刺激機(jī)體產(chǎn)生較高水平的抗體，保護(hù)其在養(yǎng)殖期免受HPPRS病毒的感染，但同時(shí)我們也發(fā)現(xiàn)，HPRRS的母源抗體水平持續(xù)時(shí)間并不像以前文獻(xiàn)報(bào)道的那么長(zhǎng)，而目前大部分養(yǎng)殖場(chǎng)推行的免疫程序是在仔豬斷奶前后（28天左右）進(jìn)行初免，因此存在HPRRS抗體的免疫空白期，在此期間如果仔豬受到HPRRS病毒的感染，則會(huì)對(duì)整個(gè)豬群的生產(chǎn)性能造成較大影響，因此，最好將HPRRS的免疫時(shí)間稍微向前調(diào)整。

同時(shí)，由于HPRRS是免疫抑制性疾病，在HPRRS提前單獨(dú)免疫后VP1抗體水平下降較其他組明顯；將HPRRS作為首免疫苗，206苗作為后免疫苗，豬群O型口蹄疫抗體水平呈現(xiàn)起伏狀態(tài)，群體的合格率始終低于70%，說(shuō)明HPRRS苗與206苗免疫的先后順序影響206苗的免疫效果；不能滿足我國(guó)現(xiàn)行的重要?jiǎng)游镆卟〉姆酪咭?。在此基礎(chǔ)上，在一免和二免時(shí)分別將206苗的免疫劑量由1 mL增加至2 mL，有助于獲得更高的免疫抗體水平。華樹明[4]研究表明：O型FMD、HC和HPRRS疫苗同時(shí)分點(diǎn)注射后，F(xiàn)MD抗體效價(jià)合格率不高，免疫效果不佳；HC抗體效價(jià)合格率較高，免疫效果較好。雖然我們的試驗(yàn)不是同時(shí)分點(diǎn)注射的，但就試驗(yàn)結(jié)果來(lái)說(shuō)與上述研究存在一定的相似性。

綜上所述，為了獲得最好的組合免疫效果，應(yīng)合理縮短HPRRS的免疫空白期。建議在實(shí)際免疫的時(shí)候，在保持HC免疫時(shí)間點(diǎn)不變的情況下，將HPRRS疫苗的免疫時(shí)間點(diǎn)稍微向前調(diào)整，同時(shí)在接下來(lái)的免疫程序中增加206疫苗的免疫劑量，有助于肉豬獲得更為有效的免疫抗體，從而保證肉豬在養(yǎng)殖期間的健康，以降低養(yǎng)殖風(fēng)險(xiǎn)，增加養(yǎng)殖效益。

參考文獻(xiàn)

[1]殷震,劉景華.動(dòng)物病毒學(xué)[M].北京:科學(xué)出版社, 1997:652-664.

[2]蔡寶祥.家畜傳染病學(xué)[M].第4版.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社, 2001.

[3]金光明,楊倩.豬繁殖與呼吸綜合征免疫學(xué)研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2003, 31(1): 114-116.

[4]華樹明.高致病性豬藍(lán)耳病疫苗與口蹄疫、豬瘟疫苗同時(shí)分點(diǎn)注射對(duì)口蹄疫、豬瘟抗體效價(jià)的影響試驗(yàn)[J].浙江畜牧獸醫(yī), 2008(4):6-7.

中圖分類號(hào)：S828

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1673-4645(2015)03-0044-04

收稿日期：2015-01-04