鼠神經(jīng)生長因子對危重型小兒手足口病患者體液免疫的影響

韓傳映，蔣剛健，陳鑫

(1.漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第一附屬醫(yī)院兒，河南 漯河 462000；2.漯河市醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第一附屬醫(yī)院 檢驗(yàn)科，河南 漯河 462000)

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鼠神經(jīng)生長因子對危重型小兒手足口病患者體液免疫的影響

韓傳映1，蔣剛健1，陳鑫2

(1.漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第一附屬醫(yī)院兒，河南 漯河 462000；2.漯河市醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第一附屬醫(yī)院 檢驗(yàn)科，河南 漯河 462000)

目的 探討鼠神經(jīng)生長因子對危重型小兒手足口病患者體液免疫影響。方法 隨機(jī)抽取漯河醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校第一附屬醫(yī)院感染科2010年6月～2012年9月收治的危重型小兒手足口病患者92例，隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組和觀察組，每組46例。對照組采用常規(guī)對癥治療，觀察組在對照組治療基礎(chǔ)上聯(lián)合應(yīng)用注射用鼠神經(jīng)生長因子。治療14d后比較2組患者血細(xì)胞分析、體液免疫、細(xì)胞因子以及T淋巴細(xì)胞亞群各指標(biāo)。結(jié)果 治療后，與對照組比較，觀察組白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞水平較低(P<0.05)，觀察組IgM、IgG、IgA水平較高(P<0.05)，IL-1、IL-6、IL-10水平較低(P<0.05)，CD4+、CD8+水平較高(P<0.05)。結(jié)論 鼠神經(jīng)生長因子能夠明顯改善小兒手足口病患者的體液免疫、細(xì)胞因子以及T淋巴細(xì)胞亞群各指標(biāo)的水平，對臨床具有指導(dǎo)意義。

鼠神經(jīng)生長因子；危重型手足口病；體液免疫；病情轉(zhuǎn)歸

手足口病(hand foot mouth disease，HFMD)是臨床上常見的一種嬰幼兒傳染性疾病，多發(fā)生在5歲以下兒童。常見的臨床癥狀主要有手、足、口腔等部位出現(xiàn)皰疹或者破潰性潰瘍等。少數(shù)手足口病患兒可引發(fā)腦膜炎、肺水腫、心肌炎等嚴(yán)重并發(fā)癥的出現(xiàn)[1-2]。危重型手足口病的臨床表現(xiàn)為持續(xù)性高熱(體溫>39.0 ℃)，持續(xù)時(shí)間約為2～7 d，伴有頻繁抽搐以及有嚴(yán)重意識障礙等癥狀，病情危重，亦可影響循環(huán)、呼吸系統(tǒng)[3]。本病是由腸道病毒71型和柯薩奇A16病毒引起的傳染性疾病。鑒于近幾年本病的發(fā)病率逐年升高，所以對重癥患兒危險(xiǎn)性給予及時(shí)評估、干預(yù)并且改善患兒病情預(yù)后，成為臨床研究的重點(diǎn)[4]。研究發(fā)現(xiàn)[5]，鼠神經(jīng)生長因子治療危重癥手足口病患兒，在改善體液免疫方面取得較好療效，能夠促進(jìn)疾病轉(zhuǎn)歸。本文通過比較觀察組與對照組免疫球蛋白IgM、IgG、IgA水平，來探究鼠神經(jīng)生長因子的治療效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年6月～2012年9月于漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第一附屬醫(yī)院感染科以手足口病為診斷而收入院患兒92例，年齡6個月～7歲，平均年齡(3.6±1.1)歲，患者病程均為2～5 d，按照我國衛(wèi)生部頒布的《手足口病診療指南》(2010年版)[3]分型為危重型的患者。采用隨機(jī)數(shù)字表法將患者分為觀察組和對照組。對照組46例患兒，男21 例，女25例，年齡6個月～6歲，平均年齡(3.6±0.9)歲；觀察組46例患兒，男24例，女22例，年齡6個月～7歲，平均年齡(3.8±1.2)歲。2組患者的一般資料相仿，具有可比性。診斷標(biāo)準(zhǔn)及排除標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)《手足口病預(yù)防控制指南》確定診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]：①臨床表現(xiàn)為口痛、厭食、低熱、手、足、口腔等部位出現(xiàn)小皰疹或小潰瘍；②自咽拭子、糞便、腦脊液、皰疹液、血清檢測到人腸道病毒；③自咽拭子、糞便、腦脊液、皰疹液、血清檢測到人腸道病毒核酸；④血清中人腸道病毒中和抗體滴度為1:256以上。病程為2～7 d，并均在發(fā)病48 h內(nèi)入院；入院前2月內(nèi)未行激素、丙種球蛋白等藥物治療。排除臨床未確診的HFMD患兒；排除心、肝、腎、肺嚴(yán)重疾病者；排除臨床檢驗(yàn)提示合并細(xì)菌或支原體感染的患兒。本研究獲得患者知情同意。

1.2 治療方法 根據(jù)國際臨床用藥指南[6]，對照組入院后予以雙黃連口服液(哈爾濱中藥四廠有限公司，國藥準(zhǔn)字Z10910024)10 mL/次，每天3次抗病毒治療，布洛芬混懸液(上海強(qiáng)生制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H20000359)0.1 g退熱、有顱內(nèi)壓增高者可給予20%甘露醇注射液(四川美大康華康藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H51023254)50 mL靜脈滴注，常規(guī)補(bǔ)液以糾正酸堿平衡和離子紊亂等；觀察組在常規(guī)對癥治療的基礎(chǔ)上聯(lián)合應(yīng)用注射用鼠神經(jīng)生長因子(武漢海特生物制藥股份有限公司，國藥準(zhǔn)字S20060051)20 μg肌肉注射，每天1次，2周為1療程，治療1個療程。

1.3 檢測指標(biāo) 患者入組后第1天清晨及最后1天清晨抽取空腹靜脈血5 mL，3000 r/min離心后取上清備用。應(yīng)用全自動生化分析儀檢測C反應(yīng)蛋白(C-reactionprotein，CRP)、谷氨酰胺(glutarnine，Glu)、WBC水平。應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測患者血清CD4+、CD8+相對含量。采用免疫比濁法檢測2組患者血清中免疫球蛋白IgM、IgG、IgA水平。采用化學(xué)發(fā)光法，檢測血清中IL-1、IL-6、IL-8、IL-10水平。試劑盒由賽馳生物公司提供，嚴(yán)格按照試劑盒的說明書操作。

2 結(jié)果

2.1 血細(xì)胞分析比較 治療前患者血細(xì)胞分析指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。經(jīng)治療，2組患者血細(xì)胞分析指標(biāo)均下降(P<0.05)。與對照組比較，觀察組白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞水平較低(P<0.05)，單核細(xì)胞比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

表1 2組患者血細(xì)胞分析指標(biāo)比較Tab.1 Comparison of blood cell analysis between two ±s，×109/L)

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group before treatment；#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group after treatment

2.2 體液免疫指標(biāo)比較 治療前2組患者IgM、IgG、IgA水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)治療，患者IgM、IgG、IgA水平上升(P<0.05)。與對照組相比，觀察組IgM、IgG、IgA水平較高(P<0.05)。見表2。

表2 2組患者IgM、IgG、IgA水平比較Tab.2 Comparison of IgM，IgG and IgA levels between two ±s)

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group before treatment；#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group after treatment

2.3 IL-1、IL-6、IL-8、IL-10水平比較 治療前患者IL-1、IL-6、IL-8、IL-10水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。治療后，2組患者的IL-1、IL-6、IL-8、IL-10水平均下降(P<0.05)。與對照組相比，觀察組患者的IL-1、IL-6、IL-10水平較低(P<0.05)。見表3。

表3 2組患者IL-1、IL-6、IL-8、IL-10水平比較Tab.

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group before treatment；#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group after treatment

2.4 CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平比較 治療前患者CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)治療，2組患者CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平升高(P<0.05)。與對照組相比，觀察組患者的CD4+、CD8+水平較高(P<0.05)，CD4+/CD8+比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

組別 例數(shù)時(shí)間CD4+CD8+CD4+/CD8+對照組46治療前0.81±0.1314.32±2.120.83±0.13治療后28.77±4.68*22.18±3.34*1.23±0.19*觀察組46治療前0.83±0.1214.55±2.210.85±0.11治療后33.84±4.63*#26.36±3.86*#1.25±0.18*

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group before treatment；#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group after treatment

3 討論

手足口病是因感染人腸道病毒引起的手、足、口腔出現(xiàn)皰疹伴發(fā)熱為表現(xiàn)的急性傳染病，該病主要的病原體為柯薩奇病毒A16型和腸道病毒71型，好發(fā)于每年的5～6月，以消化道、呼吸道及接觸傳播為主要傳播途徑，多發(fā)于兒童[7]。手足口病具有較強(qiáng)的傳染性，能夠在短期內(nèi)發(fā)生大量兒童感染，病毒能夠隨著血液侵入大腦及脊髓中，引起腦炎、腦脊髓炎嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)性疾病，嚴(yán)重威脅患兒生命。研究表明[8]，人腸道病毒侵襲機(jī)體后，病毒本身及分泌毒素能夠直接侵入組織而損傷細(xì)胞，引起異常的免疫反應(yīng)，手、足及口周出現(xiàn)皰疹。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，入院手足口病患兒血中體液免疫各項(xiàng)指標(biāo)均較低，經(jīng)治療方案治療后，各項(xiàng)指標(biāo)恢復(fù)，與對照組比較，觀察組各項(xiàng)免疫指標(biāo)較高。提示患兒感染人腸道病毒后，導(dǎo)致機(jī)體免疫水平紊亂，免疫球蛋白處于低水平狀態(tài)，導(dǎo)致無法清除體內(nèi)病毒，導(dǎo)致病毒對組織的損傷[9]。免疫球蛋白IgA[10]是由氣管黏膜、鼻黏膜、肺黏膜等分泌的抗體，能夠敏感監(jiān)測和防御呼吸系統(tǒng)局部感染，若呼吸系統(tǒng)出現(xiàn)病毒或細(xì)菌感染時(shí)，黏膜分泌水平下降，無法正常分泌IgA抗體，導(dǎo)致機(jī)體免疫力下降，出現(xiàn)口腔黏膜皮疹。IgM是體液免疫中出現(xiàn)最早、生存時(shí)間最短的免疫球蛋白，當(dāng)患兒感染人腸道病毒時(shí)，機(jī)體免疫紊亂，免疫水平低下，從而嚴(yán)重影響IgM的形成和分泌[11]。IgG是下呼吸道保護(hù)性抗體，能夠敏感的反映呼吸道黏膜防御病毒及細(xì)菌感染的水平。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)治療后，2組患者的IL-1、IL-6、IL-8、IL-10水平上升，與對照組相比，觀察組IL-1、IL-6、IL-10水平較低。IL-1是炎癥反應(yīng)早期的重要介質(zhì)之一，主要存在于循環(huán)系統(tǒng)中。IL-1在低濃度下可特異性作用于單核巨噬細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞；大量分泌時(shí)，IL-1進(jìn)入血液，引起全身性的炎癥反應(yīng)[12]。本實(shí)驗(yàn)中IL-1參與炎癥反應(yīng)，與患者的病情輕重密切相關(guān)。大多數(shù)IL-6由單核細(xì)胞產(chǎn)生。當(dāng)機(jī)體發(fā)生炎癥時(shí)，巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞產(chǎn)生IL-6的反應(yīng)細(xì)胞，使炎癥部位及全身的IL-6水平升高。在機(jī)體的作用與IL-1相似。通過IL-1激活[13]。本實(shí)驗(yàn)患者IL-6水平升高，提示其正在參與機(jī)體的炎癥活動。IL-8是中性粒細(xì)胞的趨化因子，能夠趨化并激活中性粒細(xì)胞，促進(jìn)其脫顆粒，增強(qiáng)其吞噬作用。IL-10可由多種細(xì)胞分泌，具有免疫抑制和激活的雙重作用[14]。

目前，臨床通常采用檢測T細(xì)胞亞群判斷患者機(jī)體細(xì)胞免疫功能水平，本研究結(jié)果表明，經(jīng)治療后，2組患者的CD4+、CD8+水平均明顯改善，與對照組相比，觀察組患者的CD4+、CD8+水平明顯升高。研究表明CD4+、CD8+能夠調(diào)節(jié)人體的免疫功能，其中CD4+可以刺激產(chǎn)生抗體，CD8+對抗體合成具有抑制作用，2者的協(xié)調(diào)作用使機(jī)體的免疫功能維持正常，其比值提示了人體的免疫功能水平[15]。CD4+參與Th2細(xì)胞激活。CD8+激活細(xì)胞毒性T細(xì)胞，調(diào)節(jié)人體的免疫活動。

研究表明[16]，鼠神經(jīng)生長因子主要成分系從小鼠頜下腺提取的神經(jīng)生長因子，具有促進(jìn)呼吸道黏膜的愈合和抗病毒的能力，從而恢復(fù)呼吸系統(tǒng)黏膜對免疫球蛋白的分泌，恢復(fù)機(jī)體的免疫水平。研究證實(shí)[17]，體內(nèi)神經(jīng)生長因子(NGF)是一種神經(jīng)活性多肽，不僅具有中樞神經(jīng)系統(tǒng)營養(yǎng)因子的作用，還能促進(jìn)受損神經(jīng)元的再生，改善神經(jīng)元的病理狀態(tài)對神經(jīng)損傷具有重要的保護(hù)和修復(fù)作用。在胚胎時(shí)期，NGF分布廣泛，含量較多，在出生后分布區(qū)域明顯減少而且含量下降，至成年保持較低水平。本研究推斷鼠神經(jīng)生長因子作用機(jī)理，因神經(jīng)損傷后NGF應(yīng)激性表達(dá)水平上調(diào)，但內(nèi)源性NGF表達(dá)增加時(shí)程很短，表達(dá)水平有限，難以對受損神經(jīng)元起到全面而持久的保護(hù)作用，鼠神經(jīng)生長因子彌補(bǔ)了這項(xiàng)不足。正常生理狀態(tài)下，外源性NGF不易透過血腦屏障，但在顱內(nèi)感染等導(dǎo)致血腦屏障受損傷時(shí)，NGF 可透過血腦屏障進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)揮作用。

鼠神經(jīng)生長因子能夠明確增強(qiáng)患兒體液以及細(xì)胞免疫功能，進(jìn)而促進(jìn)患兒疾病轉(zhuǎn)歸，對臨床具有指導(dǎo)意義。但本實(shí)驗(yàn)尚未大樣本研究鼠神經(jīng)生長因子與體液免疫功能及病情轉(zhuǎn)歸，也未做長遠(yuǎn)的預(yù)后分析，還需進(jìn)一步深入研究。

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(編校：王儼儼)

Effect of mouse nerve growth factor on humoral immunity in children with severe hand foot mouth disease

HAN Chuan-ying1, JIANG Gang-jian1, CHEN Xin2

(1.Department of Pediatrics, The First Affiliated Hospital of Luohe Med & Cal College, Luohe 462000, China; 2.Department of Laboratory, The First Affiliated Hospital of Luohe Med & Cal College, Luohe 462000, China)

ObjectiveTo investigate the effect of mouse nerve growth factor on humoral immunity in children with severe hand foot mouth disease.Methods92 patients with severe hand foot mouth disease were selected from June 2010 to September 2012 in the hospital, and randomly divided into two groups.The indexes of blood cell analysis, humoral immunity, cytokines and T lymphocyte subsets were compared after treatment.ResultsAfter treatment, compared with control group, the numeration white blood cell, neutrophil and lymphocyte of observation group were lower (P<0.05), IgM, IgG and IgA were higher (P<0.05), IL-1, IL-6 and IL-10 were lower (P<0.05), CD4+and CD8+were higher (P<0.05).ConclusionMouse nerve growth factor can significantly improve the each index of humoral immunity cytokines and T lymphocyte subsets level in children with hand foot mouth disease, which has the great significance in clinical.

mouse nerve growth factor; severe hand foot mouth disease; humoral immunity; prognosis

韓傳映，男，本科，副主任醫(yī)師，研究方向：兒科，E-mail：okhcying@163.com。

R72

A

1005-1678(2015)05-0135-03