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    舒血寧注射液與環(huán)磷腺苷葡胺注射液的配伍穩(wěn)定性研究

    2015-07-07 16:00:14張晨華
    中國(guó)生化藥物雜志 2015年9期
    關(guān)鍵詞:環(huán)磷葡胺舒血寧

    張晨華

    (浙江省臺(tái)州市第一人民醫(yī)院 藥劑科,浙江 臺(tái)州 318020)

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    舒血寧注射液與環(huán)磷腺苷葡胺注射液的配伍穩(wěn)定性研究

    張晨華Δ

    (浙江省臺(tái)州市第一人民醫(yī)院 藥劑科,浙江 臺(tái)州 318020)

    目的 研究舒血寧注射液與環(huán)磷腺苷葡胺注射液的配伍穩(wěn)定性。方法 采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選舒血寧注射液與環(huán)磷腺苷葡胺注射液的配伍方案,以舒血寧注射液中主要成分銀杏總黃酮(以槲皮素、山奈素及異鼠李素為對(duì)照品)和銀杏內(nèi)酯(以銀杏內(nèi)酯A、B、C為對(duì)照品)的含量及環(huán)磷腺苷葡胺注射液中主成分環(huán)磷腺苷(以環(huán)磷腺苷為對(duì)照品)的含量為主要考察指標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,選擇溫度(A)、光照(B)、放置時(shí)間(C)、溶媒種類(D)4 個(gè)影響因素,同時(shí)考察配伍前后各溶液中不溶性微粒和pH值的變化情況。結(jié)果 正交試驗(yàn)優(yōu)選方案為A2B1C1D1(25 ℃、避光、放置1 h、5%葡萄糖為溶媒),方差分析結(jié)果表明對(duì)于舒血寧注射液中的槲皮素、山奈素而言,溫度(A)、光照(B)和放置時(shí)間(C)3個(gè)因素均對(duì)其含量有顯著影響(P<0.05),而溶媒(D)對(duì)它們的含量無(wú)顯著性影響;溫度(A)、光照(B)、放置時(shí)間(C)和溶媒(D)對(duì)配伍液中的其他5種成分均具有顯著性影響(P<0.05)。在0、1、4、6 h,配伍液(A2B1C1D1)的外觀、pH值無(wú)明顯變化,隨著放置時(shí)間的延長(zhǎng),不溶性微粒數(shù)符合中國(guó)藥典的相關(guān)規(guī)定。結(jié)論 舒血寧注射液與環(huán)磷腺苷葡胺注射液在一定的條件下配伍穩(wěn)定性較好,臨床上可以配伍使用。

    舒血寧注射液;環(huán)磷腺苷葡胺注射液;配伍穩(wěn)定性;正交實(shí)驗(yàn);優(yōu)選

    舒血寧注射液是由銀杏葉提取物制備而成的中藥注射劑,其活性成分主要包含銀杏葉總黃酮及總內(nèi)酯等,具有擴(kuò)張血管,改善微循環(huán)的作用,臨床上用于治療缺血性心腦血管疾病、冠心病、心絞痛、腦栓塞、腦血管痙攣[1]。環(huán)磷腺苷葡胺注射液的主要成分為環(huán)磷腺苷,其具有正性肌力作用,能增加心肌收縮力,改善心臟泵血功能;且具有擴(kuò)張血管的作用,可降低心肌耗氧量,改善心肌細(xì)胞代謝,保護(hù)缺血、缺氧的心肌。兩藥在臨床上常配伍使用治療心腦血管疾病。之前關(guān)于兩藥配伍穩(wěn)定性的研究[2-3],僅僅限于檢測(cè)時(shí)間和溶媒對(duì)配伍液穩(wěn)定性的影響,且所用檢測(cè)方法專屬性不強(qiáng)。

    本實(shí)驗(yàn)選擇溫度、光照、放置時(shí)間、溶媒種類4 個(gè)影響因素,采用L9(34)正交試驗(yàn)表對(duì)舒血寧注射液與環(huán)磷腺苷葡胺注射液的配伍方案進(jìn)行了優(yōu)選,用HPLC法對(duì)舒血寧注射液中主要成分銀杏總黃酮和銀杏內(nèi)酯的含量及環(huán)磷腺苷葡胺注射液中主成分環(huán)磷腺苷的含量進(jìn)行了測(cè)定,同時(shí)考察了配伍前后各溶液中不溶性微粒及pH值的變化情況,為臨床用藥安全提供了較為全面、合理的數(shù)據(jù)支持。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 儀器:LC20A高效液相色譜儀(島津公司);色譜柱:Dikxna Cl8(4.6 mm×250 mm, 5 μm);AB135S型電子天平(梅特勒-托利多);PB-10型酸度計(jì)(德國(guó)賽多利斯集團(tuán));2501型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(島津公司);GWS-20型智能微粒檢測(cè)儀(江蘇蘇凈集團(tuán));SC-15型電熱恒溫水槽( 上海比朗儀器制造有限公司);SW-CJ-1FD單人單面凈化工作臺(tái)(上海蘇凈實(shí)業(yè)有限公司)。

    1.1.2 試劑:舒血寧注射液(通化谷紅制藥有限公司,規(guī)格:5 mL/支,批號(hào):150307/2,150511/1,150615/2);環(huán)磷腺苷葡胺注射液(徐州萊恩藥業(yè)有限公司, 規(guī)格:2 mL:30 mg,批號(hào):150521,150615,150711);槲皮素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定研究院,批號(hào):100081-200406,含量:98%);山奈素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定研究院,批號(hào):110861-200606,含量:98%);異鼠李素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定研究院,批號(hào):110860-200608);銀杏萜類內(nèi)酯A、B、C對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定研究院,批號(hào):110862 - 200305,110863 - 200204,110864 - 200203 );環(huán)磷腺苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定研究院,批號(hào):140709-201003);0.9%氯化鈉注射液(四川科倫藥業(yè)股份有限公司);5%葡萄糖注射液[華裕(無(wú)錫)制藥有限公司];5%葡萄糖氯化鈉注射液[華仁藥業(yè)(日照)有限公司];甲醇為色譜純,水為超純水,其他試劑為分析純。

    1.2 配伍液的配制 按參考文獻(xiàn)[2]上的配伍比例,取舒血寧注射液2 mL與環(huán)磷腺苷葡胺注射液1 mL,混合于25 mL容量瓶中,分別用0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液、5%葡萄糖氯化鈉注射液溶解并稀釋至刻度,搖勻,根據(jù)正交試驗(yàn)表安排試驗(yàn),每個(gè)試驗(yàn)做3份,共制備27個(gè)樣品溶液。

    1.3 含量測(cè)定

    1.3.1 舒血寧中銀杏總黃酮與銀杏總內(nèi)酯:

    ① 色譜條件[4]:銀杏總黃酮:流動(dòng)相:甲醇-0.4%磷酸溶液(47︰53),流速:0.8 mL/min,DAD檢測(cè)器,檢測(cè)波長(zhǎng):360 nm,柱溫:45 ℃,進(jìn)樣量:20 μL;

    銀杏內(nèi)酯:流動(dòng)相:四氫呋喃-甲醇-水(10︰20 ︰75),流速:0.5 mL/min,蒸發(fā)光散射檢測(cè)器,以空氣為載氣,流速3 L/min,漂移管溫度:105 ℃,柱溫:30 ℃。

    ② 溶液的配制: 對(duì)照品溶液:銀杏總黃酮:精密稱取槲皮素、山奈素及異鼠李素對(duì)照品適量,加甲醇制成每1 mL含槲皮素、山奈素及異鼠李素0.05 mg的黃酮苷元對(duì)照品混合溶液,即得;銀杏內(nèi)酯:精密稱取銀杏內(nèi)酯A、B、C對(duì)照品適量,加丙酮制成每1 mL分別含銀杏內(nèi)酯A、B、C1、0.5、0.5 mg的對(duì)照品混合溶液,即得。

    供試品溶液:銀杏總黃酮:取1.2項(xiàng)下各條件的配伍液(25 mL),加甲醇-12 moL/min鹽酸(7︰1)混合溶液15 mL,68 ℃水浴加熱3 h,冷卻,濾過(guò),取續(xù)濾液即得;銀杏內(nèi)酯:取1.2項(xiàng)下各條件的配伍液,每個(gè)實(shí)驗(yàn)取3份(共75 mL),加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2.0,然后用乙酸乙酯提取4次(80、40、40、40 mL),合并乙酸乙酯液,用5%的醋酸鈉溶液80 mL洗滌,分離出乙酸乙酯層,醋酸鈉溶液再用乙酸乙酯40 mL洗滌,合并乙酸乙酯液及洗滌液,用水洗滌2次,每次80 mL,分離乙酸乙酯液,蒸干,殘?jiān)颖m量溶解,并轉(zhuǎn)移至2 mL量瓶中,加丙酮稀釋至刻度,搖勻,用0.45 μm濾膜過(guò)濾,取續(xù)濾液即得;

    ③ 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:銀杏總黃酮:精密量取1.3.1項(xiàng)下②中的黃酮苷元對(duì)照品混合溶液1、3、5、8、10 mL加甲醇至10 mL量瓶,即得每1 mL含槲皮素、山奈素及異鼠李素分別為5、15、25、40、50 μg的對(duì)照品混合溶液;按1.3.1項(xiàng)下①銀杏總黃酮的色譜條件進(jìn)樣分析,以峰面積A為縱坐標(biāo),對(duì)照品濃度C(μg/mL)為橫坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸。

    銀杏內(nèi)酯:精密量取1.3.1項(xiàng)下②中銀杏內(nèi)酯對(duì)照品混合溶液2、6、10、16、20 μL,按1.3.1項(xiàng)下①銀杏內(nèi)酯項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣分析,以進(jìn)樣量(μg)的自然對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)(X),峰面積的自然對(duì)數(shù)(Y)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    1.3.2 環(huán)磷腺苷葡胺注射液中主成分環(huán)磷腺苷:

    ① 色譜條件[5]:流動(dòng)相:0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈(94︰6),流速:,1.0 mL/min,DAD檢測(cè)器,檢測(cè)波長(zhǎng):259 nm,柱溫:25 ℃,進(jìn)樣量:20 μL;

    ② 溶液的配制:對(duì)照品溶液:精密稱取減壓干燥至恒重的環(huán)磷腺苷對(duì)照品適量,加甲醇制成每1 mL含環(huán)磷腺苷0.15 mg的溶液,即得;

    供試品溶液:取1.2項(xiàng)下各條件的配伍液2.5 mL,加流動(dòng)相稀釋至10 mL,濾過(guò),取續(xù)濾液即得;

    ③ 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:稱取減壓干燥至恒重的環(huán)磷腺苷對(duì)照品適量,加甲醇制成每1 mL含環(huán)磷腺苷5 mg的溶液,精密吸取上述溶液1、3、5、8、10 mL加流動(dòng)相至100 mL量瓶,即得每1 mL含環(huán)磷腺苷0.05、0.15、0.25、0.40、0.50 mg的對(duì)照品混合溶液;按1.3.2項(xiàng)下①的色譜條件進(jìn)樣分析,以峰面積Y為縱坐標(biāo),對(duì)照品濃度X(μg/min)為橫坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸。

    1.3.3 配伍液中藥物含量測(cè)定:按照1.3.1項(xiàng)下①和1.3.2項(xiàng)下①色譜條件和正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表,取1.3.1項(xiàng)下②和1.3.2項(xiàng)下②各對(duì)照品溶液和供試品溶液,分別進(jìn)樣檢測(cè),每個(gè)樣品測(cè)定3次,取均值。

    1.4 正交試驗(yàn)

    1.4.1 因素水平:以舒血寧注射液中的有效成分銀杏總黃酮(槲皮素、山奈素、異鼠李素)和銀杏內(nèi)酯(銀杏內(nèi)酯A、B、C)與環(huán)磷腺苷葡胺注射液溶液中的有效成分(環(huán)磷腺苷)的含量為主要檢測(cè)指標(biāo),采用L9(34)正交試驗(yàn)表,選擇溫度、光照[6]、放置時(shí)間、溶媒種類4個(gè)影響因素,每個(gè)因素分為3個(gè)考察水平(見(jiàn)表1),進(jìn)行正交試驗(yàn)分析。

    表1 因素水平表Tab.1 Factor and level of orthogonal design

    1.4.2 驗(yàn)證試驗(yàn):按照正交試驗(yàn)結(jié)果優(yōu)選的配伍方案配制3份配伍溶液,分別測(cè)定配伍液中銀杏總黃酮、銀杏內(nèi)酯和環(huán)磷腺苷的含量(以未配伍時(shí)各注射液主成分的含量為100%計(jì)),每份配伍液重復(fù)檢測(cè)3次(n=3)。

    1.4.3 配伍液外觀觀察:取潔凈的20 mL具塞納氏比色管,加入15 mL用5%的葡萄糖注射液稀釋的配伍液,盡量避光,于0、1、4、6 h觀察其外觀變化,以未配伍的2種注射液作為參照。

    1.4.4 pH測(cè)定:取上述配伍液于0、1、4、6 h測(cè)定pH值,避光,每個(gè)樣本連測(cè)3次,取平均值。

    1.4.5 不溶性微粒:藥典規(guī)定100 mL以下的靜脈注射液含≥10 μm的微粒不得過(guò)6000粒,含≥25 μm的微粒不得過(guò)600粒)[7]。取配伍液及未配伍的舒血寧注射液、環(huán)磷腺苷葡胺注射液及5%的葡萄糖注射液于0、1、4、6 h按中國(guó)藥典微粒檢測(cè)法中的光阻法檢查微粒[8]。

    2 結(jié)果

    2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

    2.1.1 舒血寧中銀杏總黃酮與銀杏總內(nèi)酯:

    ① 銀杏總黃酮:槲皮素、山奈素及異鼠李素的線性方程分別為Y=812118X+2325.1(r=0.9995,n=5)、Y=415572X+3182.7(r=0.9997,n=5)、Y=115892X+2741.7(r=0.9998,n=5)。

    ② 銀杏內(nèi)酯:得到銀杏內(nèi)酯A、B、C的線性方程分別為Y=571576X+1427.2(r=0.9996,n=5)、Y=319513X+2683.4(r=0.9994,n=5)、Y=608337X+1683.3(r=0.9995,n=5)。

    以上結(jié)果表明,槲皮素、山奈素及異鼠李素在5~50 μg/ mL的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;銀杏內(nèi)酯A、B、C分別在2~20 μg、1~10 μg及1~10 μg的質(zhì)量范圍內(nèi)相關(guān)性良好。

    2.1.2 環(huán)磷腺苷葡胺注射液中主成分環(huán)磷腺苷:環(huán)磷腺苷的線性方程為Y=273415X+3157.2 (r=0.9996,n=5)。

    2.2 正交試驗(yàn)結(jié)果 正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2,直觀表見(jiàn)表3。結(jié)果表明影響各成分含量的因素主要是放置時(shí)間,其次是溫度或光照,溶媒的影響較小。有文獻(xiàn)報(bào)道,舒血寧注射液最好與5%葡萄糖溶液配伍[7],得出優(yōu)選的配伍使用方案為A2B1C1D,即在25 ℃下,以5%的葡萄糖注射液為溶媒(在1h內(nèi)滴注完畢,盡量避光,最終確定正交試驗(yàn)優(yōu)選方案為A2B1C1D1。

    表4方差分析結(jié)果顯示,對(duì)于舒血寧注射液中的槲皮素、山奈素而言,溫度(A)、光照(B)和放置時(shí)間(C)3個(gè)因素均對(duì)其含量有顯著性影響(P<0.05),而溶媒(D)對(duì)它們的含量無(wú)顯著性影響;溫度(A)、光照(B)、放置時(shí)間(C)和溶媒(D)對(duì)配伍液中的其他5種成分均具有顯著性影響(P<0.05)。

    表2 正交試驗(yàn)結(jié)果(n=3)Tab.2 Results of the orthogonal test(n=3)

    表3 直觀分析表Tab.3 Intuitive analysis table

    表4 方差分析表Tab.4 Variance analysis table

    2.3 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果 取舒血寧注射液與環(huán)磷腺苷葡胺注射液按正交試驗(yàn)優(yōu)選結(jié)果(A2B1C1D1),得到配伍液中各成分的含量(以未配伍時(shí)各注射液主成分的含量為100%計(jì))。結(jié)果表明,配伍方案重復(fù)性良好,配伍溶液質(zhì)量穩(wěn)定。見(jiàn)表5。

    表5 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=3)Tab.5 The test results (n=3)

    2.4 配伍液外觀觀察 配伍液(A2B1C1D1)于0、1、4、6 h的外觀變化與未配伍的2種注射液相比無(wú)明顯變化。

    2.5 pH測(cè)定 配伍液(A2B1C1D1)于0、1、4、6h測(cè)的pH值結(jié)果表明,配伍液的pH值在配伍后0 h有一定的變化,后趨于平穩(wěn),結(jié)果見(jiàn)表6。

    表6 配伍前后溶液pH值的變化Tab.

    2.6 不溶性微粒 2藥于0、1、4、6 h在5%的葡萄糖注射液中配伍后,隨著放置時(shí)間的延長(zhǎng),配伍液微粒數(shù)有較明顯的增加,但仍在《中國(guó)藥典》規(guī)定的范圍內(nèi)。見(jiàn)表7。

    表7 2藥配伍不同時(shí)刻的不溶性微粒數(shù)±s, n=3)Tab.7 Insoluble particles of compatibility solution at different ±s,n=3)

    3 討論

    3.1 本實(shí)驗(yàn)采用正交法優(yōu)選了舒血寧注射液與環(huán)磷腺苷葡胺注射液在臨床常用輸液中的配伍方案,得出的優(yōu)選方案為:取舒血寧注射液2 mL與環(huán)磷腺苷葡胺注射液1 mL溶解于25 mL的5%葡萄糖注射液中,于1 h內(nèi)滴注完畢,且應(yīng)注意盡量避光。 使用正交分析法優(yōu)選藥物的配伍方案可避免一般方法的盲目性,其試驗(yàn)點(diǎn)分布均勻,具有簡(jiǎn)單可靠的特點(diǎn)。配合直觀分析與方差分析,可以提供更加詳盡的數(shù)據(jù)支持。

    3.2 之前關(guān)于舒血寧注射液與環(huán)磷腺苷葡胺注射液配伍穩(wěn)定性的研究,對(duì)于配伍液主成分的考察僅僅為配伍液紫外光譜的變化,專屬性較差;本研究采用HPLC法考察了配伍液中7個(gè)主要成分在不同時(shí)間及不同條件下的變化情況,為臨床配伍方案提供了更為詳盡可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

    3.3 舒血寧注射液與環(huán)磷腺苷葡胺注射液均是臨床上用來(lái)治療心腦血管疾病的藥物,其稀釋液一方面應(yīng)考慮配伍后的穩(wěn)定性,其次還應(yīng)從臨床用藥方面靠, 盡量避免使用鹽類,否則會(huì)加重心臟負(fù)擔(dān)。

    [1] 于法忠,劉愛(ài)香.輸血寧注射液治療冠心病心絞痛療效觀察[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2004,13(4):480-481.

    [2] 何心,李雪峰,石春偉.舒血寧注射液與環(huán)磷腺苷葡胺注射液的配伍穩(wěn)定性考察[J].中國(guó)藥房,2008,19(5):354-356.

    [3] 張蓬華,肖淼生,張靜,等.舒血寧與五種注射液配伍后的穩(wěn)定性考察[J].中國(guó)藥師,2009,12(2):259-260.

    [4] 歐琴,張?zhí)J燕,錢一鑫,等.HPLC法測(cè)定舒血寧注射劑黃酮和內(nèi)酯的含量[J].貴州大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2010,27(5):34-37.

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    [7] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:二部[S].2010年版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:附錄:99-101.

    [8] 張蓬華,肖淼生,張靜,等.舒血寧與五種注射液配伍后的穩(wěn)定性考察[J].中國(guó)藥師,2009,12(2):259-260.

    (編校:王儼儼)

    Compatible stability of Shuxuening injection and meglumine adenosine cyclophosphate injection

    ZHANG Chen-huaΔ

    (Department of Pharmacy, The First People’s Hospital in Zhejiang Taizhou, Taizhou 318020, China)

    ObjectiveTo study the compatibility stability of Shuxuening injection and meglumine adenosine cyclophosphate injection.MethodsThe compatibility program of Shuxuening injection and meglumine adenosine cyclophosphate injection was optimized by orthogonal experimental design, with the main components total flavone of Ginkgo biloba (quercetin, kaempferide and isorhamnetin as control substance) and Ginkgo lactone (ginkgolide A, B and C as control substance) of Shuxuening injection, the principal components adenosine cyclophosphate (denosine cyclophosphate as control substance) of meglumine adenosine cyclophosphate injection as the main index to draw calibration curve, select temperature (A), illumination (B),storage time (C) and solvent (D) as factor, the change of insoluble particles and pH in solution was studied also.ResultsThe optimal compatibility conditions of orthogonal experimental design was A2B1C1D1(25 ℃, lucifugal, storage time of 1 h,5% glucose solution), ANOVA results showed that temperature (A), illumination (B) and storage time (C) have significant effects on quercetin and kaempferide contents in Shuxuening injection (P<0.05), however, solvent (D) has no significant effect on them.The temperature (A), illumination (B),storage time (C) and solvent (D) have significant effects on the other five substances (P<0.05).At 0, 1, 4, 6 h, the appearance and pH value of compatible solution (A2B1C1D1)were not significantly changed and the number of insoluble particles in accordance with the relevant provisions of the Chinese Pharmacopoeia with storage time increasing.ConclusionThe compatible stability of Shuxuening injection and meglumine adenosine cyclophosphate injection is good under certain conditions, and could use compatibility in clinical therapy.

    Shuxuening injection; meglumine adenosine cyclophosphate injection; compatibility stability; orthogonal experiment; optimize

    張晨華,男,通訊作者,大專,副主任藥師,研究方向:臨床藥學(xué)及醫(yī)院藥學(xué),E-mail: 3326764232@qq.com。

    R969.3

    A

    1005-1678(2015)09-0164-06

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