桂枝茯苓丸對子宮內膜異位癥患者血清MAPK、ERK和VEGF水平影響研究

韓晶 ，吳文英

(1.常州工學院校醫(yī)院 婦產科，江蘇 常州 213002；2.常州市中醫(yī)院 婦產科，江蘇 常州 213003)

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桂枝茯苓丸對子宮內膜異位癥患者血清MAPK、ERK和VEGF水平影響研究

韓晶1Δ，吳文英2

(1.常州工學院校醫(yī)院 婦產科，江蘇 常州 213002；2.常州市中醫(yī)院 婦產科，江蘇 常州 213003)

目的 探討桂枝茯苓丸對子宮內膜異位癥患者血清絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)、細胞外調節(jié)蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases，ERK)和血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor ，VEGF)水平影響。方法 選取收治的子宮內膜異位癥患者60例，根據隨機對照表分為實驗組和對照組，其中對照組30例，予常規(guī)醋酸戈舍瑞林緩釋植入劑皮下注射；實驗組30例，予桂枝茯苓丸口服治療。治療結束后，對比各組患者臨床療效、血清MAPK、ERK-5、ERK及VEGF、T-鈣黏蛋白(T-cadherin，T-cad)、宮頸上皮鈣粘蛋白(vagina epithelial cadherin，VE-cad)水平變化。結果 治療結束后，與對照組比較，實驗組患者臨床總有效率較高(P<0.05)；血清MAPK、ERK-5、ERK水平較低(P<0.05)；血清T-cad及VE-cad水平較低(P<0.05)；血清VEGF水平較低(P<0.05)。結論 桂枝茯苓丸可能通過抑制MAPK及ERK蛋白活性，阻斷細胞間信號傳導通路，從而抑制子宮內膜異常增殖及細胞分裂周期的進行，進而有效抑制腫瘤的生長與分化。

桂枝茯苓丸；子宮內膜異位癥；MAPK；ERK；VEGF

子宮內膜異位癥(endometriosis，EMT)是指具有生長功能的子宮內膜細胞種植在宮腔以外的位置而形成的一種女性常見婦科疾病[1]，分為在位性內膜及異位性內膜增殖。臨床表現為痛經，呈繼發(fā)性并進行性加劇，月經異常，不孕和性交疼痛，盆腔包塊等[2]。治療子宮內膜異位癥主要以保守手術治療和藥物治療為主[3-4]，目前對EMS的治療有假孕療法、假絕經療法，藥物有達那唑、孕三烯酮、孕激素等，其中促性腺激素釋放激素激動劑的問世開啟了EMT治療的新里程[5]，但由于大量激素的應用，導致子宮產生類似絕經婦女的萎縮等副作用，內膜異位較重或有腫瘤增生時，最終需要病灶部位的外科切除治療。桂枝茯苓丸口服等中醫(yī)療法，可調節(jié)內分泌及改善局部組織血流變等作用，從而抑制內膜細胞異常脫落及細胞增殖，改善卵巢及子宮激素分泌水平。本文就桂枝茯苓丸對子宮內膜異位癥患者血清絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)、細胞外調節(jié)蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases，ERK)和血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor ，VEGF)水平影響，分析其治療機制為臨床推廣提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1月至2014年1月于常州工學院校醫(yī)院婦產科以子宮內膜異位癥為診斷住院的女性患者60例，年齡28～48歲，平均年齡(35.25±4.92)歲，以隨機數字表法分為實驗組30例，年齡28～47歲，平均年齡(35.24±4.85)歲；對照組30例，年齡29～47歲，平均年齡(34.53±4.74)歲。2組患者的一般資料相仿，差異無統(tǒng)計學意義。

納入標準：符合中華醫(yī)學會婦科腫瘤分會第14屆全國婦科腫瘤學會會議[6]中子宮內膜異位癥的診斷標準，具備以下臨床特點：月經周期不規(guī)則，經量異常，可有崩漏；痛經；膀胱刺激征；子宮內膜異位至膀胱者，出現有周期性尿頻、尿痛、血尿；周期性局部腫塊及疼痛；宮腔鏡活檢后病理證實子宮內膜異位癥、子宮腺肌病患者?；颊咦栽竻⑴c實驗，并簽署知情同意書。方案獲得本院倫理委員會批準并全過程跟蹤。

排除標準：藥物過敏史，接受免疫抑制劑治療的患者，近3個月應用激素類藥物，不規(guī)則陰道出血病史，盆腔炎；嚴重心、肝、腎等多臟器功能障礙或衰竭；惡性腫瘤、癲癇等神經系統(tǒng)疾病。

1.2 方法

1.2.1 試驗方法：對照組參照臨床用藥指南，予常規(guī)醋酸戈舍瑞林緩釋植入劑(英國AstraZeneca UK Limited；H20120063；諾雷得；10.8 mg/支)10.8 mg，1次/月皮下注射，1個月為1療程，治療2個療程。實驗組30例，予桂枝茯苓丸(山西雙人藥業(yè)有限責任公司，國藥準字Z14021484；6 g/丸)，12 g/天，分2次口服，1個月為1療程，治療2個療程。

1.2.2 觀察指標及檢測方法

療效評定標準[7]：近期療效評定標準如下，治療結束后，臨床癥狀和體征完全消失，患者盆腔包塊及局部體征為痊愈；臨床癥狀和體征明顯改善，盆腔包塊縮小超過1/2為顯效；臨床癥狀和體征減輕，盆腔包塊縮小1/3以上為有效；臨床癥狀和體征無改善或加重，患者生活無法自理為無效。記錄并分析總有效率，總有效率=(痊愈例數+顯效例數+有效例數)/本組患者例數×100%。

血清MAPK、ERK-5、ERK、VEGF、T-鈣黏蛋白(T-cadherin，T-cad)及宮頸上皮鈣黏蛋白(vagina epithelial cadherin，VE-cad)水平檢測：于患者試驗前后采取空腹外周靜脈血5 mL，置于無菌無抗凝管內，靜置30 min，3000 r/min離心15 min，取上清液，收集其血清標本于-70 ℃冰柜內冷凍保存。實驗時，取出并進行解凍，實施酶聯免疫吸附法(ELISA)法檢測血清MAPK、ERK-5、ERK、VEGF、T-cad及VE-cad水平。檢測波長430 nm，檢測試劑盒購于武漢博士德生物制劑有限公司，全自動酶標儀，北京博歐實德生物技術有限公司。

2 結果

2.1 2組患者療效比較 治療后與對照組相比，實驗組臨床總有效率較高(χ2=4.04，P<0.05)。見表1。

表1 2組患者療效比較[n(%)]Tab.1 Comparison of clinical effect between two groups[n(%)]

*P<0.05，與對照組比較，compared with control group

2.2 血清MAPK、ERK-5及ERK水平比較 治療前2組患者血清MAPK、ERK-5及ERK水平比較差異無統(tǒng)計學意義；治療后2組血清MAPK、ERK-5及ERK水平下降(P<0.05)，與對照組相比，實驗組血清MAPK、ERK-5及ERK水平較低(P<0.05)。見表2。

組別 例數時間MAPK(μg/mL)ERK-5(μg/mL)ERK(μg/mL)對照組30治療前6.91±1.1915.51±2.192.22±0.39治療后5.77±1.69*13.34±2.16*1.59±0.27*實驗組30治療前7.11±1.1416.21±2.142.21±0.26治療后4.05±0.75*#10.81±3.29*#0.99±0.17*#

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.3 血清T-cad及VE-cad及VEGF水平比較 治療前2組患者血清T-cad、VE-cad及VEGF水平比較差異無統(tǒng)計學意義；治療后2組血清T-cad、VE-cad及VEGF水平下降(P<0.05)，與對照組相比，實驗組血清T-cad、VE-cad及VEGF水平較低(P<0.05)。見表3。

表3 血清T-cad及VE-cad及VEGF水平Tab.3 Comparison of T-cad，VE-cad and VEGF in serum between two ±s)

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group post-treatment

3 討論

子宮內膜異位癥是育齡期婦女常見的婦科疾病，也是發(fā)生盆腔疼痛和痛經的青少年最常見的病因，同時因其病因尚不完全明確[8]。其主要臨床癥狀以漸進性經痛進行性加重、不孕、月經異常等表現，甚者可見腫物增生、崩漏等，嚴重影響患者生活治療。研究表明桂枝茯苓丸內服及灌腸治療子宮內膜異位癥，能夠加強了破瘀散結之力，且祛邪與扶正兼顧，多途徑給藥可提高療效[9]。抑制絲裂原活化蛋白及細胞外信號調節(jié)激酶的分泌與合成，降低其在異位內膜的表達及含量，從而顯著抑制子宮內膜異位癥的血管生成，阻止疾病發(fā)生與進展，且副作用較小，對子宮的器質性及功能性影響較小，往往效果良好。本研究顯示，與對照組比較，實驗組患者臨床總有效率較高(P<0.05)，證實桂枝茯苓丸改善子宮內膜異位癥患者臨床療效，明顯緩解疾病癥狀，提高患者生活質量。

絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶的一個家族，可將細胞外刺激傳遞至細胞內，對生長因子和不同形式的壓力作出應答，是真核細胞中主要的激 酶傳導通路[10]。MAPK磷酸化激活成為細胞外信號調節(jié)激酶(ERK)，進而轉入細胞核經磷酸化調控特定基因的表達[11]，誘導炎癥細胞因子高表達，參與細胞的生長發(fā)育、分裂、增殖、分化以及調亡，并參與細胞惡性轉化、成纖維細胞VEGF基因轉錄過程。MAPK對乳腺癌患者癌細胞細胞的生長、抗凋亡以及介導細胞耐藥性具有關鍵作用[12]。研究顯示，與對照組相比實驗組血清MAPK、ERK-5水平較低、ERK(P<0.05)血清T-cad及VE-cad水平較低(P<0.05)，提示桂枝茯苓丸可抑制細胞分裂活化蛋白活性并抑制細胞外信號調節(jié)激酶的合成與分泌，調節(jié)細胞移動性以及蛋白分泌，改善細胞活性和免疫反應，逆流入腹腔的子宮內膜中，預防癌癥細胞在盆腹腔腹膜及器官內種植、生長、粘附，從而阻礙癌細胞生長增殖，促進其凋亡。

血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是作用最強的促血管生成因子之一，是關系腫瘤生長的重要細胞因子[13]，為腫瘤生長提供養(yǎng)分以及排除代謝產物，故促使血管生長因子標志著腫瘤的形成與發(fā)展。研究表明腫瘤患者血管內皮生長因子能夠促進組織增殖分化，故臨床表現為血清VEGF水平升高，且在各種癌癥中得到證實[14-16]。通過應用桂枝茯苓丸干預后，發(fā)現實驗組用藥能夠抑制生長因子與細胞表面受體結合，直接阻斷其變形、遷移、脫落、增殖及分化能力，并增加微血管通透性，提高局部對藥物敏感性，提高療效。本研究顯示，與對照組相比實驗組血清VEGF水平較低(P<0.05)，證實桂枝茯苓丸能夠明顯抑制子宮內膜異位癥的細胞增殖與分化，降低血清VEGF水平，抑制癌細胞生長。

本研究通過對60例子宮內膜異位癥患者進行研究，證實了桂枝茯苓丸能夠通過抑制MEK及ERK蛋白活性，阻斷細胞因子與表面受體結合，從而抑制子宮內膜細胞的增殖與分化能力，阻斷細胞間信號傳導通路，抑制子宮內膜異常增殖及細胞分裂的進行，并能有效抑制腫瘤的生長與分化。在下一步研究中，將進行藥理學方面研究，對本實驗過程中出現現象做進一步研究。

[1] 傅艷姝，吳俊，俎德學. 不孕癥患者子宮內膜異位癥合并子宮內膜息肉相關研究[J].浙江中西醫(yī)結合雜志，2015，25(5)： 487-488.

[2] 李祥云. 補腎祛瘀法治療子宮內膜異位癥 [J].中國臨床醫(yī)生，2003，31(8)： 50-52.

[3] 王榮幸，王香桂. 子宮內膜異位癥的藥物治療進展[J].中華實用醫(yī)藥雜志，2009(9)：1112-1114.

[4] 韓曉佳，孔憲超，陳沖，等. 子宮內膜異位癥的臨床診斷及治療新進展[J].現代生物醫(yī)學進展，2013，13(2)：388-391.

[5] 嚴鳳英，王亞叢，官穎. 子宮內膜異位癥手術治療后加用 GnRH-a 意外受孕 1 例[J].實用婦產科雜志，2014，30(10)： 776-777.

[6] 中華醫(yī)學會婦產科學分會子宮內膜異位癥協作組.子宮內膜異位癥的診治指南[J].中華婦產科雜志，2015，50(3)：161-167.

[7] 韓新，馮淑靜，吳富菊，等. 子宮內膜異位癥60例臨床分析[J].中國婦幼保健，2008，23(36)：5241.

[8] 宋作林. 子宮內膜異位癥的研究與臨床指南[M].四川出版集團，2005.

[9] 徐繼輝. 桂枝茯苓丸加味治療子宮內膜異位癥50例[J].河南中醫(yī)，2008，28(7)：21-22.

[10] 陳巖，朱雨嵐. ERK5 激酶及其與神經系統(tǒng)發(fā)生發(fā)展及疾病的關系[J].卒中與神經疾病，2014，2(21)： 22.

[11] 王輝. ERK/ERK在乳腺增生和癌組織中的表達[D].沈陽：中國醫(yī)科大學，2002.

[12] 趙文輝，張清媛，婁長杰. EGFR/CerbB-2/MAPK介導乳腺癌三苯氧胺耐藥細胞的生長[J].實用腫瘤學雜志，2005，19(2)：143-146.

[13] 姚依勍，朱惠蓉，張怡，等. 血管內皮生長因子在常見消化系統(tǒng)惡性腫瘤中的表達及中醫(yī)藥治療研究進展[J].河北中醫(yī)，2014，36(6)： 943-947.

[14] 朱小生，馬倩，操樂杰. 肺癌患者血管內皮生長因子和內皮抑素水平變化及意義[J].實用臨床醫(yī)藥雜志，2008(6)：1-4.

[15] 徐衛(wèi)國，王剛，鄒玉環(huán)，等. 血管內皮生長因子在乳腺浸潤性導管癌中的表達及意義[J].中國綜合臨床，2008，23(4)：338-340.

[16] 胡瑛，李寶蘭，韓毅，等. 非小細胞肺癌患者圍手術期血清VEGF水平變化與臨床特征的關系[J].腫瘤防治研究，2010，37(5)：535-539.

(編校：譚玲)

Effect of Guizhi Fuling pills on levels of serum MAPK, ERK and VEGF in patients with endometriosis

HAN Jing1Δ, WU Wen-ying2

(1.Department of Obstetrics and Gynecology, Changzhou Engineering College Hospital, Changzhou 213002, China; 2.Department of Obstetrics and Gynecology, Changzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine, Changzhou 213003, China)

ObjectiveTo investigate the effect of Guizhi Fuling pills on levels of serum MAPK, ERK and VEGF in patients with endometriosis.Methods60 patients with endometriosis were selected and according to the random control table were divided into the experiment group and the control group, 30 cases each. The control group were treated with conventional acetate goserelin sustained-release implantation agent subcutaneous injection, the experiment group were treated by Guizhi Fuling pill treatment. After treatment, the clinical efficacy, serum MAPK, ERK-5, VEGF, ERK, T-cad and VE-cad levels of the patients were compared.ResultsCompared with the control group, the clinical total effective rate was higher in the experiment group (P<0.05); MAPK and ERK-5 levels in serum were lower (P< 0.05), ERK level in serum was lower(P<0.05); T-cad and VE-cad levels in serum were lower(P<0.05); VEGF level in serum was lower(P<0.05). ConclusionGuizhi Fuling pill can block the cell signal transduction pathway through inhibition of MEK and ERK activity, thereby inhibit abnormal endometrial proliferation and cell division cycle, can effectively inhibit the proliferation and differentiation of the tumor.

Guizhi Fuling pills; endometriosis; MAPK; ERK; VEGF

韓晶，通信作者，女，本科，主治醫(yī)師，研究方向：婦產科，E-mail：hanjingyt@163.com。

R711

A

1005-1678(2015)12-0125-03