端粒酶、人類表皮生長因子受體2和c-myc基因在宮頸病變中的表達及與高危型人乳頭瘤病毒感染的相關性

齊麗敏，王雪，孫波，張學玲，馮曄，公春蘭，王麗君，張清濤

(1.滄州醫(yī)學高等專科學校助產(chǎn)教研室，滄州 061001 2.河北滄州市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科)

·論著·

端粒酶、人類表皮生長因子受體2和c-myc基因在宮頸病變中的表達及與高危型人乳頭瘤病毒感染的相關性

齊麗敏1，王雪1，孫波2，張學玲2，馮曄1，公春蘭1，王麗君1，張清濤1

(1.滄州醫(yī)學高等專科學校助產(chǎn)教研室，滄州 061001 2.河北滄州市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科)

目的 研究端粒酶基因(hTERC)、人類表皮生長因子受體2(HER-2)基因和c-myc基因在不同程度宮頸病變的表達情況及與高危型人乳頭瘤病毒(HPV)感染的相關性。方法 選取236例就診或篩查患者，行TCT、HPV、hTERC、HER-2和c-myc基因檢測。對任一陽性患者行陰道鏡下多點活檢，進行病理檢測。結(jié)果 ①236例中有108例進行宮頸活檢，在正常/慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ-Ⅲ及浸潤性子宮頸癌中hTERC陽性表達率分別為16.0%、39.5%、64.5%、100.0%；HER-2陽性表達率分別為4.0%、20.9%、45.2%、100.0%；c-myc陽性表達率分別為8.0%、30.2%、54.8%、100.0%；HPV陽性率分別為40.0%、67.4%、80.6%、100.0%。②不同病理結(jié)果之間hTERC、HER-2和c-myc陽性率比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，隨著病理結(jié)果的嚴重程度，hTERC、HER-2和c-myc的陽性率逐漸增加(P<0.01)。③隨著宮頸病變程度的加深，HPV感染者中hTERC、HER-2和c-myc基因的陽性擴增率也增高(P<0.05)。結(jié)論 hTERC、HER-2、c-myc基因的陽性表達率與宮頸病變程度、高危型HPV感染密切相關，在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中可能起著重要作用。

宮頸腫瘤; 人乳頭瘤病毒; 基因,myc; 基因,erbB-2

宮頸癌是婦科常見的惡性腫瘤，它的發(fā)生發(fā)展雖然已被證實與高危型人乳頭瘤病毒(HPV)持續(xù)感染有關，但是宮頸癌發(fā)病率比HPV在人群中的感染率要低得多，意味著除了HPV感染外還有其他的機制在宮頸癌發(fā)生與進展中發(fā)揮著作用。隨著對分子水平上研究的不斷深入，越來越多的報道發(fā)現(xiàn)宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展可能與一些基因異常相關。本研究采用熒光原位雜交(FISH)技術檢測人端粒酶基因(hTERC)、HER-2基因和c-myc基因在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的異常擴增情況及與HPV感染相關性進行初步研究。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取滄州市人民醫(yī)院2013年9月至2014年5月婦科門診就診及機會性篩查患者236例，年齡25～65歲,平均年齡(43.3±6.5)歲。排除已經(jīng)陰道鏡活檢確診的宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)者和已治療過的患者。對所有患者行新柏氏液基細胞學(TCT)、HPV、hTERC、HER-2和c-myc基因檢測。對任一陽性患者行陰道鏡下多點活檢，進行病理檢測。其中正常/慢性宮頸炎25例，CINⅠ 43例，CINⅡ 18例，CINⅢ 13例，宮頸癌9例，所有患者均無陰道鏡活檢史和治療。

1.2 方法

1.2.1 TCT檢測 使用專用取樣刷采集宮頸脫落細胞，將可以分離的采集器刷頭置于細胞保存液之中，4 ℃冰箱保存，采用新柏式2000全自動制片機進行程序化處理。按照2001年國際癌癥協(xié)會(NCI)推薦的TBS分級標準進行閱片。

1.2.2 HPV檢測 使用專用宮頸脫落細胞采集器在宮頸外口順時針旋轉(zhuǎn)3～5圈，將刷子置入3 mL宮頸細胞保存液中，放入4 ℃冰箱保存。檢測23種HPV基因型，包括18種高危型16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、83和5種低危型6、11、42、43、81。所有操作過程和結(jié)果判讀嚴格按照亞能生物技術有限公司提供試劑盒說明進行。

1.2.3 FISH檢測 本實驗使用的探針購自廣州安必平科技有限公司。嚴格按照試劑盒說明進行操作。用OLYMPUS B×51 熒光顯微鏡在DAPI/FITC/TRITC三色濾光鏡激發(fā)下觀察脫落細胞熒光雜交信號，用Video2.0 Test公司提供的FISH分析軟件進行圖像分析。陽性判斷標準: 單個間期細胞核中綠色信號≥2個，紅色信號>2個，則表示hTERC、HER-2基因有擴增，因無對照探針，單個間期細胞核中紅色信號>2個則表示c-myc基因有擴增。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS18.0 軟件處理數(shù)據(jù)，組間率的比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同病理結(jié)果中hTERC、HER-2和c-myc表達情況 hTERC、HER-2和c-myc陽性率在不同病理結(jié)果之間比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。隨著病理結(jié)果的嚴重程度，hTERC、HER-2和c-myc的擴增陽性率逐漸增加(P<0.01)，見表1。

表1 不同病理結(jié)果中FISH檢測hTERC、HER-2和c-myc的陽性表達[例(%)]

2.2 高危型HPV感染與hTERC、HER-2和c-myc基因擴增的相關性 108例不同病理結(jié)果中HPV感染率分別為40.0%、67.4%、80.6%和100.0%，隨著病理分級嚴重程度HPV感染率逐漸增高(P<0.05)，見表2。在73例HPV陽性患者中hTERC、HER-2和c-myc基因異常擴增在HPV感染組與非感染組間比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，可見，三種基因的擴增主要發(fā)生在HPV感染陽性患者中，見表3。

3 討論

3.1 hTERC、HER-2和c-myc基因在不同宮頸病變中的異常擴增情況 國外的研究發(fā)現(xiàn)，人類hTERC基因的擴增可阻止細胞凋亡，因而可導致腫瘤產(chǎn)生[1-2]。隨著對hTERC基因在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中的深入了解，hTERC可作為宮頸癌篩查的重要指標已經(jīng)得到了大量的實驗驗證[3-4]。本研究結(jié)果中，hTERC基因在CIN組和宮頸癌組擴增明顯高于慢性宮頸炎組，且CIN各組與宮頸癌組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，提示hTERC基因異常擴增與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有著重要的聯(lián)系，結(jié)果與Liu等[5]報道一致。

表2 不同病理結(jié)果HPV感染情況及HPV陽性與hTERC、HER-2和c-myc基因擴增情況[例(%)]

表3 HPV感染陽性或陰性時hTERC、HER-2和c-myc基因擴增的情況

在正常情況下，HER-2 基因處于非激活狀態(tài)。當機體受某些因素影響后，其即活化成為具有轉(zhuǎn)化活性的細胞癌基因，過度表達則可導致細胞過度增殖和表型向惡性轉(zhuǎn)化。HER-2的激活、擴增及其表達產(chǎn)物在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中起著極其重要的作用[6]；HER-2被確認為一種新的腫瘤標記物在宮頸癌的研究中報道不多。從本實驗研究結(jié)果來看，HER-2在宮頸癌中的陽性表達比慢性炎癥和CIN中明顯增高(P<0.05)，提示HER-2基因的表達在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要的作用，研究結(jié)果與有關研究[7-8]的報道一致。

c-myc是一種轉(zhuǎn)錄調(diào)控基因，是人類腫瘤中最常見的高表達的癌基因之一，在細胞的增殖、分化、基因的不穩(wěn)定性及細胞的惡性轉(zhuǎn)化中起著重要的調(diào)節(jié)作用[9]。自發(fā)現(xiàn)以來備受人們重視，然而在宮頸癌的研究報道中較少見，且對c-myc用來作為宮頸癌篩查還存在爭議[10]。本研究結(jié)果顯示，c-myc基因的陽性表達率隨病理學分級嚴重程度而增高(P<0.05)，提示c-myc可能參與了宮頸癌的發(fā)生及發(fā)展，與Sokolova[11]報道一致。

3.2 hTERC、HER-2和c-myc基因異常擴增與HPV感染的相關性 端粒酶的激活是高危型HPV感染宮頸組織后CIN向?qū)m頸浸潤癌發(fā)展過程中比較關鍵的步驟之一，HPV E6蛋白上調(diào)內(nèi)源性人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶水平而激活端粒酶是限速步驟。而hTERT是原癌基因c-myc的下游靶基因，c-myc基因可直接結(jié)合到多種細胞hTERT基因的核心啟動子5'端的E-box上，使細胞獲得無限增殖能力，故認為高危型HPV感染可能和c-myc起到協(xié)同致癌作用。HER-2高表達是通過HPV E6調(diào)節(jié)的，推測HER-2基因轉(zhuǎn)錄或翻譯后的調(diào)控可能在宮頸癌發(fā)生中起一定的作用。本研究顯示，hTERC、HER-2及c-myc擴增率在HPV陽性者中顯著高于HPV陰性者，hTERC、HER-2及c-myc擴增與HPV感染相關，與以往研究結(jié)果一致[12-13]。

綜上所述，hTERC、HER-2及c-myc基因的異常表達可能參與了宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展過程，改變了細胞內(nèi)的基因調(diào)控作用，從而使細胞更易于向惡性表型轉(zhuǎn)化，促進了宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展。

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The correlation between the hTERC,HER-2 ,c-myc gene expression in cervical lesion and HPV infection

Qi Limin*,Wang Xue,Sun Bo,Zhang Xueling,Feng Ye,Gong Chunlan,Wang Lijun,Zhang Qingtao

(*Staff room of Midwifery,Cangzhou Medical College Cangzhou,061001,China)

Objective To investigate the expression of hTERC, HER-2 and c-myc gene in the different cervical lesions and analyze the correaltion between the hTERC,HER-2 and c-myc gene expression and HPV infection.Methods A total of 236 outpatients were randomly selected from September 2013 to May 2014 at Gynecology in people hospital of Cangzhou city.The detection of TCT,HPV,hTERC,HER-2 and c-myc were conducted,and every patient with positive result was underwent colposcopic examination and histological evaluation.Results ①108 cases according to the cervical biopsy， the positive rate of hTERC were 16.0%,39.5%,64.5% and 100% respectively,the positive rates of HER-2 were 4.0%,20.9%,45.2%,100.0%，respectively,and the positive rates of c-myc gene test were 8.00%,30.2%,54.8%,100.0%，respectively ,and high risk HPV infection rate were 40.0%,67.4%,80.6%,100.0% respectively in the CINⅠ,CINⅡ-Ⅲ and cervical cancer in normal/chronic inflammation.②The positive rate of hTERC,HER-2 and c-myc were statistically differences among the different pathologic results (P<0.05),With the increase of pathological grade，the positive rates of hTERC,HER-2 and c-myc were also increased(P<0.01).③With the deepening of cervical lesions,the positive rate of hTERC,HER-2 and c-myc was also increased in the HPV-infected persons(P<0.05).Conclusion The positive expression rate of hTERC,HER-2 and c-myc gene are closely correlated with severity of cervical lesions and high-risk HPV infection,which may play an important role in the development of cervical cancer.

Uterine cervical neoplasms; Human papillomavirus; Genes,myc ; Genes,erbB-2

滄州市科學技術局計劃項目(141302003)

齊麗敏，主治醫(yī)師，講師，Email:mymyqiqi@163.com

R737.33

A

10.3969/J.issn.1672-6790.2015.02.017

2014-11-12)