種植Bt水稻后的土壤對赤子愛勝蚓生長發(fā)育及酶活性的影響

劉 凱， 楊亞軍， 田俊策， 魯艷輝， 徐紅星， 鄭許松， 呂仲賢*

1浙江省農業(yè)科學院植物保護與微生物研究所，浙江 杭州 310021；2浙江師范大學化學與生命科學學院，浙江 金華 321004

種植Bt水稻后的土壤對赤子愛勝蚓生長發(fā)育及酶活性的影響

劉 凱1,2， 楊亞軍1， 田俊策1， 魯艷輝1， 徐紅星1， 鄭許松1， 呂仲賢1,2*

1浙江省農業(yè)科學院植物保護與微生物研究所，浙江 杭州 310021；2浙江師范大學化學與生命科學學院，浙江 金華 321004

【背景】轉基因作物種植的安全問題一直備受關注。關于Bt蛋白對地下非靶標生物影響的研究是轉基因作物安全評價的重要內容?！痉椒ā吭谵DBt基因水稻收割后的稻田里分別種植豌豆、紫云英和油菜作為后茬作物。分別于2013年1、3和6月3次采集不同后茬作物田中的土壤作為材料，于室內飼養(yǎng)赤子愛勝蚓，4周和7周后，測定蚯蚓的生長發(fā)育指標、存活率以及體內酶活性的變化情況。此外，還測定了不同深度土壤中Bt蛋白的含量以及用Bt蛋白直接飼喂的赤子愛勝蚓的存活率。【結果】與種植過非轉基因水稻MH63的土壤相比，分別種植過含cry2A和cry1C基因水稻后的土壤對赤子愛勝蚓的生長發(fā)育、存活率及體內酶活性無顯著影響。1月份和3月份轉cry2A基因水稻田以及1月份轉cry1C基因水稻田采集的表層土樣中的Bt蛋白含量顯著高于地下10 cm和地下20 cm土壤中的含量，地下2層土樣中的Cry2A蛋白含量之間無差異。3月份轉cry1C基因水稻田以及6月份轉cry2A和轉cry1C基因水稻田的土壤中Bt蛋白的含量均不受土壤深度的影響。種植的后茬作物對土壤中的Bt蛋白無顯著消解作用。室內模擬土壤最高Bt蛋白濃度的條件下，Cry2A蛋白處理的蚯蚓存活率為96.7%，Cry1C蛋白處理的蚯蚓存活率為95.0%，兩者與對照相比無顯著差異?！窘Y論與意義】轉cry2A和cry1C基因Bt水稻的種植對蚯蚓的生長發(fā)育和體內酶活性無顯著影響。本研究為轉基因水稻的安全評價提供了一定的依據。

轉Bt基因水稻； 后茬作物； 土壤Bt蛋白含量； 赤子愛勝蚓； 生長率； 死亡率； 酶活性

全球轉基因作物的種植面積已達1.75億hm2(James,2013)，為降低農田系統(tǒng)中化學農藥投入、增加農民收益以及保護自然環(huán)境做出了貢獻(Gómezetal.,2008)。轉基因作物的種植對非靶標生物的影響一直是人們關注的焦點(Lundgrenetal.,2009; Villiers & Hiisington,2011)。目前商業(yè)化種植的轉基因作物中主要的殺蟲蛋白基因來源于蘇云金芽孢桿菌(Bacillusthuringiensis,Bt)。轉Bt基因作物種植過程中產生的Bt蛋白能通過根系分泌(郭永燦等,1997； 王建武和馮遠嬌,2005a； Saxena & Stotzky,2000; Saxenaetal.,1999)、花粉飄落(Saxenaetal.,2002)、殘茬分解或秸稈還田(王建武等,2005b； 邢珍娟等,2008)以及土壤動物活動(袁一楊和戈峰, 2010)等方式進入到土壤系統(tǒng)，Bt蛋白能快速地吸附于土壤活性顆粒(土壤粘土礦物、腐質酸以及有機礦物聚合體等)的表面，與之緊密結合以避免被生物降解，并能保持至少8個月甚至4年的殺蟲活性(Crecchio & Stotzky,2001; Icoz & Stotzlcy,2008; Tapp & Stotzky,1995; Vaufleuryetal.,2007; Zwahlenetal.,2003)。

土壤中聚集的Bt蛋白是否會被后茬作物所吸收，從而隨同食物進入人體，也是人們關心的問題。而后茬作物的種植是否會加速土壤中Bt蛋白的降解還仍未知。

蚯蚓是土壤中常見的雜食性環(huán)節(jié)動物，在土壤生態(tài)系統(tǒng)中占有重要地位，對土壤物理性狀改良和植物營養(yǎng)循環(huán)具有重要作用(Cortez & Bouche,2001)。由于蚯蚓直接暴露于土壤的污染物中，對多種污染物較敏感，因此常被作為指示生物，成為土壤污染生態(tài)毒理診斷的重要指標，被廣泛應用于土壤生態(tài)毒性的研究(劉廷鳳等,2009)。蚯蚓的存活率和生長發(fā)育是Bt作物對蚯蚓影響研究中的主要生態(tài)指標(張艷艷等,2012)。目前，關于Bt作物對蚯蚓體內酶的影響開展了很多研究，主要包括過氧化氫酶、超氧化物歧化酶、堿性磷酸酶、谷胱甘肽S-轉移酶、乙酰膽堿酯酶和纖維素酶等(舒迎花等,2011; 肖能文等,2005; Liuetal.,2009)。

本研究在室內條件下，用種植過Bt水稻的土壤飼養(yǎng)赤子愛勝蚓，觀察赤子愛勝蚓的生長發(fā)育和存活情況，同時測定其體內總蛋白的含量、乙酰膽堿酯酶和谷胱甘肽S-轉移酶的活性，旨在探究轉Bt基因水稻的種植是否會對蚯蚓的生長發(fā)育及體內酶的活性產生影響；并測定了種植不同后茬作物后，土壤中的Bt蛋白含量，試圖探究后茬作物的種植是否會影響土壤中殘留Bt蛋白的含量；另外，在大于土壤中測得的Bt蛋白含量的濃度條件下(Cry2A蛋白的濃度1.5 μg·mL-1，Cry1C蛋白濃度80 ng·mL-1)，于室內飼養(yǎng)赤子愛勝蚓，觀察此濃度對蚯蚓存活率的影響，旨在驗證土壤中的Bt蛋白是否會影響蚯蚓的存活。這些研究結果可為轉Bt基因水稻的安全評價提供有力的理論依據。

1 材料與方法

1.1 供試材料

水稻：轉Bt基因水稻品種T2A-1和T1C-19，分別表達cry2A和cry1C基因；非轉基因對照品種明恢63(MH63)，親本(秈稻)。3種水稻種子均由華中農業(yè)大學提供。

轉基因試驗田：浙江金華石門農場(N：29°01′16.7″, E：119°37′17.7″，海拔106 m)，試驗田東西長71.30 m，南北寬26.5 m，面積0.19 hm2。試驗田平分為4大區(qū)，每個大區(qū)再分為9個小區(qū)，共36個小區(qū)，小區(qū)之間間隔0.5 m，大區(qū)之間間隔1 m(圖1)。每個小區(qū)長11 m，寬3.5 m，面積38.5 m2。行距25 cm，株距15 cm，每個小區(qū)種15行73排共1095叢水稻。水稻5月底育秧，6月底移栽，各個小區(qū)均正常水肥管理，10月中旬收割后燒毀。11月初分別種植3種后茬作物:豌豆PisumsativumL.、油菜BrassicacampestrisL.和紫云英AstragalussinicusL.。

土壤：供試土壤取自轉基因試驗田。分別于2013年1月、3月和6月采集土樣。每塊稻田分3點采集，按照20 cm×20 cm的規(guī)格采集土壤樣品，裝入自封袋中帶回實驗室用于飼養(yǎng)蚯蚓。以相同標準分別采集土壤表層、地下10 cm及20 cm深處的土壤，分別裝入自封袋，帶回實驗室于5 ℃保存，待測其中Bt蛋白的含量。

圖1 轉基因田示意圖Fig.1 Experimental design of this transgenic field study 1： MH63； 2： T1C-19； 3： T2A-1； A： 豌豆 Pisum sativum； B： 油菜 Brassica campestris； C： 紫云英 Astragalus sinicus； D： 空白 Blank。

蚯蚓：試驗所用的赤子愛勝蚓由浙江省農業(yè)科學院農藥所提供。試驗時選擇2月齡以上、體重300～600 mg、環(huán)帶明顯、大小一致的健康成蚯蚓，試驗前，室溫下清腸2 h。

Cry1C和Cry2A Bt蛋白：購于武漢科諾生物科技股份有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 土壤中Bt蛋白含量的測定 采用Envirologix公司ELISA Cry1C和Cry2A蛋白定量檢測試劑盒檢測,每個處理重復5次。根據標準曲線計算Bt蛋白的含量，用每克干土中所含的 Bt蛋白含量(ng·g-1)表示。

1.2.2 Bt蛋白對赤子愛勝蚓存活率的影響 根據土壤中測定的Bt蛋白(Cry1C蛋白和Cry2A蛋白)含量，設定Cry1C蛋白濃度80 ng·mL-1和Cry2A蛋白濃度1.5 μg·mL-1。試驗采用濾紙法(王彥華等,2010)，在直徑9 cm的培養(yǎng)皿底部墊入直徑為11 cm的單層濾紙(濾紙包住培養(yǎng)皿邊緣)。將2 mL配置好的Bt蛋白溶液滴加到濾紙上，同時設置空白對照組。每個培養(yǎng)皿中加入6條已清腸的蚯蚓，用保鮮膜封口，并用解剖針在保鮮膜扎孔以保持透氣性，試驗于人工氣候室[(20±1) ℃、相對濕度80%～85%]中進行。每個處理10個重復。72 h后統(tǒng)計蚯蚓的存活數(shù)，以蚯蚓前尾部對機械刺激無反應視為死亡，并計算存活率。

1.2.3 Bt水稻種植后的土壤對蚯蚓存活率和死亡率的影響 將田間取回的土壤絞碎均勻后稱取400 g裝入柱狀塑料盒(直徑15 cm，高11 cm)中，每盒放入6條體重200～300 mg的蚯蚓。用解剖針扎孔的保鮮膜封口后，飼養(yǎng)于人工氣候室中(條件同1.2.2)。每個處理設置9個重復。在第4周和第7周時，取出蚯蚓放在室溫下清腸2 h，用無菌水洗凈，經濾紙干燥后，稱量其總體重，計算生長率。同時統(tǒng)計死亡率。試驗結束后，將蚯蚓保存在-70 ℃冰箱中，以供酶源制備。

1.2.4 蚯蚓體內總蛋白含量和解毒酶活性的檢測 每個處理選取3條健壯、大小一致的蚯蚓，剪成數(shù)段放入預冷的勻漿器中，按體質量1∶10加入預冷的0.9%生理鹽水，勻漿后4 ℃、10000 r·min-1離心10 min，取上清液于-70 ℃下冷藏，待測酶活性。

1.2.5 蚯蚓體內酶活性測定 總蛋白含量的測定：參照考馬斯亮藍法，以牛血清蛋白做標準曲線，測定上清液中總蛋白含量。

乙酰膽堿酯酶活性和總蛋白的測定：采用南京建成科技有限公司的試劑盒進行測定。

谷胱甘肽S-轉移酶活性測定：在96孔酶標板中每孔依次加入90 μL 0.1 mol·L-1、pH 7.6的磷酸緩沖液、10 μL酶液、100 μL 1.2 mmol·L-1的CDNB和100 μL的6 mmol·L-1的GSH。用酶標儀每隔20 s記錄一次D340 nm，共記錄150次。酶促反應階段溫度27 ℃。以反應速度表示酶活力(ΔD340 nm·min-1·mg-1)。

1.3 數(shù)據統(tǒng)計與分析

生長率=(Wt-Wo)/Wo,Wo為蚯蚓初始重量，Wt為處理t天后蚯蚓重量。

死亡率=(Do-Dt)/Do,Do為初始蚯蚓數(shù)，Dt為存活蚯蚓數(shù)。

采用SPSS 18.0軟件對試驗數(shù)據反正弦平方根轉換后進行雙因素方差分析并采用Tukey進行多重比較。采用Student-Newman-Keuls檢驗(P<0.05)比較不同處理條件下蚯蚓總蛋白含量和酶活性的差異顯著性。

2 結果與分析

2.1 不同深度土壤中Bt蛋白含量

由表1可知，隨著取樣時間的延長，土壤中Cry1C蛋白的含量顯著降低(P<0.01)。在相同取樣時間和取樣深度的條件下，種植3種后茬作物的土樣中Cry1C蛋白的含量與空白對照(拋荒田)相比無顯著差異。1月份采集的土樣中，表層土樣中的Cry1C蛋白含量顯著高于地下10 cm和地下20 cm，而地下2層中Cry1C蛋白的含量差異不顯著。3月份和6月份采集的土樣中Cry1C蛋白的含量基本不受土壤取樣深度的影響，不同深度間Cry1C蛋白的含量無顯著差異。Cry2A蛋白含量隨著取樣時間的延長而顯著降低(P<0.01)，相同時間相同深度的條件下，種植3種后茬作物的土壤中Cry2A蛋白含量與對照(拋荒田)相比無顯著差異(P=0.548)。在1月和3月的土樣中，表層土壤中Cry2A蛋白含量顯著高于地下10 cm和地下20 cm土壤中Bt蛋白含量，地下10 cm和地下20 cm土壤中Bt蛋白含量差異不顯著。6月份采集的土壤中，各土層中Cry2A蛋白的含量均無顯著差異。

表1 Bt水稻田經不同后茬作物種植的土壤中Bt蛋白的含量(ng·g-1)Table 1 Amounts of Bt insecticidal proteins in the different soil samples in after-reap Bt rice (ng·g-1)

表中數(shù)據為平均值±標準誤。同列數(shù)據后附不同大、小寫字母者表示同一時期不同處理在0.01、0.05水平上差異顯著。

The data in the table represent means±SE. Different small and capital letters in the same column mean significant difference among treatments at the same time at 0.05 and 0.01 levels.

2.2 特定Bt蛋白濃度對赤子愛勝蚓存活率的影響

根據土壤中Bt蛋白的含量設定Cry2A蛋白的濃度為1.5 μg·mL-1，Cry1C蛋白濃度為80 ng·mL-1,飼養(yǎng)72 h后，Cry2A處理的蚯蚓存活率為96.7%，Cry1C處理的蚯蚓存活率為95.0%，空白對照蚯蚓的存活率為98.3%。結果表明，經過2種Bt蛋白處理，蚯蚓的存活率與對照相比無顯著差異。

2.3 不同處理條件下蚯蚓的生長率與死亡率

方差分析結果顯示，取樣時間、后茬作物、水稻品種、取樣時間和后茬作物的交互作用、取樣時間和水稻品種的交互作用、后茬作物和水稻品種的交互作用以及取樣時間、后茬作物和水稻品種的交互作用對蚯蚓4周和7周生長率與死亡率均無顯著影響(表2～4)。

2.4 經Bt水稻種植后的土壤對蚯蚓體內解毒酶的影響

田間取樣試驗結果表明，經Bt水稻種植后的土壤飼養(yǎng)的蚯蚓，4周和7周后體內的總蛋白含量以及解毒酶AChE和GSTs活性與對照相比無顯著差異(表5)。

表2 Bt水稻田經不同后茬作物種植的土壤飼養(yǎng)的赤子愛勝蚓的生長率(%)Table 2 Growth rates(%) of E.foetida cultivated under laboratory conditions exposed to the three Bt rice cultivars at weeks 4 and 7

表中數(shù)據為平均值±標準誤。同列數(shù)據后附不同小寫字母者表示同一時期不同處理在0.05水平上差異顯著。

The data in the table represent means±SE. Different small letters in the same column mean significant difference among treatments at the same time at 0.05 level.

表3 Bt水稻田經不同后茬作物種植的土壤飼養(yǎng)的赤子愛勝蚓的死亡率(%)Table 3 Mortality rate (%) of E.foetida cultivated under laboratory conditions exposed to the three Bt rice cultivars at weeks 4 and 7

表中數(shù)據為平均值±標準誤。同列數(shù)據后附不同小寫字母者表示同一時期不同處理在0.05水平上差異顯著。

The data in the table represent means±SE. Different small letters in the same column mean significant difference among treatments at the same time at 0.05 level.

表4 不同處理對蚯蚓生長發(fā)育影響的雙因素方差分析Table 4 Three-way ANOVA comparing growth and mortality rates of E.foetida under different conditions

表5 經Bt水稻種植后的土壤對赤子愛勝蚓體內總蛋白含量以及解毒酶活性的影響Table 5 Activities of detoxification enzymes and contents of protein of E.foetida cultivated under laboratory conditions exposed to the three Bt rice at weeks 4 and 7

表中數(shù)據為平均值±標準誤。同列數(shù)據后附不同小寫字母者表示同一時期不同處理在0.05水平上差異顯著。

The data in the table represent means±SE. Different small letters in the same column mean significant difference among treatments at the same time at 0.05 level.

3 討論

蚯蚓是土壤生物中生物量較大的類群之一，主要以作物殘留物為食，在植物殘體的降解和土壤中營養(yǎng)物質的循環(huán)過程中起重要作用。蚯蚓的挖穴和取食活動能改善土壤和土壤中有機質的結構，影響著土壤的疏松性和通氣性，并能為土壤中其他生物改善生物資源(Schampheleireetal.,2007)。

Saxenaetal.(2002)在前茬種植Bt玉米田中種植非Bt玉米、胡蘿卜和小蘿卜等，20～120 d后，在后茬作物中沒有檢測出Bt蛋白，而土壤中的Bt蛋白晶體依然存在。在無菌營養(yǎng)液中種植轉Bt基因玉米15 d后，再將非Bt玉米種子移栽到該營養(yǎng)液中，7～15 d后，在非Bt玉米中沒有檢測到Bt蛋白。本研究檢測了田間不同深度的土樣中Bt蛋白的含量，結果顯示無論是轉cry2A基因水稻田還是轉cry1C基因水稻田的土壤中，Bt蛋白的含量均隨著時間的延長而降低，其原因可能是隨著時間的延長，土壤中的Bt蛋白逐漸發(fā)生降解。3種后茬作物的種植對土壤各層的Bt蛋白含量無顯著影響，說明測試的3種后茬作物對土壤中Bt蛋白的降解沒有顯著的作用。1月份和3月份轉cry2A基因水稻田以及1月份轉cry1C基因水稻田采集的表層土樣中的Bt蛋白含量顯著高于地下10 cm和地下20 cm土壤中的含量，地下2層土樣中的Cry2A蛋白含量之間無顯著差異，可能是因為殘留水稻秸稈的分解導致表層Bt蛋白含量高于地下。3月份轉cry1C基因水稻田以及6月份轉cry2A基因水稻田和轉cry1C基因水稻田的土壤中Bt蛋白的含量均不受土壤深度的影響，原因可能是Bt蛋白的降解基本完成，含量達到了穩(wěn)定狀態(tài)。

有關Bt作物的種植對蚯蚓生長和繁殖的研究已有很多，Ahl-Goyetal.(1995)將Bt玉米粉碎后加入土壤中飼養(yǎng)蚯蚓，在蚯蚓的腸道和糞便中均能夠檢測到Bt蛋白，但Bt蛋白對蚯蚓沒有急性致死效應。Ahmadetal.(2006)將Bt玉米的秸稈粉碎后加入到種植過Bt玉米的土壤中，發(fā)現(xiàn)其對蚯蚓的死亡率和體重變化無顯著影響。崔蕾等(2014)發(fā)現(xiàn)，轉cry1Ie基因玉米殘體對赤子愛勝蚓的體重、產繭量和繭的孵化率沒有不利影響。Schraderetal.(2008)認為，蚯蚓能夠促進Bt蛋白的降解，但Bt蛋白對蚯蚓無不良影響。Vercesietal.(2006)的研究表明，在室內設定的轉cry1Ab基因玉米最高Bt蛋白濃度(5 g·kg-1干土)條件下飼喂Aporrectodeacaliginosa，對其幼蚓的存活和成蚓的生長和繁殖無顯著影響。本研究通過在室內條件下用田間采集的土樣飼養(yǎng)蚯蚓4周和7周，結果表明，無論是飼養(yǎng)4周還是7周，種植過轉Bt基因水稻后的土壤對蚯蚓的率和死亡率與對照相比無顯著差異，在2種Bt蛋白最高濃度的條件下和對照相比對蚯蚓的存活率沒有不利影響，表明田間Bt蛋白的含量不足以對蚯蚓產生影響。

有關Bt作物對蚯蚓體內酶活性的研究已有較多報道，但大多數(shù)研究集中于Bt玉米和Bt棉花中(崔蕾等，2014； 舒迎花等，2011； 肖能文，2005； Liuetal.，2009)，均表明其對蚯蚓體內的總蛋白含量、CAT、AChE和SOD酶的活性沒有顯著影響。而有關轉Bt基因水稻種植對蚯蚓酶活性的研究則較少。本試驗測定了用種植過轉Bt基因水稻的土壤處理4周和7周后的蚯蚓體內的總蛋白含量和2種解毒酶AChE和GSTs活性，結果表明，用種植轉Bt基因水稻過后的土壤飼養(yǎng)赤子愛勝蚓，其體內的總蛋白量以及AChE和GSTs的活性與對照相比沒有顯著差異。

綜合上述內容，種植過轉Bt(cry2A和cry1C)基因水稻的土壤對赤子愛勝蚓的生長發(fā)育和繁殖沒有不利的影響，對其體內相關的解毒酶以及總蛋白含量亦無顯著的影響。Bt蛋白隨時間的延長而逐漸降解，水稻收割初期，土壤表層Bt蛋白含量顯著高于地下土層中的含量。后茬作物的種植對土壤中Bt蛋白的含量沒有影響。Bt蛋白在土壤中存在時間較長，而且會有一定的積累過程，因此需要進一步更長時間的研究來確定其對地下非靶標生物的影響。后茬作物是否存在對Bt蛋白的吸收亦需要進一步對后茬作物的檢測。

致謝:感謝浙江省金華市植物保護站陳桂華、張發(fā)成和朱平陽對本研究在田間管理和取樣過程中的幫助；感謝浙江省農業(yè)科學院農產品質量標準研究所王彥華博士提供蚯蚓并技術指導。

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(責任編輯:郭瑩)

Effect of soil planted withBtrice on the development and enzyme activities ofEiseniafoetida

kai LIU1,2, Ya-jun YANG1, Jun-ce TIAN1, Yan-hui LU1, Hong-xing XU1,Xu-song ZHENG1, Zhong-xian Lü1,2*

1InstituteofPlantProtectionandMicrobiology，ZhejiangAcademyofAgriculturalSciences，Hangzhou,Zhejiang310021，China;2CollegeofChemistryandLifeScience，ZhejiangNormalUniversity,Jinhua,Zhejiang321004,China

【Background】 The safety associated with planting transgenic crops remains a concern for the public. Study on the effect of Bt proteins on the underground non-target organisms is an important part for the safety evaluation of transgenic crops. 【Method】 In this study, pea, alfalfa, and rape were planted as after-reap crops in the experimental field, where transgenicBtrice was previously grown. In the field, soil samples were collected in January, March, and June of 2013 and used to cultivateEiseniafoetidain laboratory conditions. At weeks 4 and 7, we determined the development and enzymatic activities ofE.foetida. The contents of Bt protein in soil samples at different depths were determined and the survival rate ofE.foetidafeeding with Bt protein directly was evaluated. 【Result】 The soil samples collected from the plotd planted with transgenicBtrice T1C-19 and T2A-1 had no significant effects on the development, survival rate and enzymatic activities ofE.foetidacompared with soil samples collected from plots planted with the non-transgenicBtrice MH63. Samples of the surface soil showed significantly higher levels of Cry2A protein in in January and March and of Cry1C protein in January than soil collected in deeper. There were no significant differences in the amounts of Cry2A Bt protein in 10 cm and 20 cm as well as soils collected from T1C-19 plot in March and June and T2A-1 plot in June. Dynamics of Bt protein were not affected by the after-reap crop in this study. The survival rates ofE.foetidadirectly fed with Cry2A and Cry1C proteins were 96.7% and 95.0%, and did not significantly differ from the control. 【Conclusion and significance】 Our results indicated that the planting of transgeniccry2Aandcry1CBtrice had no significant difference on the development and enzyme activities ofE.foetida. Our study provides some basic protocol for evaluating the safety of transgenic rice.

transgenicBtrice; afterreap crop; contents of Bt protein in soil samples;Eiseniafoetida; growth rate; mortality; enzyme activity

2015-04-19 接受日期(Accepted)： 2015-05-13

國家轉基因生物新品種培育重大專項(2014ZX08001-001)； 國家水稻產業(yè)技術體系(CARS-01-17)

劉凱， 男， 碩士研究生。 研究方向: 水稻害蟲綜合治理。 E-mail: liukai5088@126.com

*通訊作者(Author for correspondence), E-mail: luzxmh2004@aliyun.com

10.3969/j.issn.2095-1787.2015.03.008