3種分光光度法對(duì)天然抗氧化物質(zhì)抗自由基性能的分析檢測(cè)

高蘭玲

摘 要：該文在分析檢測(cè)天然抗氧化物質(zhì)抗自由基的性能，借助于3種分光光度法來(lái)比較研究。在3種分光度法對(duì)自由基進(jìn)行分析檢測(cè)，包括對(duì)抗氧化劑的抗自由基性能進(jìn)行檢測(cè)的方法上，可適應(yīng)相關(guān)研究工作或者常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)自由基的需要。

關(guān)鍵詞：分光光度法 天然抗氧化物質(zhì) 抗自由基性能

中圖分類號(hào)：0657 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-3791（2015）04（c）-0247-01

1 DPPH自由基捕獲分光光度法分析

1.1 實(shí)驗(yàn)部分

（1）儀器及試劑。選取型號(hào)752的分光光度計(jì)，DPPH溶液的濃度為0.1777nmol/L。混合磷酸鹽緩沖溶液pH值為6.88?？寡趸瘎悠啡芤旱臐舛仁?0.5g/L。沒(méi)食子酸丙酯和葡萄籽提取物，天然抗氧化劑，最后是分離制備的燈盞花素。（2）實(shí)驗(yàn)方法。選取pH6.88混合磷酸鹽緩沖溶液添加10mL比色管，再加入DPPH溶液4mL，混合均勻后并適當(dāng)添加抗氧化劑溶液，用蒸餾水來(lái)補(bǔ)充體積，10min之后于520nm區(qū)域?qū)ξ舛冗M(jìn)行測(cè)算。在抗氧化劑清除DPPH自由基的比率上，按照K/（%）=[1—（Ai—Aj）/Ac] ×100來(lái)計(jì)算。

1.2 結(jié)果與討論

在實(shí)驗(yàn)中，選取不同體積的抗氧化劑進(jìn)行添加，通過(guò)測(cè)定Ai、Aj、Ac的值，從而得到Ai—Aj的數(shù)值，并計(jì)算出K，也即自由基清除率，如圖1所示。

在圖1中，1、2、3分別表示沒(méi)食子丙酸脂、葡萄籽提取物、燈盞花素。所以就以上物質(zhì)捕獲DPPH自由基的能力，一般和抗氧化劑使用量形成量效關(guān)系，而且增加抗氧化劑使用量的話，就會(huì)捕獲到更多的自由基。

2 亞硝基R鹽-Co3+褪色法分析

2.1 實(shí)驗(yàn)部分

（1）儀器及試劑。選用型號(hào)為752的分光光度計(jì)，亞硝酸R鹽溶液濃度為0.00156mol/L。CoSO4溶液濃度為0.00050mol/L。H2O2的體積分?jǐn)?shù)為1.8%。pH值為7.4的KH2PO4緩沖液，pH值為9.2的Na2CO3溶液。（2）實(shí)驗(yàn)方法。依次把pH9.2緩沖液2mL，CoSO4溶液1mL，亞硝酸R鹽1mL，H2O2溶液1mL加入到10mL的比色管中，并用蒸餾水稀釋。放置在37℃水浴內(nèi)，保持45min恒溫。在494nm區(qū)域?qū)ξ舛華b進(jìn)行測(cè)量，同時(shí)對(duì)沒(méi)有添加的H2O2吸光度Ao進(jìn)行測(cè)量。其中用△A=Ao—Ab來(lái)表示自由基產(chǎn)生量。

2.2 結(jié)果與討論

該實(shí)驗(yàn)說(shuō)明，不斷增加反應(yīng)時(shí)間后，△A的增長(zhǎng)速度反而下降，而褪色速度則更快地進(jìn)行下降。在反應(yīng)到達(dá)40min之后，體系沒(méi)有再發(fā)生變化。在分析抗羥自由基氧化性能上，選取了三種抗氧物質(zhì)樣品，具體結(jié)果如圖2所示。1、2、3分別表示沒(méi)食子丙酸脂、葡萄籽提取物和燈盞花素。表明當(dāng)對(duì)抗氧劑濃度再次增加時(shí)，表觀抗羥自由基幾乎不會(huì)增加氧化率。同時(shí)抗羥自由基的氧化能力，從高到低分別是沒(méi)食子酸丙酯、葡萄籽提取物、燈盞花素。

3 連苯三酚紅褪色光度法分析

3.1 實(shí)驗(yàn)部分

（1）儀器及試劑。選用型號(hào)為752的分光光度計(jì)。H2O2的體積分?jǐn)?shù)為1.8%。連苯三酚紅溶液的濃度為0.0001mol/L。EDTA-Fe2+溶液的濃度為0.0038mol/L。Na2CO3緩沖液的濃度為0.1mol/L，pH值為9.1。（2）實(shí)驗(yàn)方法。依次把pH9.2的Na2CO3緩沖溶液2ml，EDTA-Fe2+溶液0.7mL，連苯三酚紅溶液3.5mL，體積分?jǐn)?shù)為0.6的H2O2液體0.7mL加入到10mL的比色管中，并且利用蒸餾水來(lái)稀釋到刻度位置。在對(duì)吸光度AS的測(cè)定上，抗羥自由基氧化率S=（As—Ab）/（Ao—Ab）×100。

3.2 結(jié)果與討論

該實(shí)驗(yàn)說(shuō)明，體系褪色速度隨著反應(yīng)溫度的提高而增加。根據(jù)實(shí)驗(yàn)方法，選取3種抗氧化物，并進(jìn)行抗羥自由基氧化性能上的研究。在各個(gè)抗氧化試劑不同使用量的情況下，羥自由基氧化劑抑制率。

綜上所述，相對(duì)于燈盞花素提取物，沒(méi)食子酸丙酯以及葡萄籽提取物具有更優(yōu)的抗氧化性。不僅可以清除40%～80%左右的自由基，而且抗氧化能力和清除氧自由基的作用相對(duì)理想。

參考文獻(xiàn)

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