醫(yī)用多糖止血愈合海綿對(duì)小型豬股動(dòng)脈出血模型的止血作用研究

徐紅霞，于燕，王曉陽(yáng)，姜毅

醫(yī)用多糖止血愈合海綿對(duì)小型豬股動(dòng)脈出血模型的止血作用研究

徐紅霞，于燕，王曉陽(yáng)，姜毅

目的 研究醫(yī)用多糖止血愈合海綿(MP)在小型豬股動(dòng)脈出血模型中的止血作用。方法 采用小型豬32只制作股動(dòng)脈出血模型后隨機(jī)分為4組(n=8)，分別采用MP、羧甲基纖維素(CMC)、明膠海綿(GS)和醫(yī)用紗布(MG)進(jìn)行創(chuàng)面外敷止血，觀察各組的止血時(shí)間、失血量及小型豬生命體征。結(jié)果 建立小型豬股動(dòng)脈出血模型后，各組動(dòng)物平均動(dòng)脈壓無(wú)明顯差異。MP組、CMC組、GS組的止血時(shí)間及失血量均明顯低于MG組(P<0.01)，且CMC組的止血效果優(yōu)于MP組和GS組，而MP組和GS組的止血效果相似。結(jié)論 MP、CMC敷料對(duì)小型豬股動(dòng)脈止血效果確切，與GS相似或略優(yōu)于GS。

透明質(zhì)酸；羧甲基纖維素；明膠海綿，吸收性；止血

在外傷止血尤其是戰(zhàn)傷止血材料的研究中，以多聚糖類為主要成分的止血材料占據(jù)了重要地位[1]，因其具有促凝、吸水、黏附、可生物降解、可塑性及相容性好等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用，如經(jīng)過(guò)戰(zhàn)地救護(hù)驗(yàn)證的美國(guó)HemCon止血敷料[2]的主要成分即為殼聚糖，而聚N-乙酰氨基葡萄糖[3]的止血效果還要超過(guò)殼聚糖[4]，其他多聚糖類如氧化型纖維素、葡聚糖聚合物等也已有相應(yīng)的止血產(chǎn)品。其中以羧甲基纖維素(carboxymethylcellulose，CMC)為主要成分的止血敷料已投入臨床使用[5-7]，而透明質(zhì)酸(hyaluronic acid，HA)作為多聚糖的一種，具有吸水保濕、促進(jìn)創(chuàng)面愈合、防止傷口粘連的作用[8-9]，由江蘇昌吉永生物科技有限公司新近研發(fā)的醫(yī)用多糖止血愈合海綿(medical polysaccharide hemostatic healing sponge，MP)(專利號(hào)：201220433377.2)是將CMC和HA兩種材料以一定比例混合后制成疏松多孔的海綿狀敷料，本研究觀察了其對(duì)動(dòng)脈傷口的止血作用。

1 材料與方法

1.1 主要材料 MP及CMC敷料均為50mm×50mm×5mm，由江蘇昌吉永生物科技有限公司提供；明膠海綿(gelatin sponge，GS)為南昌市祥恩堂醫(yī)療器械有限公司祥恩牌A型2片裝，60mm×20mm×5mm，批號(hào)12050801；醫(yī)用紗布(medical gauze，MG)為北京中北博健科貿(mào)有限公司生產(chǎn)的博銳牌8cm×8cm-8層醫(yī)用紗布方，批號(hào)20120906。四種敷料均剪成50mm×20mm大小后用于實(shí)驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 采用2～3月齡實(shí)驗(yàn)用小型豬32只，體重11.50±0.77kg，雌雄各半，由北京科宇動(dòng)物養(yǎng)殖中心[SCXK-(京)-2012-0003]提供，在北京海軍總醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[SCXK-(軍)-2012-0012]進(jìn)行飼養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)符合動(dòng)物倫理學(xué)要求。按照隨機(jī)化原則將32只小型豬分為MP、CMC、GS、MG四組，每組8只。

1.3 小型豬股動(dòng)脈出血模型的建立 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物術(shù)前12h禁食水，將速眠新Ⅱ注射液(0.1ml/kg)和鹽酸氯胺酮注射液(5mg/kg)混勻后經(jīng)頸部肌肉注射給藥，約5min后麻醉生效(操作超過(guò)1h或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物不能配合時(shí)肌注前藥半量以鞏固麻醉效果)，將小型豬仰臥位固定在操作臺(tái)上，術(shù)區(qū)備皮，碘附消毒，在左頸部作一與氣管平行切口(長(zhǎng)約5.0cm)，分離并顯露左頸總動(dòng)脈(長(zhǎng)5.0～8.0cm)，結(jié)扎遠(yuǎn)心端，動(dòng)脈夾夾閉近心端，在距離遠(yuǎn)端結(jié)扎線0.3cm處剪開(kāi)左頸動(dòng)脈管壁約1/2，插入灌注肝素生理鹽水溶液的抗凝管并固定，放開(kāi)近心端動(dòng)脈夾，取血5ml，備用于測(cè)量失血量?？鼓芡饨踊萜毡O(jiān)測(cè)儀(M1204A)上的有創(chuàng)血壓傳感器模塊，連續(xù)觀察小型豬平均動(dòng)脈壓(mean arterial pressure，MAP)，連接體表心電呼吸監(jiān)測(cè)模塊觀察心率和呼吸。

在小型豬的大腿內(nèi)側(cè)沿股動(dòng)脈走行作長(zhǎng)約5.0cm切口，分離并顯露股動(dòng)脈及并行的股靜脈、股神經(jīng)，暴露約10.0mm的股動(dòng)脈段，測(cè)得股動(dòng)脈直徑為2.5～3.5mm。先用動(dòng)脈夾夾閉股動(dòng)脈近心端，在股動(dòng)脈中部橫斷股動(dòng)脈約1/2，建立股動(dòng)脈出血模型。

1.4 止血時(shí)間測(cè)定 拭去股動(dòng)脈術(shù)區(qū)的滲血，按實(shí)驗(yàn)分組外敷相應(yīng)敷料，并用自制杠桿支架在敷料上方垂直加壓，壓強(qiáng)經(jīng)過(guò)計(jì)算約等于該小型豬此時(shí)的MAP，放開(kāi)股動(dòng)脈夾，可見(jiàn)術(shù)區(qū)血液滲出。以放開(kāi)股動(dòng)脈夾到術(shù)區(qū)滲血停止的時(shí)間作為止血時(shí)間。記錄放開(kāi)股動(dòng)脈夾前及放開(kāi)股動(dòng)脈夾開(kāi)始止血后2、5、10min時(shí)的MAP(分別記為MAP0、MAP2、MAP5、MAP10)。

1.5 失血量的測(cè)定 收集術(shù)區(qū)凝血塊和敷料，放入恒溫干燥箱，80℃干燥至恒重，減去實(shí)驗(yàn)前敷料重量即為失血干重，對(duì)比該小型豬5ml血的干重，計(jì)算出失血量。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析(One-way ANOVA)，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組小型豬實(shí)驗(yàn)前體重及實(shí)驗(yàn)前后MAP比較統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，各組小型豬實(shí)驗(yàn)前體重比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。同一時(shí)間點(diǎn)各組小型豬的MAP差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，且同一組小型豬在各時(shí)間點(diǎn)的MAP差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，表1)。

表1 各組小型豬體重及實(shí)驗(yàn)前后平均動(dòng)脈壓分析結(jié)果(±s，n=8)Tab.1 Analysis of miniature pig's weight and mean aterial press (MAP) before and after operation (±s, n=8)

表1 各組小型豬體重及實(shí)驗(yàn)前后平均動(dòng)脈壓分析結(jié)果(±s，n=8)Tab.1 Analysis of miniature pig's weight and mean aterial press (MAP) before and after operation (±s, n=8)

2.2 各組小型豬股動(dòng)脈止血時(shí)間及失血量的比較

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，CMC、MP和GS組的止血時(shí)間和失血量均明顯低于MG組(P<0.05)，且CMC組明顯低于MP組和GS組(P<0.05)，MP組與GS組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，表2)。

表2 各組股動(dòng)脈止血時(shí)間及失血量比較(±s，n=8)Tab. 2 Analysis of hemostatic time and blood loss (±s, n=8)

表2 各組股動(dòng)脈止血時(shí)間及失血量比較(±s，n=8)Tab. 2 Analysis of hemostatic time and blood loss (±s, n=8)

(1)P<0.05 compared with CMC group; (2)P<0.05 compared with MP group; (3)P<0.05 compared with GS group

?

3 討 論

HA是由D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺組成的酸性黏多糖，可以潤(rùn)滑關(guān)節(jié)，調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)、蛋白質(zhì)的擴(kuò)散及轉(zhuǎn)運(yùn)，促進(jìn)創(chuàng)傷愈合，尤為重要的是，其螺旋狀空間結(jié)構(gòu)具有特殊的保水作用，是目前發(fā)現(xiàn)的自然界中保濕作用最好的物質(zhì)。皮膚中也含有大量的HA，美容行業(yè)將HA用于去皺、使皮膚光滑、增加彈性、延緩衰老，在外傷傷口中HA交聯(lián)的多肽可預(yù)防葡萄球菌感染[10]，HA還可調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)以促進(jìn)傷口組織蛋白合成，保濕以促進(jìn)傷口濕性愈合。

MP的作用機(jī)制主要為：①多孔狀結(jié)構(gòu)接觸血液時(shí)可黏附并激活血小板，在傷口周?chē)苄纬裳“逯寡?，起到初步止血作用；②HA和CMC均帶有負(fù)電荷，可激活內(nèi)源性凝血途徑，同時(shí)血管損傷暴露出的組織因子可激活外源性凝血途徑，兩種途徑的激活可加速凝血酶原激活復(fù)合物形成，從而激活凝血酶，促使可溶性的纖維蛋白原變成不溶性的纖維蛋白，并交織成網(wǎng)，形成血凝塊，完成止血；③CMC遇水后有極強(qiáng)的黏性，HA及海綿狀結(jié)構(gòu)可吸收血液中的水分而變?yōu)槟z凍狀，與創(chuàng)面緊密貼合，從而減少血液和組織液滲出，同時(shí)封閉創(chuàng)面并形成濕潤(rùn)環(huán)境，有利于多種生長(zhǎng)因子的釋放及細(xì)胞的增殖和遷移，實(shí)現(xiàn)傷口的濕性愈合[7]。有研究發(fā)現(xiàn)，在腹腔滲血或出血的動(dòng)物模型中，HA/CMC膜可在無(wú)止血?jiǎng)﹨⑴c時(shí)起到止血、愈創(chuàng)、防止粘連的作用[11]。

為驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)敷料的動(dòng)脈止血效果，本研究參考了既往文獻(xiàn)中的動(dòng)物模型[12-13]并進(jìn)行了適當(dāng)調(diào)整，如將創(chuàng)面的外部壓強(qiáng)調(diào)整為小型豬即時(shí)的MAP，避免了動(dòng)物血壓不同導(dǎo)致的止血效果差異，對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析可以看出該措施是有效的，各組小型豬的MAP對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)明顯影響，且在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中MAP維持穩(wěn)定，避免了因紗布敷料止血效果差而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大量失血死亡[12]。本研究結(jié)果顯示，在小型豬股動(dòng)脈出血模型的止血實(shí)驗(yàn)中，MP組、CMC組、GS組的止血效果均優(yōu)于MG組，其中CMC組止血效果相對(duì)更佳，而MP組和GS組的止血效果相似。

綜上所述，在小型豬股動(dòng)脈出血模型的止血實(shí)驗(yàn)中，與陽(yáng)性對(duì)照物GS比較，MP、CMC敷料均有明確的止血效果，與GS類似或略優(yōu)，具有良好的應(yīng)用前景。

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Hemostatic effect of a medical polysaccharide hemostatic healing sponge on hemostasis of bleeding from femoral artery in pigs

XU Hong-xia1, YU Yan1, WANG Xiao-yang2, JIANG Yi3*1Department of Burns and Plastic Surgery,2Department of Respiratory Medicine, Navy General Hospital, Beijing 100048, China
3Clinic of Political Department of Shenyang Command, Shenyang 110032, China
*

, E-mail: jiangyi1974@sohu.com

ObjectiveTo study the effect of polysaccharide hemostatic healing sponge in controlling bleeding from femoral artery in miniature swines.MethodsThirty two miniature pigs were used to reproduce femoral artery hemorrhage model and then divided equally into four groups, and bleeding from femoral artery was treated by Medical Polysaccharide Hemostatic Healing Sponge (MP), carboxymethyl cellulose (CMC), gelatin sponge (GS) or medical gauze (MG), respectively. Hemostasis time, blood loss and vital signs of these pigs were observed and recorded.ResultsThere were no group differences in mean arterial pressure. Hemostasis time was earlier and blood loss was less in MP, CMC and GS groups than in MG group, and the hemostatic effect was superior in CMC group to MP and GS groups and similar between the MP and GS groups.ConclusionMP or CMC dressing could effectively stop femoral artery bleeding, and its hemostatic effect is similar to or slightly better than GS in miniature pigs.

hyaluronic acid; carboxymethylcellulose; gelatin sponge, absorbable; hemostasis

R605.972

A

0577-7402(2015)03-0245-03

10.11855/j.issn.0577-7402.2015.03.15

2014-09-13；

2015-02-02)

(責(zé)任編輯：胡全兵)

徐紅霞，副主任醫(yī)師。主要從事醫(yī)學(xué)整形美容方面的工作

100048 北京 海軍總醫(yī)院燒傷整形科(徐紅霞、于燕)，呼吸內(nèi)科(王曉陽(yáng))；110032 沈陽(yáng) 沈陽(yáng)軍區(qū)政治部門(mén)診部(姜毅)

姜毅，E-mail：jiangyi1974@sohu.com