MTAD 等根管沖洗劑對根管內(nèi)糞腸球菌的消毒作用*

何薇薇 安 峰 林媛媛 王曉明 商煒娜

有學者研究證實，即便在沒有其他微生物存活的情況下，糞腸球菌也能夠耐受根管內(nèi)營養(yǎng)缺乏的惡劣環(huán)境，并且能夠侵入牙本質(zhì)小管，在導(dǎo)致根管系統(tǒng)感染的細菌當中，糞腸球菌是最難以清除的微生物之一[1]。本實驗研究旨在離體牙上建立糞腸球菌感染根管的模型，來檢測不同沖洗劑對根管內(nèi)糞腸球菌的抗菌效果。

1. 材料與方法

1.1 實驗標本 挑選河北北方學院附屬第一醫(yī)院口腔門診新鮮拔除的40 顆單根管牙，去除根周軟組織、牙石等，清洗干凈后放在生理鹽水中4℃冰箱保存?zhèn)溆谩＜{入標準:要求單根管，根尖孔閉合，無近髓齲壞或充填體，根裂等缺陷。

1.2 離體牙預(yù)備 用無菌金鋼砂片切除牙冠，保留牙根長度為15mm。常規(guī)消毒拔髓，首先用機用Protaper 器械中的SX 敞開根管口，然后用S1、S2、F1、F2 逐序進行預(yù)備，根管預(yù)備過程中每換一次器械用0.9%NaCl 溶液沖洗，時間為1min。預(yù)備完畢后，用樹脂在根尖部做封閉。然后將所有離體牙放入含有5ml 腦心浸潤液(BHI 肉湯)的試管中，121℃高溫高壓下滅菌20min，靜置于5%CO2培養(yǎng)箱(37℃)內(nèi)培養(yǎng)，如BHI 肉湯在24h 后無混濁，即認定滅菌完全。

1.3 感染模型的建立 在超凈工作臺上，常溫下將糞腸球菌冰凍液復(fù)蘇，將其接種于BHI 肉湯中， 用比濁儀調(diào)整渾度為0.5M 的標準菌液備用.將所有牙根分別浸泡在包含糞腸球菌混濁度為1.5×108CFU/ L 的BHI 中，孵育箱孵育，隔日更換一次新鮮培養(yǎng)菌液至21d，并隨機抽取任一標本菌液進行微生物檢測，根據(jù)菌落形態(tài)及革蘭染色，確定無雜菌污染。

1.4 實驗分組 將已感染糞腸球菌的離體牙模型，隨機分為五組，每組各8 例樣本，分別用0.2%濃替硝唑含漱液(A 組)，MTAD 沖洗液(B組)，3%雙氧水(C 組)，2.5%NaClO(D 組)，0.9%NaCl(E 組)沖洗。

1.5 感染模型的取樣及細菌培養(yǎng)計數(shù) 所有樣本用蠟包埋在無蓋塑料容器中，均按下頜牙位操作。

1.5.1 第一次取樣(N1) 根管沖洗前戴無菌手套用無菌鑷子夾持30 號無菌吸潮紙尖按照記錄的工作長度插入根管內(nèi)停留1min，吸取根管內(nèi)液后，立即放入裝有100μm 生理鹽水的Eppendorf管中混勻，10 倍系列稀釋，分別接種于BHI 血瓊脂平皿上，37℃下CO2孵育箱中培養(yǎng)，48h 后計數(shù)菌落數(shù)(CFU／ml)，記為N1(圖1、圖3、圖5、圖7、圖9)。

1.5.2 第二次取樣(N2) 在無菌條件下用手動不銹鋼K 銼繼續(xù)預(yù)備離體牙的根管中下段，預(yù)備至40 號，每更換一次器械時分別按照上述的五組沖洗液進行根管沖洗。最后為避免沖洗液的過度作用，用2ml 蒸餾水沖洗根管。然后用無菌鑷子夾持30 號無菌吸潮紙尖按照記錄的工作長度插入根管內(nèi)停留1min，吸取根管內(nèi)液，放入裝有100μm 生理鹽水的Eppendorf 管中，10 倍系列稀釋，送培養(yǎng)計數(shù)，記為N2(圖2、圖4、圖6、圖8、圖10)。

沖洗方法：沖洗時，使用23G 直徑0.6mm 側(cè)向開口針頭插入工作長度后退1mm 并上下提拉、左右移動針頭。每次沖洗使用5ml 沖洗液用時1min。

1.6 統(tǒng)計方法 用SPSS19.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。

對沖洗前后的CFU 數(shù)據(jù)做lgCFU 轉(zhuǎn)換，利用方差分析做統(tǒng)計學處理。

附表 幾種沖洗液沖洗前后根管內(nèi)細菌量的變化(±s)

附表 幾種沖洗液沖洗前后根管內(nèi)細菌量的變化(±s)

沖洗液組 樣本數(shù) 沖洗前N1 沖洗后N2 差值A(chǔ) 組 8 例 8.6915±0.1527 3.1894±0.2338 5.5020±0.3001 B 組 8 例 8.7135±0.1506 1.9943±0.4835 6.7192±0.4458 C 組 8 例 8.6701±0.1724 6.1193±0.2733 2.5508±0.3526 D 組 8 例 8.6758±0.1133 3.1815±0.0723 5.4944±0.1058 E 組 8 例 8.6758±0.1133 7.6701±0.1724 1.0057±0.2420

2. 結(jié)果

根據(jù)細菌培養(yǎng)計數(shù)結(jié)果附表顯示：沖洗前五組根管內(nèi)細菌數(shù)量的差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。經(jīng)過沖洗后除0.9%NaCl(E 組)和3%雙氧水(C 組)外，其他三組均有效地降低了根管內(nèi)的細菌數(shù)量，較沖洗前細菌CFU 下降量差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。沖洗前后細菌差值的兩兩比較:B 組與A 組、D 組間差異有顯著性(P＜0.05)，A 組和D組間差異無顯著性(P＞0.05)。圖1-圖10 為各組在使用沖洗劑沖洗前、后根管內(nèi)糞腸球菌的培養(yǎng)圖片。

圖1 沖洗前(A 組)

圖2 沖洗后(A 組)

圖3 沖洗前(B 組)

圖4 沖洗后(B 組)

圖5 沖洗前(C 組)

圖6 沖洗后(C 組)

圖7 沖洗前(D 組)

圖8 沖洗后(D 組)

圖9 沖洗前(E 組)

圖10 沖洗后(E 組)

3. 討論

細菌一直被公認是根管及根尖周病損發(fā)展的主要致病因素[2，3]。成功的根管治療取決于徹底地化學機械清理牙髓組織，牙本質(zhì)碎片和感染的微生物。根管沖洗劑可以通過沖掉碎屑增加機械清理的效果，溶解組織并消毒根管系統(tǒng)?；瘜W清理尤其適用于復(fù)雜的牙齒內(nèi)部解剖結(jié)構(gòu)(如根管峽部)和易被機械清理遺漏的其他不規(guī)則區(qū)域[4]。

近年來，糞腸球菌的作用越來越受到口腔學者的關(guān)注。George 等[5]觀察到當糞腸球菌在營養(yǎng)充足且有氧的條件下生長時， 可形成結(jié)構(gòu)龐大、不規(guī)則的生物膜結(jié)構(gòu)， 而當營養(yǎng)缺乏時在生物膜中存在的鈣的水平會增加，這時細菌主要依靠周圍這種鈣化的基質(zhì)保護而在生物膜中長期存活。因糞腸球菌的直徑僅為0.5-1μm，而牙本質(zhì)小管的直徑平均為1-4μm ，所以糞腸球菌相對大多數(shù)細菌更易進入牙本質(zhì)小管[6]。所以本實驗建立糞腸球菌體外根管感染模型，并用傳統(tǒng)根管沖洗劑與MTAD 做對照。

根管沖洗劑是具有殺菌、溶解壞死組織作用的無刺激性水溶液，在根管機械預(yù)備時使用可增進根管內(nèi)細菌及碎屑的清除。幾十年來，多種不同濃度的次氯酸鈉被用作根管沖洗劑。次氯酸鈉的主要優(yōu)勢是它對壞死組織的溶解能力及對大多數(shù)微生物的抗菌性能[7]較強大。它的弊端是難聞的氣味、高毒性、不能去除玷污層[8]。次氯酸鈉的組織溶解能力及抗菌性能與其濃度有關(guān)，并受pH 值及溫度等影響在臨床上使用高濃度次氯酸鈉進行根管內(nèi)沖洗時需配合橡皮障[9]。0.2%濃替硝唑含漱液為抗厭氧菌藥，它可抑制細菌DNA 的合成，導(dǎo)致細菌死亡。3%H2O2是臨床上常用的根管沖洗劑，當其遇到有機物如：組織液、血液、膿液、細菌時，可釋放出新生態(tài)氧，使細菌體內(nèi)活性基團氧化，干擾細菌的酶系統(tǒng)，對厭氧菌的作用尤其明顯。因雙氧水與有機物接觸會很快釋放出氧而發(fā)生發(fā)泡現(xiàn)象，這種發(fā)泡作用有助于在器械擴挫根管時將血液、殘髓帶出，漂浮至表面便于清除。但其為酸性溶液，它對根尖周組織及黏膜有一定刺激作用，在臨床根管沖洗時如操作不當可引起皮下氣腫。MTAD 是一種以多西霉素、檸檬酸和清潔劑聚山梨醇酯80 為主要成分的沖洗劑，是一種新的有抗菌作用的根管沖洗劑，溶液呈酸性，pH 值為2.15，生物相容性好。Torabinejad 等[10]的體外研究，MTAD 稀釋200 倍可有效殺死糞腸球菌；次氯酸鈉稀釋32 倍以上就不具備抗菌作用；而EDTA 不具備任何抗菌作用。只有MTAD 在2-5min 內(nèi)可以殺死暴露在其內(nèi)的糞腸球菌。本實驗研究的MTAD 對感染根管消毒效果的研究結(jié)果與之前其他學者的報道相似[11]。MTAD 在消毒根管內(nèi)及牙根表面的能力主要取決于多西環(huán)素的抗菌效果，在檸檬酸的作用下多西環(huán)素可去除牙根表面的有機物和無機物，其效力取決于它的低PH、抗膠原酶活性及其結(jié)合牙本質(zhì)的能力。MTAD 里的清潔劑可幫助沖洗液進入根管和牙本質(zhì)小管。MTAD 通過清潔劑的作用可減少牙齒的表面張力，提高其在根管內(nèi)的抗菌性能[12-13]。有學者通過電鏡觀察發(fā)現(xiàn)MTAD 還有去除玷污層的能力[14-15]。所以綜合以上，MTAD 具有多種優(yōu)良性能。

本實驗在離體牙根管預(yù)備時分別用0.2%濃度替硝唑含漱液，MTAD 沖洗液，3%雙氧水，2.5%NaClO 和0.9%NaCl 沖洗，沖洗過程中每組使用的沖洗方法、器械、時間、藥量均相同，排除了這些因素對實驗結(jié)果可能造成的影響。結(jié)果顯示，MTAD 雖不能完全清除根管內(nèi)的糞腸球菌，但與其他根管沖洗劑比較沖洗前后CFU 的減少量較多，MTAD 沖洗液對根管內(nèi)糞腸球菌的抗菌性能明顯優(yōu)于其他組。但由于本次實驗選用的為根管系統(tǒng)相對簡單的單根管離體牙，且不能完全模擬患者口腔內(nèi)的細菌環(huán)境，所以MTAD 在人體內(nèi)對抗糞腸球菌是否具備優(yōu)越抗菌效果還有待于進一步研究。

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