雞嗉子葉揮發(fā)油成分的GC-MS分析

孫 晶,谷林茂,謝小燕,李桂香

(1.曲靖醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校 藥學(xué)系，云南 曲靖 655000；2.云南中醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，云南 昆明 650200)

雞嗉子葉揮發(fā)油成分的GC-MS分析

孫 晶1,谷林茂1,謝小燕2,李桂香1

(1.曲靖醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校 藥學(xué)系，云南 曲靖 655000；2.云南中醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，云南 昆明 650200)

利用水蒸氣蒸餾法提取雞嗉子葉的揮發(fā)性成分，采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)技術(shù)對其化學(xué)成分進行分離分析，并用色譜峰面積歸一化法測定各成分的相對含量.通過計算機檢索，鑒定出51個化學(xué)成分，其中主要成分為5,6,7,8,9,10-六氫-6,7,8,9-四氧合-2-吩嗪甲酸(17.357%)、十八醛(11.042%)、2-氟代-N-[2-(2-糠基氨基)-乙氧羰基]苯甲酰胺(9.371%)、二十烷(6.970%)、1-甲基-5硝基吡唑(4.589%)、β-紫羅蘭酮(2.441%)、10-甲基二十烷(3.463%)、乙酸橙花叔醇酯(2.058%).

雞嗉子； 揮發(fā)油； 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用

雞 嗉 子 (Dendrobenthamiacapitata(Wall.)Hutch.) 是山茱萸科四照花屬植物，又稱頭狀四照花、野荔枝、山覆盆.在我國主要分布于廣西、云南、貴州、四川、西藏、浙江、湖南等地[1].雞嗉子為藥、食兩用樹種，果實營養(yǎng)豐富，味甜可生食，亦可釀酒、制醋；雞嗉子的葉、 花、 果均可入藥.雞嗉子葉是彝族常用藥， 臨床應(yīng)用已久，有清熱解毒、利水消腫、消積殺蟲的功效，可治小兒疳積、蟲積腹痛、肝炎、腹水等癥，外用可治水火燙傷、外傷出血等癥[2].目前，關(guān)于雞嗉子的研究多集中在栽培技術(shù)上，作為民間常用草藥，雞嗉子的藥用和食用研究很少.僅有少量相關(guān)文獻報道雞嗉子葉中含有黃酮、 三萜、環(huán)烯醚萜、 甾醇、多酚和有機酸等化學(xué)成分[3-4]，而雞嗉子葉揮發(fā)性成分的組成、含量尚未見報道.為系統(tǒng)地了解雞嗉子葉的化學(xué)成分，文中用水蒸氣蒸餾方法提取雞嗉子葉的揮發(fā)油成分，采用GC-MS聯(lián)用手段分離、鑒定其中含有的化合物，并利用氣相色譜峰面積歸一化法確定各成分相對含量，為進一步探究雞嗉子葉有效化學(xué)成分及其藥用生物活性提供必要的實驗數(shù)據(jù).

1 實驗

1.1 樣品、儀器與試劑

樣品：雞嗉子葉采自云南尋甸鐘靈山，由曲靖醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校中藥學(xué)老師李桂香鑒定.

儀器：揮發(fā)油提取器；RE52CS-1旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；美國Bruker公司SCION SQ氣質(zhì)聯(lián)用儀 .

試劑：無水乙醚、無水硫酸鈉均為分析純.

1.2 揮發(fā)油的提取

根據(jù)2010版中國藥典附錄XD方法提取揮發(fā)油[5].取粉粹后的雞嗉子葉200 g，置于2 000 mL圓底燒瓶中，加水1 600 mL，搖勻浸泡1 h，水蒸氣蒸餾6 h，至測定器中油量不再增加.冷卻后油層用無水乙醚萃取4次，合并萃取液用無水硫酸鈉干燥過濾，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙醚.得到有芳香氣味的淡黃色透明油狀雞嗉子葉揮發(fā)油，-4 ℃下保存.

1.3 GC-MS條件

GC-MS分析條件考察：由于雞嗉子葉揮發(fā)油成分，極性不是很大.在預(yù)試驗中,對比采用色譜柱HP-5MS (30 m×0.25 mm×250 μm)，綜合各色譜峰的分離效果、峰個數(shù)和穩(wěn)定性等因素, 發(fā)現(xiàn)DB-35柱分離效率較高，因此確定使用DB-35(30 m×0.25 mm×0.25 μm)石英毛細管柱.取雞嗉子葉揮發(fā)油供試液,對升溫程序進行考察.柱初始溫度為50 ℃，以2 ℃/min不同升溫程序升至150 ℃，再分別以3 ℃/min不同升溫程序升至300 ℃進行考察.結(jié)果顯示以第1次程序升溫為5 ℃/min，第2次程序升溫為8 ℃/min時各主要成分色譜峰的分離效果較好.最終確定升溫程序為：色譜柱初始溫度50 ℃，以5 ℃/min升至150 ℃,再以8 ℃/min升至300 ℃.其他實驗參數(shù)均參照相關(guān)文獻[6-8].

氣相色譜條件：色譜柱：DB-35毛細管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm)；載氣為氦氣；升溫程序：初始溫度50 ℃，5 ℃/min升至150 ℃，再以8 ℃/min升至300 ℃，保持20 min.進樣口溫度：250 ℃.進樣量：1μL，分流進樣，分流比為20∶1；溶劑延遲：3 min.

質(zhì)譜條件：EI源，180 ℃，電子電壓：70 eV，傳輸線溫度：250 ℃，質(zhì)量范圍(m/z)：45～550，譜庫：NIST2011.

2 結(jié)果與分析

運用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用手段對雞嗉子葉揮發(fā)性成分進行了分析，經(jīng)過計算機質(zhì)譜數(shù)據(jù)系統(tǒng)檢索(NIST庫)，同時結(jié)合有關(guān)質(zhì)譜圖文獻解析以及保留時間，鑒定了51個化合物，占提取物總量的92.218%，總離子流圖(見圖1).按峰面積歸一化法計算揮發(fā)油中各成分的相對百分含量，結(jié)果見表1.

表1 雞嗉子葉揮發(fā)油中化學(xué)成分

(續(xù)表)

編號保留時間/min化合物名稱分子式相對百分含量/%1010 3甲基紫羅蘭酮C13H20O0 0981110 44亞丁基二環(huán)己烷C16H300 2541210 512，6，10，14-四甲基十七烷C21H440 1731310 772-異丙基-5-甲基環(huán)己基-4-甲基苯磺酸C17H26O3S0 2571411 1古巴烯C15H241 0821511 351-甲基氯乙酸庚酯C10H19O2Cl0 1461611 81溴癸烷C10H21Br0 2931711 96石竹烯C15H240 7311812 05畢澄茄烯C15H240 1181912 19大馬士酮0 3022012 63α-紫羅蘭酮C13H20O0 3152112 73香葉基丙酮C13H22O0 7382212 86(Z，E)-3，7，11-三甲基-1，3，6，10-十二碳四烯C15H242 0512313 1依蘭油烯C15H240 8542413 39(+)-δ-杜松烯C15H240 5762513 5β-紫羅蘭酮C13H20O2 4412613 68(2Z，6E)-3，7，11-三甲基-2，6，10-十二碳三烯-1-醇C15H26O0 9022713 8乙酸橙花叔醇酯C17H28O22 0582814 191-(2-異亞丙基環(huán)丙基)-4-甲基苯C13H160 7472914 32十五醛C15H30O1 4053014 463-(2-戊烯)-1，2，4-環(huán)戊三酮C10H12O31 4763114 71，3，3-三甲基-2-(2-甲基-環(huán)丙基)環(huán)己烯C13H220 243214 79順-7，10，13-十六碳三烯醛C16H26O0 6913314 95反-9-十六碳烯-1-醇C16H32O0 4453415 14蓽澄茄油烯醇C15H26O0 863515 41杜松醇C15H26O0 6393615 47十八醛C18H36O11 0423715 6摩勒醇C15H26O0 7223816 01十四酸C14H28O20 6493916 66，10，14-三甲基-2-十五烷酮C18H36O1 7364017 412，6，10，14-四甲基十七烷C21H441 6314117 87(9Z，12Z，15Z)-9，12，15-十八碳三烯-1-醇C18H32O1 5494218 145，6，7，8，9，10-六氫-6，7，8，9-四氧合-2-吩嗪甲酸C13H6O6N217 3574318 3910-甲基二十烷C21H443 4634418 83(2E，6E，10E)-3，7，11，15-四甲基-2，6，10，14-十六碳四烯-1-醇乙酸酯C22H36O21 6464519 312-氟代-N-[2-(2-糠基氨基)乙氧羰基]苯甲酰胺C14H13O3N2F9 3714619 79(2Z，6E)-3，7，11-三甲基-2，6-十二碳二烯-1-醇C15H28O0 2764720 05順-13，16-二十二碳二烯酸C20H420 344820 27亞麻酸C18H30O21 3754921 05二十烷C20H426 975021 361-溴二十四烷C24H49Br1 615121 461α-(環(huán)己基甲基)-4β-乙基環(huán)己烷C15H281 99

由表1可知，雞嗉子葉揮發(fā)油的成分主要為有機酸類、醛類、醇類、酮類、烯烴類、酯類及其他一些化合物.相對含量較高的成分有5,6,7,8,9,10-六氫-6,7,8,9-四氧合-2-吩嗪甲酸(17.357%)、十八醛(11.042%)、2-氟代-N-[2-(2-糠基氨基)乙氧羰基]苯甲酰胺(9.371%)、二十烷(6.970%)、1-甲基-5-硝基吡唑(4.589%)、β-紫羅蘭酮(2.441%)、10-甲基二十烷(3.463%)、乙酸橙花叔醇酯(2.058%)等.其中十八醛為常用的食品香料，具有椰子型香氣，可用作食品香料以及高級化妝品調(diào)香用的香料.橙花叔醇酯作為重要的香料品種，已廣泛應(yīng)用于日用化工、食品、醫(yī)藥等行業(yè).天然吩嗪化合物具有廣譜的抗菌、抑菌活性，不僅對小麥、水稻等農(nóng)作物的病原菌有顯著作用，還可用于肺結(jié)核、白血病、結(jié)核桿菌和非典型耐酸桿菌及麻風病等疾病的治療，在醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)領(lǐng)域越來越受到重視[9].氟代苯甲酰胺衍生物對癌細胞有一定的抑制作用[10].因此雞嗉子葉中含量較多的2種成分，5,6,7,8,9,10-六氫-6,7,8,9-四氧合-2-吩嗪甲酸和2-氟代-N-[2-(2-糠基氨基)-乙氧羰基]苯甲酰胺，其生物活性得進一步探究.β-紫羅蘭酮不僅是一種重要的香料，也是合成維生素A的重要原料，也有研究表明其對癌細胞的發(fā)生和發(fā)展有明顯地抑制作用[11].

3 結(jié)語

采用GC-MS法對雞嗉子葉揮發(fā)油的化學(xué)成分進行研究，方法靈敏度高，是揮發(fā)油分離分析的首選方法.通過對雞嗉子葉揮發(fā)性成分含量和有效成分的分析評價，為進一步探究雞嗉子的生物活性成分奠定了基礎(chǔ)，為雞嗉子資源深度開發(fā)和綜合利用提供了科學(xué)依據(jù).

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(責任編輯 王 琳)

GC-MS analysis of chemical components of the volatile oil fromDendrobenthamiacapitata(Wall.)Hutch

SUN Jing1,GU Lin-mao1,XIE Xiao-yan2，LI Gui-xiang1

(1.Department of Pharmacy,Qujing Medical College,Qujing 655000,China; 2.Department of Pharmacy,Yunnan University of Traditional Chinese Medicine,Kunming 650200,China)

The chemical components of the essential oil in the leaves ofDendrobenthamiacapitata(Wall.)Hutch.were extracted by water stream distillation and analyzed by GC-MS.The relative contents of the chemical components were calculated by the chromatographic peak area normalization method.Fifty-one chemical compounds were identified from the essential oil ofDendrobenthamiacapitata(Wall.)Hutch.The main compounds were 5,6,7,8,9,10-hexahydro-6,7,8,9-tetraoxo-2-phenazinecarboxylicacid(17.357%),octadecanal(11.042%),2-fluoro-N-[2-(2-furfurylamino)-2-oxoethyl]benzamide(9.371%),eicosane(6.970%),1-methyl-5-nitropyrazole(4.589%),β-ionone (2.441%),10-methyl eicosane (3.463%),and nerolidyl acetate(2.058%).

Dendrobenthamiacapitata(Wall.)Hutch.;volatileoil;gas chromatography-mass spectrometry

2015-04-10.

云南省教育廳科學(xué)研究基金(2013Y526).

孫晶(1980-)，女，碩士，講師. 主要研究方向：天然產(chǎn)物活性成分分離分析.

R284.2

A

1672-8513(2015)04-0266-04