末梢血與靜脈血紫外速率法檢測(cè)G－6－PD活性的比較和應(yīng)用*

梁?jiǎn)袒?，黃玉庭

(1．廣西壯族自治區(qū)來(lái)賓市婦幼保健院檢驗(yàn)科，廣西來(lái)賓 546100 2．廣西壯族自治區(qū)來(lái)賓市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西來(lái)賓 546100)

臨床檢驗(yàn)

末梢血與靜脈血紫外速率法檢測(cè)G－6－PD活性的比較和應(yīng)用*

梁?jiǎn)袒?，黃玉庭2

(1．廣西壯族自治區(qū)來(lái)賓市婦幼保健院檢驗(yàn)科，廣西來(lái)賓 546100 2．廣西壯族自治區(qū)來(lái)賓市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西來(lái)賓 546100)

目的:比較同一患者末梢血與靜脈血紫外速率法檢測(cè)G－6－PD活性的結(jié)果差異，評(píng)估末梢血標(biāo)本直接速率法測(cè)定G－6－PD的可行性。方法:靜脈血標(biāo)本使用EDTA－K2抗凝，離心沉淀吸取紅細(xì)胞溶血后速率法檢測(cè)。末梢血標(biāo)本混勻溶血離心沉淀后取上清液速率法檢測(cè)，同時(shí)測(cè)定其血常規(guī)，得其壓積，測(cè)得的結(jié)果除以其壓積。結(jié)果:兩種標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果比對(duì)顯示，末梢血標(biāo)本結(jié)果比靜脈血標(biāo)結(jié)果均偏高(24±4)%。末梢血標(biāo)本結(jié)果乘以0．76較正后，兩組結(jié)果高度的一致，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算差異無(wú)顯著性(P＞0．05)。結(jié)論:直接速率法測(cè)定G－6－PD過(guò)篩實(shí)驗(yàn)中，末梢血樣本也可以直接測(cè)定G－6－PD，通過(guò)如下計(jì)算得結(jié)果:G－6－PD活性濃度=末梢血結(jié)果/紅細(xì)胞壓積×0．76。該方法適合在標(biāo)本不便采集或患者不想抽血時(shí)使用，更適合于兒童醫(yī)院，婦幼保健院等常采手指血(末梢血)的醫(yī)院使用。

G－6－PD活性濃度;末梢血;靜脈血;壓積紅細(xì)胞hct

G－6－PD缺乏癥，俗稱蠶豆病，是一種染色體異常的遺傳性溶血性疾病，是新生兒黃疸的重要原因。對(duì)于可疑患者或產(chǎn)前檢查，醫(yī)生常會(huì)在檢查血常規(guī)同時(shí)檢查G－6－PD活性，通過(guò)篩查，可以指導(dǎo)用藥，有效預(yù)防溶血癥的發(fā)生，進(jìn)行婚前體檢和產(chǎn)前檢查對(duì)優(yōu)生優(yōu)育和有效預(yù)防新生兒黃疸有重要意義。目前對(duì)G－6－PD的檢測(cè)方法主要是用生物化學(xué)方法，包括高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)，熒光斑點(diǎn)法，NBT定量比值法等手工方法，直接紫外速率法具有標(biāo)本前處理簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便快速，重復(fù)性好，便于上機(jī)全自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，所以得以廣泛使用。由于該方法是測(cè)定壓積紅細(xì)胞中的G－6－PD活性濃度，要求采集靜脈血，對(duì)于兒童或新生兒，或者不便抽血的患者就比較麻煩。經(jīng)收集我院門(mén)診及住院360例病人做分析對(duì)象，以靜脈血標(biāo)本為對(duì)照，末梢血標(biāo)本為分析對(duì)象，做這兩組標(biāo)本的比對(duì)，比對(duì)顯示:末梢血標(biāo)本結(jié)果均偏高(24±4)%。末梢血標(biāo)本結(jié)果乘以0．76較正后，各濃度區(qū)間兩組結(jié)果有高度的一致性，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算差異無(wú)顯著性(P＞0．05)。結(jié)論是速率法G－6－PD過(guò)篩實(shí)驗(yàn)中，末梢血可以作為樣品直接檢測(cè)，也就是不需抽取靜脈血，采集手脂血(末梢血)結(jié)合血常規(guī)計(jì)算(G－6－PD活性濃度=末梢血結(jié)果/紅細(xì)胞壓積×0．76)，也可以達(dá)到過(guò)篩的目的。本法特別適合各級(jí)兒童醫(yī)院，婦幼保健院等不便或不想采集靜脈血的檢查對(duì)象。

1 資料與方法

1．1 臨床資料

1．1．1 儀器:日本日立7600－010全自動(dòng)生化分析儀，希森美康4000I全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀，820臺(tái)式離心機(jī)，計(jì)算器，微量吸樣器。

1．1．2 試劑:①利德曼公司生產(chǎn)的G－6－PD檢測(cè)試劑盒(直接紫外分光法)，前處理溶解紅細(xì)胞的溶液為蒸溜水②檢測(cè)紅細(xì)胞壓積所用的試劑為希森美康全自動(dòng)血液分析儀診斷用試劑。

1．1．3 標(biāo)本來(lái)源360例我院門(mén)診、住院病人，男女比為1:1，其中0～10歲251例，10～60歲76例，60歲以上33例。WBC＜20×109L－1的266例，WBC20～25×109L－1的34例，WBC25～30×109L－1的25例，WBC＞30× 109L－1的35例，EDTA－K2抗凝靜脈血和抗凝末梢全血。質(zhì)控品是利德曼公司提供的多項(xiàng)生化質(zhì)控品［1］。

1．2 方法

1．2．1 靜脈血標(biāo)本:采集病人EDTA－K抗凝全血，在3000轉(zhuǎn)/min條件下，離心5min，去掉上清液，取下層壓積紅細(xì)胞20微升加入1mL去離子水中(稀釋51倍)，充分混勻待紅細(xì)胞完全溶解后(15～30min)上機(jī)測(cè)定。儀器測(cè)得的結(jié)果為靜脈血離心壓積紅細(xì)胞的G－6－PD活性濃度。

1．2．2 未梢血標(biāo)本:采集該病人的抗凝末梢全血10微升，直接加入500微升去離子水中(稀釋51倍)，充分混勻待紅細(xì)胞完全溶解后，在3000轉(zhuǎn)/min條件下，離心5min，取上清液上機(jī)測(cè)定。采集該病人的抗凝末梢全血60微升，全自動(dòng)血球儀測(cè)血常規(guī)，得其血紅細(xì)胞壓積。生化儀測(cè)得的結(jié)果÷壓積=未梢血壓積紅細(xì)胞的G－6－PD活性濃度兩種方法最終結(jié)果應(yīng)在試劑廠家給的線性泛圍內(nèi)(0～1500U/L)，否則稀釋后再檢測(cè)［2］。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:初步統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)末梢血標(biāo)本結(jié)果均比靜脈血標(biāo)本結(jié)果偏高(24±4)%，為了使兩組結(jié)果有更直觀比較，梢血標(biāo)本結(jié)果乘0．76較正。360例檢測(cè)結(jié)果，以靜脈血標(biāo)本結(jié)果為參考方，末梢血標(biāo)本結(jié)果乘0．76較正后為分析方，做兩種標(biāo)本結(jié)果的比對(duì)，以簡(jiǎn)明統(tǒng)計(jì)．EXE軟件統(tǒng)計(jì)分析，采用配對(duì)設(shè)計(jì)的t檢驗(yàn)，求出P值，P＞0．05為差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 經(jīng)t檢驗(yàn)，不同G－6－PD活性濃度區(qū)間的兩種方法檢測(cè)結(jié)果對(duì)比，P值均大于0．05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見(jiàn)表1)。

表1 WBC＜20×109L－1時(shí)不同G－6－PD活性濃度區(qū)間的兩種方法檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

2．2 精密度檢測(cè):同一對(duì)象平行10次測(cè)定重復(fù)性:靜脈血標(biāo)本精密度相對(duì)平均偏差為9．2%，末梢血標(biāo)本精密度相對(duì)平均偏差為4．6%，末梢血標(biāo)本精密度較好。

3 討論

直接紫外速率法是檢測(cè)壓積紅細(xì)胞上的G－6－PD活性濃度，壓積紅細(xì)胞可以通過(guò)離心沉淀取得，也可通過(guò)儀器測(cè)量得到，未梢血標(biāo)本只是相當(dāng)于稀釋過(guò)的離心壓積紅細(xì)胞的再次檢測(cè)，稀釋的倍數(shù)就是其紅細(xì)胞壓積，兩種做法相當(dāng)于相同的方法學(xué)不同的標(biāo)本前處理而已，所以這兩種結(jié)果之間有必然的相關(guān)性［3］。在日常靜脈血標(biāo)本檢測(cè)操作過(guò)程中，離心機(jī)的轉(zhuǎn)速，離心時(shí)間都可以按試劑說(shuō)明操作容易做到，但在吸樣過(guò)程中誤差較大，比如病人的血粘稠度較大時(shí)吸樣就比較困難，有可能吸樣就不足，離心后上清液如吸得不干靜，吸樣時(shí)就有可能混入較多血漿，吸樣時(shí)動(dòng)作過(guò)大過(guò)快等也會(huì)影響吸樣準(zhǔn)確性。相比之下，血常規(guī)測(cè)得的壓積是比較真實(shí)可靠的，存在人為因素較少。兩種不同的紅細(xì)胞壓積就使得這兩種做法結(jié)果有一定偏差，同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，這種偏差是相對(duì)穩(wěn)定的，偏差(24± 4)%。在廠家確定的線性范圍，參考范圍內(nèi)。為了使兩種標(biāo)本結(jié)果有可比性，有相同的參考范圍，末梢血法結(jié)果要剩以0．76較正。這個(gè)較正數(shù)大小因?qū)嶒?yàn)室工作環(huán)境和操作習(xí)慣而有些差別。在末梢全血中，主要包括含有紅細(xì)胞之外還有白細(xì)胞和血小板，血漿等物質(zhì)。應(yīng)考慮其基質(zhì)效應(yīng)［4］。經(jīng)過(guò)多次實(shí)驗(yàn)和對(duì)比顯示，白細(xì)胞干擾對(duì)檢測(cè)影響最大。所以末梢血標(biāo)本溶血后必須離心沉淀，去掉白細(xì)胞等雜質(zhì)干擾，取上清液檢測(cè)，而靜脈血標(biāo)本離心沉淀后紅白細(xì)胞分層分開(kāi)，吸樣時(shí)受白細(xì)胞影響較少，可直接檢測(cè)。黃疸血漿、脂濁血漿對(duì)結(jié)果有影響，但在可接受的范圍內(nèi)(要求相對(duì)偏差＜10%)［5］。綜合比較，婦幼保健院，兒童醫(yī)院的檢測(cè)對(duì)象主要是新生兒，嬰幼兒和新婚夫婦等，主要是做篩查，日常檢查血常規(guī)主要是采未梢血，采集靜脈血比較困難，病人也不易接受［6］。多數(shù)情況下臨床醫(yī)師檢查血常規(guī)同時(shí)希望可以同時(shí)篩查一下G－6－PD活性濃度。所以采用未梢血法比較適合兒童醫(yī)院，婦幼保健院等臨床工作特點(diǎn)，所以未梢血標(biāo)本也是可以作為檢測(cè)樣品的，該做法的缺點(diǎn)是需要同時(shí)做血常規(guī)檢查［7］。

［1］童若春，陶元鋆，倪福椿，等．紅細(xì)胞G－6PD缺陷幾種實(shí)驗(yàn)診斷方法的評(píng)價(jià)［J］．臨床檢驗(yàn)雜志，1988，(3):146～147．

［2］羅建明，唐霞．高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)的再改進(jìn)［J］．中華血液學(xué)雜志，1998，(10):547～548．

［3］蔡旗，沈玉才，張棟武．臍血G－6－PD活性檢測(cè)對(duì)新生兒黃疸早期干預(yù)的價(jià)值［J］．中國(guó)婦幼保健，2002，17(9): 548～549．

［4］吳梓梁，余偉棟，陳順存，等．紅細(xì)胞葡萄糖6－磷酸脫氫酶活性不同檢測(cè)法的評(píng)價(jià)［J］．廣州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1990，18 (3):41～46．

［5］賈璋林，楊發(fā)達(dá)，謝煜楠，等．不同溶血方法對(duì)葡萄糖－6－磷酸脫氫酶活性影響的研究［J］．國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，32(3):372～374．

［6］梁棟偉，區(qū)麗群．生化儀直接測(cè)定G－6－PD活性的臨床應(yīng)用［J］．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2007，4(8):709～710．

［7］賈璋林，楊發(fā)達(dá)，譚桂彩，等．葡萄糖6－磷酸脫氫酶活性濃度檢測(cè)法的初步研究［J］．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2008，5 (2):65～67．

Comparison and Application of Detection of G－6－PD Activity in Peripheral Blood and Venous Blood of UV Rate M ethod

LIANGQiaohui，HUANG Yuting
(The Maternal and Child Health Care Hospital of Laibin，Guangxi Laibin 546100，China)

Objective:By detecting the G－6－PD activity in peripheral blood and venous blood of the same patientswith themethod of UV rate，to compare the differences of the results，and assess the feasibility that the G－6－PD activity of peripheral blood specimens detected by the directly ratemethod．Method:Firstly，venous blood samples use EDTA－K2 anticoagulation，then draw the red cell after centrifuge and dissolove it to detect by the ratemethod．That on the one hand，centrifugate the peripheral blood samples aftermixing，and draw the supernatant fluid to detect by the ratemethod，at the same time，do the blood routine examination and obtain the hematocrit，then the hematocrit is divided by themeasured results．Result:After comparing the two specimens of the test results，It showed that the peripheral blood sampleswas(24±4)%higher than the venous blood specimens．When the test results of the peripheral blood samplesweremultiplied by 0．76，the two test results will be highly consistent，and there was no significant difference after statistics calculation(P＞0．05)．Conclusion:The screening test of detecting the G－6－PD activity by the direct velocity method shows thatwe can detect the G－6－PD activity of the peripheral blood samples instead of the venous blood samples in some cases．The results calculated as follows:Concentration of G－6－PD activity=(The test results of the peripheral blood/HCT)×0．76．Thismethod is suitable for patients in convenient to collect or when the patients don’twant to draw the blood samples，it＇smore suitable for Children＇s Hospital，Maternal and Child Care Centre and so on where often collect the finger blood．

G－6－PD activity concentration;The peripheral blood method;The venous blood method;RBC hct

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B

10．3969/j．issn．1006－6233．2015．08．066

廣西壯族自治區(qū)科學(xué)研究與技術(shù)開(kāi)發(fā)計(jì)劃課題，(編號(hào):143618)

1006－6233(2015)08－1541－03