vW F Annexin5在子癇前期患者母血及臍血的表達及其與胎兒生長受限的關系*

任春麗，唐興國，劉玉蘭，韓冰，郭艷?。?/p>

(1.承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院，河北承德 067000 2.承德護理職業(yè)學院解剖教研室，河北承德 067000）

vW F Annexin5在子癇前期患者母血及臍血的表達及其與胎兒生長受限的關系*

任春麗1，唐興國2，劉玉蘭1，韓冰1，郭艷巍1＊＊

(1.承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院，河北承德 067000 2.承德護理職業(yè)學院解剖教研室，河北承德 067000）

目的：研究子癇前期患者外周母血及臍血中vWF、Annexin5的表達水平及與胎兒生長受限相關性，并探討子癇前期發(fā)病機理及其與胎兒生長受限的關系。方法：采用ELISA方法檢測子癇前期患者84例、FGR患者24例及對照組29例患者母血及臍血中vWF、Annexin5的表達水平。結果：①各組孕婦母血及臍血中vWF表達，子癇前期各組均高于健康孕婦組，差異有統計學意義(P＜0.01）。且早發(fā)重度型＞晚發(fā)重度型＞輕度子癇前期患者，差異仍有統計學意義(P＜0.05）。各組與FGR組比較，FGR組高于對照組及輕度組，且分別比較差異有統計學意義(P＜0.01）。早發(fā)重度型＞FGR組＞晚發(fā)重度型，但差異均無統計學意義(P＞0.05）。②各組母血及臍血中annexin 5的蛋白表達均低于健康孕婦組，差異均有高度統計學意義(P＜0.01）。早發(fā)重度組＜晚發(fā)重度組＜輕度組，但母血中晚發(fā)重度組與輕度組比較，差異無統計學意義(P＞0.05）。各組與FGR組比較，FGR組母血及臍血中表達水平均低于對照組、輕度組及晚發(fā)重度組，差異均有統計學意義(P＜0.01）。③子癇前期各組及FGR組患者外周血中vWF與Annexin5的表達均呈明顯負相關(P＜0.01）;子癇前期各組及FGR組患者臍血中vWF與Annexin5的表達均呈明顯負相關(P＜0.01）;vWF子癇前期各組及FGR組在孕婦外周血與臍血中的表達均呈明顯正相關(P＜0.01）;Annexin 5子癇前期各組及FGR組在孕婦外周血與臍血中的表達均呈明顯正相關(P＜0.01）。結論：患者母血及臍血中vWF、Annexin 5的表達可能與子癇前期發(fā)病機制有關，通過影響胎盤中凝血－纖溶系統及血管內皮系統，參與子癇前期及胎兒生長受限發(fā)生、發(fā)展的病理生理過程。

子癇前期;vWF;Annexin 5;胎兒生長受限

子癇前期是威脅孕產婦生命安全主要原因。而子癇前期并發(fā)胎兒生長受限(FGR）一直受到產科專家的高度關注，而FGR已被列入目前我國婦產科學及williams產科學的子癇前期嚴重程度分類中重度子癇前期的診斷條件之一。子癇前期基本病理生理改變?yōu)槿硇⊙墀d攣，內皮損傷及局部缺血［1］。血管性假血友病性因子(von Willbrand Factor，vWF）是血管內皮損傷重要的標記物，膜聯蛋白5(annexin 5）是通過凝血系統和抗凝血系統的失衡導致胎盤組織缺血缺氧，本研究旨通過檢測子癇前期患者母血及臍血中的vWF及Annexin 5水平，探討vWF、Annexin 5與子癇前期發(fā)病機理及其與FGR的關系。

1 資料與方法

1.1 資料來源及分組：選取產科2010年10月至2011年10月住院的患者113例，其中子癇前期患者84例，分為輕度子癇前期組(mPE）29例，年齡(28.17±3.73）歲，孕周(37.76±1.07）周;早發(fā)型重度子癇前期組(EOSP）27例，年齡(29.41±5.59）歲，孕周(30.99±1.36）周;晚發(fā)型重度子癇前期組(LOSP）28例，年齡(29.00±4.24）歲，孕周(36.53±1.35）周;其中發(fā)生FGR患者24例，年齡(29.63±5.04）歲，孕周孕周(33.02±3.11）周;另外，選取健康孕婦29例行剖宮產者為對照組，年齡(28.72±4.69）歲，孕周(39.31±0.74）周?；颊吣挲g在子癇前期各組及FGR組與對照組比較，差異均無統計學意義(P＞0.05）。早發(fā)型子癇前期孕周界定為32周。子癇前期及胎兒生長受限的診斷標準均參照謝幸，茍文麗主編《婦產科學》第8版的診斷標準［1］。

1.2 方法

1.2.1 標本采集與處理：母血采集方法：外周血漿標本為肘靜脈血4mL，在治療前或剖宮產前無宮縮時采集。臍血采集方法：剖宮產術中斷臍后，取臍血漿標本4mL。處理方法：加0.109moL/L枸櫞酸鈉0.3ml抗凝，離心15min，4℃，3000r/rain，分離血漿，置－70℃冰箱保存，同批待測。

1.2.2 檢測方法：母血及臍血的兩種因子均采用ELISA方法按試劑盒嚴格操作，在450nm處測得吸光度(A）值，A值為縱坐標，橫坐標為標準物的濃度，繪制標準曲線，根據各A值換算出相應的水平。

1.3 統計學方法：所有數據采用SPSS19.0統計軟件進行分析處理，對數據進行正態(tài)性檢驗和方差分析，多個獨立樣本均數比較，采用單向方差分析，SNK法進行多組問多重比較。采用偏相關分析進行相關性分析。P≤0.05為有統計學意義。

2 結果

各組母血臍血中vWF Annexin5表達水平，見表1。

表1 各組母血臍血中vWF Annexin5表達水平比較(ng/mL）

2.1 vWF在各組患者母血及臍血中的表達

2.1.1 外周血中vWF表達：子癇前期各組表達均高于對照組，差異均有高度統計學意義(P＜0.01）;且子癇前期各組：mPE、ESOP及LOSP比較，分別比較，差異仍有統計學意義(P＜0.01）。各組與FGR組比較，FGR組高于對照組及輕度組，差異有高度統計學意義(P＜0.01）。但早發(fā)重度型＞FGR組＞晚發(fā)重度型，但分別比較，差異均無統計學意義(P＞0.05）。

2.1.2 臍血中vWF表達：子癇前期各組表達水平均明顯高于對照組，分別比較，差異均有統計學意義(P＜0.01）。且子癇前期各組：mPE、ESOP及LOSP分別比較，差異仍有統計學意義(P＜0.05）。各組與FGR組比較，FGR組高于對照組及輕度組，且分別比較差異有高度統計學意義(P＜0.01）。但ESOP組＞FGR組＞LOSP組，但分別比較，差異均無統計學意義(P＞0.05）。

2.2 Annexin5在各組患者母血及臍血中的表達

2.2.1 外周血中Annexin 5的表達：子癇前期各組均低于對照組，分別比較，差異均有高度統計學意義(P＜0.01）。子癇前期患者中，輕度組與早發(fā)重度組;早發(fā)重度組與晚發(fā)重度組比較，兩組分別比較，差異均有統計學意義(P＜0.01）。但輕度組與晚發(fā)重度組比較，差異無統計學意義(P＞0.05）。各組與FGR組比較，FGR組annexin 5的表達水平均低于輕度組、晚發(fā)重度組、對照組，分別與各組比較，差異均有統計學意義(P＜0.01）。但FGR組與早發(fā)重度組比較，差異無統計學意義(P＞0.05）。

2.2.2 臍血中Annexin 5表達：子癇前期各組均低于健康孕婦組，分別比較，差異均有高度統計學意義(P＜0.01）。ESOP組＜LOSP組＜mPE組，兩兩分別比較，差異均有統計學意義(P＜0.01）。各組與FGR組比較，FGR組表達水平低于輕度組、晚發(fā)重度組、對照組，分別與各組比較，差異均有統計學意義(P＜0.01）。但FGR組與ESOP組比較，差異無統計學意義(P＞0.05）。

2.3 子癇前期組及FGR組患者外周母血及臍血中vWF、Annexin5水平的相關性

2.3.1 子癇前期各組及FGR組孕婦外周血中vWF與Annexin5的表達均呈明顯負相關(P＜0.01），輕度組r =－0.778，P＜0.01;早發(fā)重度組r=－0.711，P＜0.01;晚發(fā)重度組r=－0.375，P＜0.05;FGR組r=－0.685，P＜0.01;而對照組則無明顯相關r=－0.031，P＞0.05。見圖1。

2.3.2 子癇前期各組及FGR組患者臍血中vWF與Annexin5的表達均呈明顯負相關(P＜0.01），其中輕度組r=－0.930，P＜0.01;早發(fā)重度組r=－0.742，P＜0.01;晚發(fā)重度組r=－0.845，P＜0.01;FGR組r=－0.851，P＜0.01;而對照組則無明顯相關r=－0.206，P＞0.05。見圖2。

2.3.3 vWF子癇前期各組及FGR組在孕婦外周血與臍血中的表達均呈明顯正相關(P＜0.01），其中輕度組r=0.818，P＜0.01;早發(fā)重度組r=0.826，P＜0.01;晚發(fā)重度組r=0.622，P＜0.01;FGR組r=0.890，P＜0.01;而對照組則無明顯相關r=0.133，P＞0.05。見圖3。

2.3.4 Annexin 5子癇前期各組及FGR組在孕婦外周血與臍血中的表達均呈明顯正相關(P＜0.01），其中輕度組r=0.643，P＜0.01;早發(fā)重度組r=0.647，P＜0.01;晚發(fā)重度組r=0.554，P＜0.05;FGR組r=0.785，P＜0.01;而對照組則無明顯相關r=0.068，P＞0.05。見圖4。

圖1 外周母血vWF與Annexin5相關性

圖2 臍血vWF與Annexin5相關性

圖3 vWF在母血與臍血中表達的相關性

圖4 Annexin5在母血與臍血中表達的相關性

3 討論

3.1 vWF在子癇前期中與胎兒生長受限的關系：vWF是血管內皮損傷的敏感指標。由血管內皮細胞和巨噬細胞合成，分布于血漿、血管內皮細胞Weibel－Palade小體以及血小板a顆粒等。血漿內含量不多，當血管內皮細胞受損時，儲存在Weibel－Palade小體中vWF釋放入血增多，使血漿中vWF含量增高［2，3］。Parra CM等［4］研究表明，子癇前期患者發(fā)生內皮細胞及胎盤細胞損傷，致合體滋養(yǎng)細胞釋放vWF到胎盤絨毛間隙，引起子癇前期患者血漿中vWF明顯升高。Alpoim PN等［5］研究表明，重度子癇前期患者中vWF表達水平明顯升高，通過損傷血管內皮細胞引起子宮胎盤血流灌注減少，減少胎兒營養(yǎng)物質供應，引發(fā)胎兒生長受限。在本研究中，結果顯示子癇前期各組患者母體血漿及臍血中vWF水平均明顯升高，隨病情加重而增加，且胎兒生長受限組的vWF在母血與臍血中的表達相關系數最高，提示vWF參與子癇前期與胎兒生長受限發(fā)生。

3.2 Annexin5在子癇前期中與胎兒生長受限的關系： Annexin5是膜聯蛋白家族中研究最早，在人體內分布最廣的膜聯蛋白之一。在妊娠期間，annexin 5主要是由胎盤滋養(yǎng)細胞產生，在合體細胞滋養(yǎng)層中高表達。［6］子癇前期對胎兒最大的影響就是導致FGR或胎死宮內。研究發(fā)現，FGR發(fā)生與凝血功能失調引起的胎盤局部血栓、栓塞和血管床灌注不足及胎盤發(fā)育異常有關。Victor G等［7］研究顯示，子癇前期胎盤中annexin 5 mRNA表達水平明顯下降，隨著annexin5表達越低，低出生體重兒比例增加，子癇前期重度發(fā)病率亦明顯升高。有研究發(fā)現子癇前期患者Annexin5表達減少，引起胎盤高凝狀態(tài)，導致胎盤絨間血流灌注不足，從而引起宮內胎兒缺血、缺氧，導致FGR、胎兒窘迫，甚至胎死宮內。本研究顯示：子癇前期患者母血及臍血中Annexin5表達均明顯減少，但母血表達少于臍血。且胎兒生長受限組母血與臍血相關系數很高，表明Annexin5減少參與子癇前期及胎兒生長受限的發(fā)生。

［1］謝幸，茍文麗.婦產科學［M］.第8版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2013.65～66.

［2］Vischer U M，de Moerloose P.Von Willebrand factor：from cell biology to the clinicalmanagement of von Willebrand＇s disease［J］.Crit Rev Oncol Hematol，1999，30(2）：93～109.

［3］Rangarajan S.Von Willebrand factor－two sides and the edge of a coin［J］.Haemophilia，2011，17(1）：61～64.

［4］Parra Cordero M，Bosco C，Gonzalez J，et al.Immunohistochemical expression of von Willebrand factor in the preeclamptic placenta［J］.Journal ofMolecular Histology，2011，42(5）：459～465.

［5］Alpoim PN，Gomes KB，Godoi LC et al.ADAMTS13，FVIII，von Willebrand factor，ABO blood group assessment in preeclampsia［J］.Clinical Chimica Acta，2011，412(23/24）： 2162～2166.

［6］Elshamaa MF，Elghoroury EA，Helmy A.Intradialytic and postdialytic platelet activation，increased platelet phosphatidylserine exposure and ultrastructural changes in platelets in children with chronic uremia［J］.Blood Coagul Fibrinolysis，2009，20(4）：230～239.

［7］Victor Gourvas，Nikolaos Soulitzis，Anastasia Konstantinidou，et al.Reduced ANXA 5 mRNA and protein expression in pregnancies complicated by preeclampsia［J］.Thromb Res，2014，133(3）：495～500.

B

10.3969/j.issn.1006－6233.2015.06.015

1006－6233(2015）06－0925－05＊基金項目：河北省承德市科學技術研究與發(fā)展項目，(編號：20122140）

＊＊通訊作者