戈舍瑞林對前列腺組織微血管密度及血管內(nèi)皮生長因子影響的基礎(chǔ)研究*

黃洪，徐慶春，張源鋒，池澤湃，余慶鋒，張永海

(廣東省汕頭市中心醫(yī)院泌尿外科，廣東汕頭 515031）

戈舍瑞林對前列腺組織微血管密度及血管內(nèi)皮生長因子影響的基礎(chǔ)研究*

黃洪，徐慶春，張源鋒，池澤湃，余慶鋒，張永海＊＊

(廣東省汕頭市中心醫(yī)院泌尿外科，廣東汕頭 515031）

目的：探討戈舍瑞林對前列腺組織微血管密度(MVD）及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF）影響。方法：隨機(jī)選取60只雄性SD大鼠，并且隨機(jī)分成A、B、C、D、E、F六組;A組采取正常的飼養(yǎng)方式，其余各組均進(jìn)行隔日頸部皮下注射丙酸睪丸酮建立大鼠前列腺增生模型，在第29天時隨機(jī)選取一組(B）處死觀察模型是否建立成功，并取前列腺組織進(jìn)行HE染色;剩余各組中，C組灌注生理鹽水(15m L/kg），D、E、F每日給予等量的戈舍瑞林溶液灌胃(1.0mg/kg），分別持續(xù)1～3周后處死，觀察各組前列腺增生例數(shù)、前列腺重量、VEGF在前列腺組織中的表達(dá)、MVD在前列腺組織中的表達(dá)差異。結(jié)果：A、B、C、D、E、F六組大鼠中，A組正常飼養(yǎng)，結(jié)果大鼠前列腺沒有發(fā)生增生，B、C、D、E、F五組均有不同程度的前列腺增生，并且每組10只老鼠全部發(fā)生增生。B、C、D、E、F五組前列腺增生重量分別于A組比較，發(fā)現(xiàn)重量均明顯高于A組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05），五組之間采用單因素方差分析及組間比較差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05）;C、D、E、F四組前列腺增生模型大鼠中，C組未采用戈舍瑞林灌胃，其VEGF陽性細(xì)胞面積、MVD均顯著高于D、E、F三組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05）; D、E組間VEGF陽性細(xì)胞面積、MVD間差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05）;D、E兩組的VEGF陽性細(xì)胞面積、MVD均明顯高于采用戈舍瑞林灌胃時間更長的F組，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05）。結(jié)論：前列腺增生模型大鼠的前列腺組織微血管密度(MVD）及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF）表達(dá)水平明顯增高，戈舍瑞林能夠有效降低MVD、VEGF的表達(dá)水平。

戈舍瑞林;前列腺組織組織微血管密度;血管內(nèi)皮生長因子

前列腺增生是因前列腺體積發(fā)生進(jìn)行性增大而引發(fā)的一種疾病，該病發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，具有較高的發(fā)病率，會嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和健康［1］。因此，對前列腺增生的早期診斷和治療顯得尤為重要。研究表明［2］，機(jī)體內(nèi)激素水平平衡失調(diào)和前列腺增生的發(fā)生和發(fā)展關(guān)系密切［2］。其中，前列腺組織微血管密度(MVD）及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF）在前列腺增生病情的發(fā)生和發(fā)展中具有重要作用。本研究主要以60只健康成年的SD大鼠為研究對象，分析了戈舍瑞林對前列腺組織微血管密度(MVD）及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF）影響。具體如下。

1 資料與方法

1.1 動物：隨機(jī)選取健康成年的SD大鼠60只(由同濟(jì)醫(yī)學(xué)院動物實驗室提供），平均體重(288±28）;所有大鼠均飼養(yǎng)在清潔柜中，采取自由進(jìn)食進(jìn)水的飼養(yǎng)方式。實驗室室溫保持在23°C左右，采用鈍頭大鼠灌胃針進(jìn)行灌胃操作，動物稱重采用感應(yīng)0.1g的天平，動物標(biāo)本采用千分之一的分析天平。

1.2 試劑：丙酸睪丸酮注射液(由天津市灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號：0503241）;多克隆抗體VEGF(由自天津市灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司生產(chǎn)）;SP免疫組化染色試劑盒(由天津市灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司生產(chǎn)）;劑由山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院病理科提供的二甲苯、酒精、蘇木素，戈舍瑞林溶液(由AstraZeneca UK Limited生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號： H20040447）。

1.3 實驗方法：隨機(jī)選取60只雄性SD大鼠，并且隨機(jī)分成A、B、C、D、E、F六組;A組采取正常的飼養(yǎng)方式，其余各組均進(jìn)行隔日頸部皮下注射丙酸睪丸酮建立大鼠前列腺增生模型，在第29天時隨機(jī)選取一組(B）處死，并取前列腺組織進(jìn)行HE染色觀察模型是否建立成功;剩余各組中，C組灌注生理鹽水(15mL/ kg），D、E、F每日給予等量的戈舍瑞林溶液灌胃(1.0mg/kg），分別持續(xù)1～3周后處死。

1.4 標(biāo)本處理：所有大鼠均進(jìn)行灌藥完畢后，繼續(xù)正常飼養(yǎng)1周時間，飼養(yǎng)結(jié)束后將其處死，將前列腺摘除，并放置在感量為千分之一的分析天平上進(jìn)行稱重，對前列腺的指數(shù)進(jìn)行計算，計算公式為：(前列腺重量/大鼠體重）×100%，同時測量所有前列腺的體積，并用濃度為10%的甲醛溶液固定前列腺后用石蠟包埋。

1.5 觀察指標(biāo)及結(jié)果判定：觀察各組前列腺增生例數(shù)、前列腺重量、VEGF在前列腺組織中的表達(dá)、MVD在前列腺組織中的表達(dá)差異。VEGF表達(dá)判定：染色細(xì)胞質(zhì)呈棕褐色定為陽性，在×40倍的顯微鏡下觀察VEGF染色陽性的細(xì)胞面積;MVD判定標(biāo)準(zhǔn)：100倍顯微鏡下觀察染色的微小血管數(shù)目，每張片觀察5個視野計算平均值。

1.6 統(tǒng)計方法：所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS10.0進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料均以(±s）表示，采用配對資料的t檢驗或單因素方差分析，兩兩比較采用SNK－q檢驗，檢驗水準(zhǔn)取α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 各組前列腺增生情況：A、B、C、D、E、F六組大鼠中，A組正常飼養(yǎng)，結(jié)果大鼠前列腺沒有發(fā)生增生，B、C、D、E、F五組均有不同程度的前列腺增生，并且每組10只老鼠全部發(fā)生增生。B、C、D、E、F五組前列腺增生重量分別于A組比較，發(fā)現(xiàn)重量均明顯高于A組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05），五組之間采用單因素方差分析及組間比較差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05）。各組前列腺增生情況見表1。

表1 各組前列腺增生情況(±s）

表1 各組前列腺增生情況(±s）

組別例數(shù)前列腺增生(只）前列腺重量(g） A 10 0 0.11187±0.06784 B 10 10 0.34824±0.15426 C 10 10 0.35458±0.14287 D 10 10 0.35228±0.16132 E 10 10 0.34895±0.15289 F 10 10 0.35374±0.16341

2.2 各組VEGF陽性細(xì)胞面積及MVD個數(shù)情況：C、D、E、F四組前列腺增生模型大鼠中，C組未采用戈舍瑞林灌胃，其VEGF陽性細(xì)胞面積、MVD均顯著高于D、E、F三組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05）;D、E組間VEGF陽性細(xì)胞面積、MVD間差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05）;D、E兩組的VEGF陽性細(xì)胞面積、MVD均明顯高于采用戈舍瑞林灌胃時間更長的F組，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05）;各組VEGF陽性細(xì)胞面積、MVD情況見表2。

表2 VEGF陽性細(xì)胞面積、MVD情況(±s）

表2 VEGF陽性細(xì)胞面積、MVD情況(±s）

組別例數(shù)VEGF陽性細(xì)胞面積(cm2）MVD(個） C 10 64.8±22.7 26.4±3.88 D 10 44.2±12.9 14.9±2.76 E 10 42.8±14.6 14.1±2.71 F 10 35.4±18.5 9.2±2.04

3 討論

前列腺增生是臨床上常見的一種男性疾病，多發(fā)于老年群體，且近年來該病的發(fā)生率有呈逐年上升的趨勢［3］。該病發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前臨床上尚未得到統(tǒng)一的定論。相關(guān)研究表明［6］，血管內(nèi)皮生長因子對血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移具有促進(jìn)作用，有利于前列腺增生的產(chǎn)生、發(fā)展和惡化，是前列腺增生的重要致病因子［4］。此外，VEGF及其受體的結(jié)合會引起淋巴管內(nèi)增生皮細(xì)胞，促進(jìn)血管和淋巴管的形成，從而使淋巴管的通透性增加，促進(jìn)前列腺增生病情的發(fā)展。因此，臨床診治時，可以將其作為食管癌治療進(jìn)展和預(yù)后的重要參考指標(biāo)［5］。微血管密度是臨床上診治前列腺增生的一種重要指示劑，其含量可以有效反映前列腺增生患者新生血管的變化［7］。臨床研究表明［8］，前列腺增生患者M(jìn)VD密度會明顯增高。

戈舍瑞林屬于黃體生成素釋放激素(LHRH）類似物，常用于前列腺增生、子宮內(nèi)膜異位癥以及乳腺癌等疾病的臨床治療中。該藥物具有模擬黃體生成素釋放激素的作用，且較LHRH具有更強(qiáng)的生物效應(yīng)。戈舍瑞林作用于機(jī)體，可以使血清中垂體分泌黃體生成素水平升高，從而促進(jìn)睪酮的分泌，達(dá)到抑制內(nèi)皮生長因子(VEGF）的分泌，降低微血管密度(MVD）的效果。相關(guān)研究表明，戈舍瑞林溶液在良性前列腺增生的臨床治療中可以有效降低患者的微血管密度(MVD）及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF）水平，提示戈舍瑞林溶液可以有效治療前列腺增生，較好地緩解患者的病情。

本研究通過對60只雄性SD大鼠分別采取正常的飼養(yǎng)方式和隔日頸部皮下注射丙酸睪丸酮建立大鼠前列腺增生模型，并分別灌注生理鹽水和戈舍瑞林溶液灌胃，結(jié)果顯示，A、B、C、D、E、F六組大鼠中，A組正常飼養(yǎng)，結(jié)果大鼠前列腺沒有發(fā)生增生，B、C、D、E、F五組均有不同程度的前列腺增生，并且每組10只老鼠全部發(fā)生增生。B、C、D、E、F五組前列腺增生重量分別于A組比較，發(fā)現(xiàn)重量均明顯高于A組，五組之間采用單因素方差分析及組間比較差異不顯著，表明隔日頸部皮下注射丙酸睪丸酮可以使大鼠發(fā)生前列腺增生，且增生后大鼠重量顯著增加。另外，C、D、E、F四組前列腺增生模型大鼠中，C組未采用戈舍瑞林灌胃，其VEGF陽性細(xì)胞面積、MVD均顯著高于D、E、F三組，D、E組間VEGF陽性細(xì)胞面積、MVD間差異不顯著。D、E兩組的VEGF陽性細(xì)胞面積、MVD均明顯高于采用戈舍瑞林灌胃時間更長的F組，且差異顯著，表明采用戈舍瑞林灌胃可以有效降低前列腺增生大鼠的組織微血管密度(MVD）及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF）水平，這一結(jié)果和相關(guān)文獻(xiàn)報道的數(shù)據(jù)相吻合。

［1］DelGuerra S，DA＇leoV，GualtierottiG，etal.A common poly－morphism in the monocyte chemoattractant protein－1 (MCP－1）gene regulatory region influences MCP－1 expression and function of isolated human pancreatic islets［J］.Transplant Proc，2010，42(6）：2247～2249.

［2］何慶鑫，李學(xué)德.慢性前列腺炎與細(xì)胞因子的關(guān)系研究進(jìn)展［J］.中華男科學(xué)雜志，2011，17(10）：939～942.

［3］Vidas Z.Polymorphisms in Toll－like receptor genes－implications for prostate cancer development［J］.Coll Antropol，2010，34(2）：779～783.

［4］周青，田雪飛，龔秀英，等.加味虎杖散對自身免疫性前列腺炎模型大鼠炎癥因子MCP－1及PDGF－BB表達(dá)的影響［J］.中華男科學(xué)雜志，2011，17(1）：83～88.

［5］黃志洪，盧玉忠，李慎果，等.丹紅通精方對自身免疫性慢性前列腺炎大鼠血液及前列腺組織細(xì)胞因子水平的影響［J］.中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2011，8(26）：36～38.

［6］王威，王蔭槐.心理治療在伴性功能障礙的ⅢB型慢性前列腺炎患者中作用的臨床研究［J］.中國性科學(xué)，2013， 22 (7）：91～93.

［7］羅會治.少精弱精患者伴解脲支原體及慢性前列腺炎的中西醫(yī)結(jié)合治療后的精液分析［J］.中國性科學(xué)，2013， 22 (7）：52～56.

［8］周昀，唐杰，張明博，等.尿道周圍前列腺組織彈性模量與良性前列腺增生患者IPSS的相關(guān)性研究［J］.中國醫(yī)學(xué)影像學(xué)雜志，2012，20(7）：540～544.

Gore Sherry Lin on the Prostatic Tissue of M icrovessel Density and Vascular Endothelial Grow th Factor

HUANGHong，XU Qingchun，ZHANGYuanfeng，et al
(The Central Hospital of Shantou，Guangdong Shantou 515031，China）

Objective：To discuss the effect of Gore Sherry Lin on the prostatic tissue ofmicrovessel density(MVD）and vascular endothelial growth factor(VEGF）.Method：sixtymale SD ratswere randomly divided into 6 groups.Group A was raised as normal，other groupswere under subcutaneous injection of testosterone in order to establish the benign prostate hyperplasia(BPH）model.Rats in group B were executed after 29 days of treatment of testosterone for the purpose ofmodel evaluation，and their prostate tissueswere stained with HE.Group C was treated with normal saline in a dose of 15mL/kg，and Group D，E and F was treated with Gore Sherry Lin in a dose of 1.0mg/kg each day，and then executed in the 1st，2nd and 3rd week，respectively.Result：BPH was found in five groups except group A，0f which the weight of prostate was significant lighter than other five groups(P＜0.05）.The comparison of prostate weight between group B，C，D，E and F showed no significant different(P＜0.05）.The area of MVD and VEGF positive cells in group C were significant bigger than that in group D，E and F.There was no significant different in area of MVD and VEGF positive cells between group D and E.The area of MVD and VEGF positive cells in group Fwere significant smaller compared with group D and E.Conclusion：Treatmentwith Gore Sherry Lin in BPH rats effective on reducing the expression levels of MVD，VEGF.

Gore Sherry Lin;Prostate tissue microvessel density;Vascular endothelial growth factor

A

10.3969/j.issn.1006－6233.2015.06.004

1006－6233(2015）06－0891－04

2012年廣東省汕頭市醫(yī)療科技重點計劃項目，(編號：汕府科(2012）113號/3）

＊＊通訊作者，Email：zhyhst@163.com