• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    在位子宮內(nèi)膜神經(jīng)生長(zhǎng)因子在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及其臨床意義

    2015-06-21 15:12:10潘海英王紅靜楊凌云賈西彪
    實(shí)用醫(yī)院臨床雜志 2015年5期
    關(guān)鍵詞:異位癥生長(zhǎng)因子免疫組化

    潘海英,王紅靜,徐 盼,楊凌云,賈西彪,陳 靜,陳 岑

    (四川大學(xué)華西第二醫(yī)院,四川 成都 610041)

    在位子宮內(nèi)膜神經(jīng)生長(zhǎng)因子在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及其臨床意義

    潘海英,王紅靜,徐 盼,楊凌云,賈西彪,陳 靜,陳 岑

    (四川大學(xué)華西第二醫(yī)院,四川 成都 610041)

    目的 探討在位子宮內(nèi)膜神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor,NGF)在子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis,EMS)中的表達(dá)及其臨床意義。方法 選擇2013年9 月至2014年3月在四川大學(xué)華西第二醫(yī)院行手術(shù)治療的EMS患者39例(A組),其中疼痛22例(A1組),無疼痛17例(A2組)。選擇同期因?qū)m頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)III行子宮切除的24例患者作為對(duì)照(B組)。采用免疫組化法檢測(cè)各組子宮在位內(nèi)膜中NGF的表達(dá)。結(jié)果 NGF在A組及B組在位子宮內(nèi)膜上均有陽性表達(dá),但A組、A1組NGF的表達(dá)均明顯高于B組(P< 0.05),A1組表達(dá)明顯高于A2組(P< 0.05),而A2與B組比較表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)。結(jié)論 EMS患者在位子宮內(nèi)膜 NGF表達(dá)增加,伴有疼痛者更明顯。NGF可能參與了EMS疼痛的發(fā)生。

    子宮內(nèi)膜異位癥;神經(jīng)生長(zhǎng)因子;疼痛

    子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis,EMS)簡(jiǎn)稱內(nèi)異癥,是子宮外含有子宮內(nèi)膜腺體和基質(zhì)的雌激素依賴性病變,始于細(xì)胞水平而止于盆腔疼痛和不孕[1]。80%的EMS患者有慢性盆腔痛(chronic pelvic pain,CPP),主要表現(xiàn)為經(jīng)期或經(jīng)前后出現(xiàn)的腹痛、腰骶部疼痛,甚至劇痛難忍,嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量和身心健康。EMS的發(fā)病機(jī)制至今尚不明確。近年來,越來越多的研究顯示EMS疼痛與在位內(nèi)膜神經(jīng)纖維密度有關(guān)。神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(neurotrophin,NT)在誘導(dǎo)及維持神經(jīng)纖維生長(zhǎng)中起著重要的作用,而其中的在位子宮內(nèi)膜神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor,NGF)是產(chǎn)生疼痛及痛覺過敏的關(guān)鍵因素[2],由此推測(cè)NGF可能與EMS患者的疼痛有關(guān)。本研究擬通過免疫組化法檢測(cè)NGF在EMS在位內(nèi)膜的表達(dá),了解其在EMS疼痛發(fā)生中的意義。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 選擇2013年9月至2014年3月在四川大學(xué)華西第二醫(yī)院經(jīng)手術(shù)病理證實(shí)為EMS且同意術(shù)中同時(shí)行診刮術(shù)的39例患者(A組),其中疼痛22例(A1組)和無疼痛17例(A2組),A1組年齡22~49歲[(34.3±4.1)歲],A2組年齡24~47歲[(35.7±6.3歲))。選擇同期因CINIII行子宮切除的24例患者作為對(duì)照(B組),年齡20~45歲[(31.3±5.1歲)]。A組排除子宮腺肌癥和術(shù)前3月內(nèi)接受過激素治療的患者,B組排除EMS、子宮腺肌癥和術(shù)前3月內(nèi)接受過激素治療的患者。A1、A2和B組在孕產(chǎn)次、年齡、月經(jīng)周期等方面比較成差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05),A1組和A2組在手術(shù)分期分布上差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)。

    1.2 方法 分別提取病例組在位內(nèi)膜組織和對(duì)照組在位內(nèi)膜組織的石蠟切片,制成4 μm厚切片。采用免疫組化辣根過氧化物酶(HRP)-二甲基聯(lián)苯胺(DAB)檢測(cè)顯示系統(tǒng)分析A,B兩組中NGF的表達(dá)情況。試劑一抗多克隆兔抗人NGF抗體(工作濃度1∶100)購自北京希美杰生物技術(shù)有限公司。免疫組化SP試劑盒、DAB顯色劑購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。用小鼠腦組織作為陽性對(duì)照,PBS液代替一抗作為陰性對(duì)照。用倒置生物顯微鏡觀察切片,并對(duì)圖像進(jìn)行采集。

    1.3 結(jié)果判定 參照Shimizu等[3]的免疫組化評(píng)分方法,進(jìn)行半定量評(píng)分。顯微鏡下隨機(jī)計(jì)數(shù)5個(gè)高倍視野(×200),綜合細(xì)胞染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分比,進(jìn)行半定量分析。染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):不著色為0分,淡黃色為1分,黃色為2分,棕黃色為3分,5%~為1分,25%~為2分,50%~為3分,≥75%為4分。每張切片讀取5個(gè)視野的平均值,將細(xì)胞染色強(qiáng)度計(jì)分和陽性細(xì)胞比例計(jì)分相加,作為最后積分。根據(jù)最后積分,≤1分為陰性(-),>1分且≤3分為弱陽性(+),>3分且≤5分為陽性(++),>5分為強(qiáng)陽性(+++)。EMS手術(shù)分期參照美國生育協(xié)會(huì)提出的“修正子宮內(nèi)膜異位癥分期法(1997年)”。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    NGF在A組及B組在位子宮內(nèi)膜上均有不同程度表達(dá)。陽性顆粒主要定位于子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞的胞漿和胞膜。A組、A1組、A2組和B組NGF表達(dá)陽性率分別為76.9%、95.5%、52.9%和45.8%,其中A組、A1組均明顯高于B組(P< 0.05),A1組明顯高于A2組(P< 0.05)。A2與B組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05),見表1及圖1。

    表1 不同分組NGF的表達(dá)

    #A組與B組比較;## A1組與B組比較;### A1組與A2組比較;#### A2組與B組比較

    3 討論

    EMS病因復(fù)雜,發(fā)病機(jī)制尚不清楚,目前推測(cè)神經(jīng)機(jī)制可能在其發(fā)病中起著重要作用[4]。有研究顯示內(nèi)異癥是一種混合炎癥、神經(jīng)性疼痛的病癥[5]。Stratton 等[6]通過電子數(shù)據(jù)庫檢索1967年后報(bào)道的疼痛婦女的臨床基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn):內(nèi)膜異位病灶可以誘發(fā)自己的神經(jīng)支配,從而產(chǎn)生病變與中樞神經(jīng)系統(tǒng)之間的直接和雙向互動(dòng)聯(lián)系。

    圖1 NGF在子宮內(nèi)膜的表達(dá)情況(DAB×200) a:NGF陰性表達(dá);b:NGF弱陽性表達(dá);c:NGF陽性表達(dá);d:NGF強(qiáng)陽性表達(dá)

    NT是一類由神經(jīng)所支配的組織(如肌肉)和星形膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的且為神經(jīng)元生長(zhǎng)與存活所必需的蛋白質(zhì)分子,對(duì)神經(jīng)元的發(fā)育、存活和凋亡起重要作用。其中NGF是最早發(fā)現(xiàn)的神經(jīng)因子,在神經(jīng)纖維的生長(zhǎng)、維持中起著重要作用。正常人的子宮肌層、子宮內(nèi)膜與子宮肌層交界面及子宮內(nèi)膜基底層的深部都有神經(jīng)纖維支配,但子宮內(nèi)膜的上2/3無神經(jīng)纖維[7]。

    EMS患者病灶內(nèi)的高神經(jīng)纖維分布與其神經(jīng)因子高表達(dá)相伴出現(xiàn)。McKinnon 等[8]檢測(cè)了EMS患者異位組織神經(jīng)纖維及腹腔液神經(jīng)因子濃度,結(jié)果顯示與EMS相關(guān)的疼痛和腹腔液神經(jīng)因子的濃度有關(guān)。Barcena[9]進(jìn)行神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的前瞻性臨床研究,比較了EMS、子宮腺肌病、盆腔粘連患者腹腔液中神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)、腦源性神經(jīng)因子(Brain derived neurotrophic factor,BDNF)和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(Neurotrophin-3,NT-3)的濃度,發(fā)現(xiàn)內(nèi)異癥患者腹腔液中NGF、BDNF的濃度明顯升高。Kajitani等[10]通過測(cè)定EMS患者與非EMS患者腹腔液中NGF的表達(dá),發(fā)現(xiàn)EMS患者腹腔液中的NGF表達(dá)水平顯著高于常人水平。

    我們研究了NGF因子在EMS與非EMS患者在位子宮內(nèi)膜上的表達(dá),結(jié)果顯示:NGF在EMS患者在位內(nèi)膜的表達(dá)明顯高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中又尤以在EMS疼痛患者在位內(nèi)膜中的表達(dá)最高,高達(dá)95.5%,其明顯高于非疼痛組及對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。非疼痛組與對(duì)照組相比,NGF表達(dá)略高,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示NGF主要通過參與EMS的疼痛而參與EMS的發(fā)生。

    NGF參與EMS疼痛發(fā)生的神經(jīng)機(jī)制可能與下列因素有關(guān):NGF及其受體增加能促進(jìn)感覺神經(jīng)纖維的增生。Arnold[11]報(bào)道內(nèi)異癥腹膜病灶中交感神經(jīng)纖維密度降低而感覺神經(jīng)纖維密度增加。Bokor等[12]研究顯示:小神經(jīng)纖維的密度在輕度子宮內(nèi)膜異位患者的子宮內(nèi)膜中與正常盆腔的患者相比高出14倍。NGF本身亦是一種疼痛介質(zhì),能誘導(dǎo)與調(diào)控與中樞疼痛傳導(dǎo)有關(guān)的P物質(zhì)(Substance P,SP)、降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)及神經(jīng)絲(neurofilament,NF)的表達(dá)。腎上腺能神經(jīng)末梢釋放前列腺素E2,前列環(huán)素(prostacyclin,PGI2),這些物質(zhì)能使感覺神經(jīng)C致敏[13]。作為重要的前列腺素合成限速酶的環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase-2,Cox-2)能增加侵襲性、誘導(dǎo)血管形成,在內(nèi)膜異位癥患者的在位內(nèi)膜,其表達(dá)亦明顯增高,使之有助于內(nèi)膜細(xì)胞的粘附侵襲。這也符合我國學(xué)者提出的“在位內(nèi)膜決定論”。而EMS患者病灶中的神經(jīng)纖維可能即來源于在位內(nèi)膜功能層的神經(jīng)纖維,或是有活性的在位內(nèi)膜脫落后,種植在腹腔等其他部位時(shí)所分泌的能促進(jìn)神經(jīng)生長(zhǎng)的細(xì)胞因子如NGF。EMS腺體和血管附近有神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體p75(NGFRp75)陽性的神經(jīng)纖維表達(dá),神經(jīng)生長(zhǎng)因子通過EMS腺體產(chǎn)生免疫反應(yīng)[14]。這提示腹膜子宮內(nèi)膜異位病灶可能受感覺神經(jīng)A、感覺神經(jīng)C、膽堿能和腎上腺素能神經(jīng)纖維支配。Barcena de Arellano等[15]比較EMS患者與其他婦科患者的腹腔液神經(jīng)元生長(zhǎng)的體外模型和NGF的表達(dá),發(fā)現(xiàn)EMS和子宮內(nèi)膜異位病灶的腹腔液具有親神經(jīng)性。EMS是激素依耐性疾病,雌二醇和孕激素均能刺激NGF在間質(zhì)細(xì)胞的表達(dá),而使用孕激素后,NGF受體則明顯減弱[16]。

    本研究發(fā)現(xiàn)在EMS在位內(nèi)膜中有NGF表達(dá),且疼痛患者中表達(dá)更顯著,提示NGF可能參與了EMS疼痛的發(fā)生。由此說明采用在位內(nèi)膜免疫組化標(biāo)記NGF作為具有疼痛的EMS患者的篩查以及采用神經(jīng)因子拮抗阻斷治療EMS疼痛患者將是可行的。

    [1] 曹澤毅.中華婦產(chǎn)科學(xué)[M].第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2004:1477.

    [2] Apfel SC.Neurotrophic factors and pain[J].Clin J Pain,2000,16(2Suppl):S7-11.

    [3] Shimizu M,Saith Y,Ith H.Immunohistochemical staining of Haras oncogene product in normal,benign and lignant human pancreatie tissues[J].Hum Pathol,1990,66(3):468-473.

    [4] 戴毅,李雷,冷金花.第十一屆國際內(nèi)異癥會(huì)議紀(jì)要[J].中華婦產(chǎn)科雜志,2012,47(3):237-240.

    [5] McAllister SL,Dmitrieva N,Berkley KJ.Sprouted innervation into uterine transplants contributes to the development of hyperalgesia in a rat model of endometriosis[J].PLoS One,2012,7(2):31758.

    [6] Stratton P, Berkley KJ.Chronic pelvic pain and endometriosis:translational evidence of the relationship and implications[J].Hum Reprod Update,2011,17(3):327-346.

    [7] Tokushige N,Markham R,Russell P,et al.Different types of small nerver fiber in eutopic endometrium and myometritum in women with endometriosis[J].Fertil Steril,2007,88(4):795-803.

    [8] McKinnon B,Bersinger N,Wotzkow C,et al.Endometriosis-associated nerve fibers,peritoneal fluid cytokine concentrations,and pain in endometriotic lesions from different locations[J].Fertil Steril,2012,97(2):373-380.

    [9] Barcena de Arellano ML,Arnold J,Langa H,et al.Evidence of neurotrophic events due to peritoneal endometriotic lesions[J].Cytokine,2013,62(2):253-261.

    [10]Kajitani T,Maruyama T,Asada H,et al.Possible involvement of nerve growth factor in dysmenorrheal and dyspareunia associated with endometriosis[J].Endocrine Journal,2013,60(10):1155-1164.

    [11]Arnold J,Barcena de Arellano ML,Rüster C,et al.Imbalance between sympathetic and sensory innervation in peritoneal endometriosis[J].Brain Behav Immun,2012,26(1):132-141.

    [12]Bokor A,Kyama CM,Vercruysse L,et al.Density of small diameter sensory nerve fibres in endometrium:a semi-invasive diagnostic test for minimal to mild endometriosis[J].Hum Reprod,2009,24(12):3025-3032.

    [13]Schattschneider J,Scarano M,Binder A,et al.Modulation of sensitized C-fibers by adrenergic stimulation in human neuropathic pain[J].Eur J Pain,2008,12(4):517-524.

    [14]Tokushige N,Markham R,Russell P,et al.Nerve fibres in peritoneal endometriosis[J].Human Reproduction,2006,21(11):3001-3007.

    [15]Barcena de Arellano ML,Arnold J,Vercellino F,et al.Overexpression of nerve growth factor in peritoneal fluid from women with endometriosis may promote neurite outgrowth in endometriotic lesions[J].Fertil Steril,2011,95(3):1123-1126.

    [16]Shi Z,Arai KY,Jin W,et al.Expression of nerve growth factor and its receptors NTRK1 and TNFRSF1B is regulated by estrogen and progesterone in the uteri of golden hamsters[J].BiolReprod,2006,74(5):850-856.

    The expression of nerve growth factor and its significance in eutopic endometrium of patients with endometriosis

    PAN Hai-ying,WANG Hong-jing,XU Pan,YANG Ling-yun,JIA Xi-biao,CHEN Jing,CHEN Cen

    (West China Second Hospital,Sichuan University,Chengdu 610041,China)

    WANGHong-jing

    Objective To investigate the expression of nerve growth factor(NGF)in eutopic endometrium of patients with endometriosis,and to explore the role of NGF in the development of endometriosis-associated pain.Methods A total of 63 patients underwent surgical were studied.Of these patients,39 underwent surgical endometriosis lesion excision(group A)in which 22 patients suffered from dysmenorrheal(group A1)and 17 patients had no dysmenorrheal(group A2).At the same time,24 patients undergone uterectomy because of cervical intraepithelial neoplasia(CIN)were used as control group(group B).Immunohistochemistry was performed to detect the expression of NGF in eutopic endometrium.Results The level of NGF of endometrium in the group A and the group A1 were significantly higher than that in the group B(P< 0.05).The level of NGF in endometrium in the group A1 was significantly higher than that in the group A2(P< 0.05).There was no statistically significant difference in NGF expression between the group A2 and group B(P> 0.05).Conclusion NGF express in endometrium of patients with dysmenorrhea may participate in the pathogenesis of endometriosis and endometriosis associated pain.

    Endometriosis;Nerve growth factor;Dysmenorrhea

    四川省科技廳科技支撐基金資助項(xiàng)目(編號(hào):2012 SZ0022)

    王紅靜

    R711.71

    A

    1672-6170(2015)05-0111-03

    2015-01-30;

    2015-05-27)

    猜你喜歡
    異位癥生長(zhǎng)因子免疫組化
    夏枯草水提液對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性甲狀腺炎的治療作用及機(jī)制研究
    嬰幼兒原始黏液樣間葉性腫瘤一例及文獻(xiàn)復(fù)習(xí)
    結(jié)直腸癌組織中SOX9與RUNX1表達(dá)及其臨床意義
    緊密連接蛋白Claudin-4在子宮內(nèi)膜異位癥組織中的表達(dá)
    子宮瘢痕妊娠的病理免疫組化特點(diǎn)分析
    肛周子宮內(nèi)膜異位癥60例治療探討
    鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)2型糖尿病相關(guān)阿爾茨海默病的治療探索
    胃癌組織中成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子19和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體4的表達(dá)及臨床意義
    鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子修復(fù)周圍神經(jīng)損傷對(duì)斷掌再植術(shù)的影響
    轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β激活激酶-1在乳腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義
    国产精品久久久久久av不卡| 日韩一本色道免费dvd| 久久久久久久久大av| 免费观看无遮挡的男女| 成人二区视频| 尾随美女入室| 欧美日韩在线观看h| 成人国语在线视频| 日韩欧美精品免费久久| 乱码一卡2卡4卡精品| 久久久久久久久久久免费av| 亚洲怡红院男人天堂| 久久久久人妻精品一区果冻| 久久精品久久久久久久性| 男人添女人高潮全过程视频| 交换朋友夫妻互换小说| 精品久久国产蜜桃| 丝袜脚勾引网站| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产免费一级a男人的天堂| 精品一区二区免费观看| 午夜福利影视在线免费观看| 国产高清三级在线| 久久99一区二区三区| 97超视频在线观看视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 久热这里只有精品99| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲国产精品专区欧美| 精品国产国语对白av| 纯流量卡能插随身wifi吗| 十八禁网站网址无遮挡| 欧美bdsm另类| 国产精品欧美亚洲77777| 在线 av 中文字幕| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 男女边摸边吃奶| 午夜激情久久久久久久| 国产免费一区二区三区四区乱码| 精品亚洲成a人片在线观看| 免费高清在线观看日韩| 97超视频在线观看视频| 欧美精品亚洲一区二区| 99热这里只有精品一区| 久久99热这里只频精品6学生| 欧美精品国产亚洲| 99热网站在线观看| 亚洲av.av天堂| 国产亚洲欧美精品永久| 男女边吃奶边做爰视频| 免费大片18禁| 久久 成人 亚洲| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 在线免费观看不下载黄p国产| 热re99久久精品国产66热6| 欧美丝袜亚洲另类| 三上悠亚av全集在线观看| 一级爰片在线观看| 亚洲丝袜综合中文字幕| 欧美97在线视频| 国产成人午夜福利电影在线观看| 十八禁网站网址无遮挡| 91久久精品电影网| 国产精品偷伦视频观看了| 青春草视频在线免费观看| 九九爱精品视频在线观看| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 久热久热在线精品观看| 久久精品国产a三级三级三级| 国产乱人偷精品视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 精品一区二区三卡| 日韩在线高清观看一区二区三区| 亚洲欧美成人精品一区二区| 国产一区二区三区综合在线观看 | 高清黄色对白视频在线免费看| 啦啦啦在线观看免费高清www| 色婷婷久久久亚洲欧美| 久久狼人影院| 免费人妻精品一区二区三区视频| 久久97久久精品| 国产爽快片一区二区三区| 久久久久久久久久久免费av| 高清av免费在线| 简卡轻食公司| 亚洲久久久国产精品| 观看av在线不卡| 久久国产亚洲av麻豆专区| 99热这里只有精品一区| 久久99一区二区三区| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 国产精品久久久久久久久免| 国产有黄有色有爽视频| 激情五月婷婷亚洲| a级毛色黄片| 国产探花极品一区二区| 国产成人91sexporn| 国产精品久久久久成人av| 天天影视国产精品| 18在线观看网站| 黑人欧美特级aaaaaa片| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 五月开心婷婷网| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲人与动物交配视频| 精品少妇黑人巨大在线播放| 日本vs欧美在线观看视频| 最近手机中文字幕大全| 人妻 亚洲 视频| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 黄色毛片三级朝国网站| 国产色婷婷99| 一区二区三区精品91| 日韩成人av中文字幕在线观看| 如何舔出高潮| 在线看a的网站| 男女国产视频网站| 99热这里只有精品一区| 边亲边吃奶的免费视频| 国产高清有码在线观看视频| 亚洲欧美色中文字幕在线| 久久久久久久久久久久大奶| 一二三四中文在线观看免费高清| 国产色婷婷99| 美女主播在线视频| 热99国产精品久久久久久7| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 国产精品秋霞免费鲁丝片| 日韩欧美精品免费久久| 午夜视频国产福利| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | kizo精华| 久久久久久久久大av| 男人爽女人下面视频在线观看| 考比视频在线观看| 搡女人真爽免费视频火全软件| 亚洲欧美清纯卡通| 久久av网站| 少妇丰满av| 插阴视频在线观看视频| 色5月婷婷丁香| av福利片在线| 日韩 亚洲 欧美在线| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 成人国语在线视频| 一边摸一边做爽爽视频免费| 最近中文字幕2019免费版| 国产亚洲欧美精品永久| 99热这里只有精品一区| 亚洲精品视频女| 久久久久久久精品精品| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 黑人猛操日本美女一级片| 日韩一区二区三区影片| 亚洲成色77777| 欧美精品国产亚洲| 国产爽快片一区二区三区| 欧美最新免费一区二区三区| 国产视频首页在线观看| 乱码一卡2卡4卡精品| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 黄色怎么调成土黄色| 乱人伦中国视频| 成人毛片60女人毛片免费| 久久午夜综合久久蜜桃| 另类精品久久| 精品国产露脸久久av麻豆| 欧美少妇被猛烈插入视频| 婷婷成人精品国产| 看免费成人av毛片| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 男人添女人高潮全过程视频| 久久久国产精品麻豆| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产一区亚洲一区在线观看| 日日爽夜夜爽网站| 国产黄色视频一区二区在线观看| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 国产亚洲最大av| 国产精品久久久久成人av| 国产精品蜜桃在线观看| 日韩电影二区| 九九在线视频观看精品| 最新中文字幕久久久久| 丰满迷人的少妇在线观看| 熟女人妻精品中文字幕| 国产高清三级在线| 中国美白少妇内射xxxbb| 天堂俺去俺来也www色官网| 欧美一级a爱片免费观看看| 色94色欧美一区二区| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 99久久中文字幕三级久久日本| 久久久久久久精品精品| 亚洲国产精品成人久久小说| 成人二区视频| 高清视频免费观看一区二区| 精品人妻偷拍中文字幕| 一边亲一边摸免费视频| 国内精品宾馆在线| av黄色大香蕉| 欧美最新免费一区二区三区| 国产国语露脸激情在线看| 国产精品久久久久久av不卡| av视频免费观看在线观看| 又大又黄又爽视频免费| 在线免费观看不下载黄p国产| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 多毛熟女@视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 美女大奶头黄色视频| 中文字幕av电影在线播放| 中文字幕久久专区| 日韩大片免费观看网站| 高清毛片免费看| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲国产色片| 99精国产麻豆久久婷婷| 久久青草综合色| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 97超视频在线观看视频| 18禁观看日本| 欧美精品一区二区免费开放| 精品人妻熟女av久视频| 天堂中文最新版在线下载| 国产黄片视频在线免费观看| 热99久久久久精品小说推荐| 午夜激情久久久久久久| 涩涩av久久男人的天堂| 又大又黄又爽视频免费| 999精品在线视频| 满18在线观看网站| 国精品久久久久久国模美| h视频一区二区三区| 少妇人妻 视频| 亚洲五月色婷婷综合| 黑丝袜美女国产一区| 人人澡人人妻人| 黄色欧美视频在线观看| 色吧在线观看| 熟妇人妻不卡中文字幕| 国产一区二区三区av在线| 久久久久网色| 在线天堂最新版资源| 最近中文字幕高清免费大全6| 久久婷婷青草| 在线观看三级黄色| 亚洲国产精品国产精品| 视频区图区小说| 秋霞在线观看毛片| 国产永久视频网站| 性色avwww在线观看| 国产探花极品一区二区| 18禁在线播放成人免费| 亚洲人成网站在线观看播放| 少妇的逼好多水| 亚洲精品一区蜜桃| 少妇人妻 视频| 久久久精品区二区三区| 男女边摸边吃奶| 高清欧美精品videossex| 久久鲁丝午夜福利片| 国产精品三级大全| 一级爰片在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 91精品国产九色| 一级,二级,三级黄色视频| 春色校园在线视频观看| 国产精品.久久久| 成人漫画全彩无遮挡| 免费人成在线观看视频色| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 韩国高清视频一区二区三区| 两个人的视频大全免费| 色婷婷久久久亚洲欧美| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 国产成人免费无遮挡视频| 熟女av电影| 欧美精品国产亚洲| 精品久久久噜噜| 少妇人妻 视频| 亚洲精品456在线播放app| 国产精品 国内视频| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 国产一区二区在线观看av| 国产精品久久久久久精品古装| 日韩人妻高清精品专区| 欧美日韩av久久| 免费观看在线日韩| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产成人freesex在线| 国产视频首页在线观看| 另类亚洲欧美激情| 一级毛片电影观看| 日韩一区二区视频免费看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 亚洲人成网站在线播| 91aial.com中文字幕在线观看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产免费福利视频在线观看| 国产精品熟女久久久久浪| 国产成人一区二区在线| 午夜激情久久久久久久| videos熟女内射| 观看av在线不卡| 国产亚洲一区二区精品| 久久久午夜欧美精品| 久久久久网色| 中文天堂在线官网| 女性被躁到高潮视频| 成人亚洲精品一区在线观看| 人人澡人人妻人| 蜜桃在线观看..| 夫妻午夜视频| 久久这里有精品视频免费| 777米奇影视久久| 午夜福利视频在线观看免费| 日韩大片免费观看网站| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲国产av新网站| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 日本午夜av视频| 韩国高清视频一区二区三区| 黄片无遮挡物在线观看| 久久精品久久久久久久性| 亚洲av国产av综合av卡| a级毛色黄片| 视频在线观看一区二区三区| 少妇 在线观看| 精品人妻偷拍中文字幕| 亚洲精品第二区| 久久久亚洲精品成人影院| 男人爽女人下面视频在线观看| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 亚洲av中文av极速乱| 亚洲国产精品成人久久小说| 成人毛片a级毛片在线播放| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 黑人高潮一二区| 极品少妇高潮喷水抽搐| 中国三级夫妇交换| 少妇精品久久久久久久| 在线观看三级黄色| h视频一区二区三区| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 丝袜喷水一区| 日韩中文字幕视频在线看片| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 亚洲精品乱久久久久久| 亚洲三级黄色毛片| 黑人猛操日本美女一级片| 精品人妻在线不人妻| 午夜激情久久久久久久| 国产av一区二区精品久久| 一级a做视频免费观看| 三上悠亚av全集在线观看| 伊人亚洲综合成人网| 一二三四中文在线观看免费高清| 免费黄网站久久成人精品| 欧美xxⅹ黑人| 久久久久久久精品精品| av在线app专区| 国产精品 国内视频| 黄色毛片三级朝国网站| 自线自在国产av| 精品熟女少妇av免费看| 亚洲国产av影院在线观看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产一区二区三区综合在线观看 | av一本久久久久| 欧美日韩av久久| 黄色一级大片看看| 极品人妻少妇av视频| 国产精品99久久99久久久不卡 | 有码 亚洲区| 国产免费又黄又爽又色| 国产精品免费大片| 国产又色又爽无遮挡免| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 欧美日本中文国产一区发布| 精品少妇内射三级| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 99久国产av精品国产电影| 两个人的视频大全免费| 一级黄片播放器| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 日韩一区二区三区影片| 国产熟女午夜一区二区三区 | 久久久国产一区二区| 中文字幕久久专区| 久久ye,这里只有精品| 久久亚洲国产成人精品v| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产在线免费精品| 一本久久精品| av网站免费在线观看视频| 免费黄色在线免费观看| 在线观看免费日韩欧美大片 | 色吧在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 91久久精品国产一区二区三区| 日韩在线高清观看一区二区三区| 久久精品久久精品一区二区三区| 成人亚洲精品一区在线观看| 久久国内精品自在自线图片| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 国产日韩欧美视频二区| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 亚洲国产av新网站| 午夜影院在线不卡| 免费av中文字幕在线| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲天堂av无毛| 美女视频免费永久观看网站| 国产极品粉嫩免费观看在线 | 国产白丝娇喘喷水9色精品| 大片免费播放器 马上看| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 丝袜脚勾引网站| 亚洲av欧美aⅴ国产| 免费观看的影片在线观看| 欧美精品高潮呻吟av久久| 人妻 亚洲 视频| 桃花免费在线播放| 少妇人妻精品综合一区二区| 精品一品国产午夜福利视频| 亚洲av.av天堂| 国产黄色视频一区二区在线观看| 精品熟女少妇av免费看| 国产成人免费无遮挡视频| 青春草视频在线免费观看| 99热国产这里只有精品6| 一级黄片播放器| 久久久午夜欧美精品| 婷婷成人精品国产| 99热网站在线观看| 久久这里有精品视频免费| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 久久精品久久久久久噜噜老黄| 精品人妻一区二区三区麻豆| 高清av免费在线| 熟女av电影| 中文字幕av电影在线播放| 99国产综合亚洲精品| 国产片特级美女逼逼视频| 国产黄色免费在线视频| 婷婷色综合大香蕉| 亚洲国产精品国产精品| 少妇的逼好多水| 亚洲无线观看免费| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 免费观看av网站的网址| 麻豆乱淫一区二区| 少妇丰满av| tube8黄色片| 黑人猛操日本美女一级片| 日韩欧美一区视频在线观看| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 高清在线视频一区二区三区| 99热国产这里只有精品6| 妹子高潮喷水视频| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 老司机影院成人| 欧美三级亚洲精品| av国产久精品久网站免费入址| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产男人的电影天堂91| 老女人水多毛片| 免费观看a级毛片全部| 少妇人妻精品综合一区二区| 我的老师免费观看完整版| 成年人午夜在线观看视频| 国产成人精品久久久久久| 99九九在线精品视频| 国产精品一区二区在线观看99| 久久97久久精品| 欧美日本中文国产一区发布| 天美传媒精品一区二区| 国产精品99久久久久久久久| 国产精品一区二区在线不卡| 青春草视频在线免费观看| 美女国产视频在线观看| 亚洲图色成人| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 欧美变态另类bdsm刘玥| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 妹子高潮喷水视频| 一本色道久久久久久精品综合| 国产av一区二区精品久久| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 久久99一区二区三区| 国产69精品久久久久777片| 亚洲美女视频黄频| 两个人免费观看高清视频| 日韩成人av中文字幕在线观看| 人体艺术视频欧美日本| 99热6这里只有精品| 国产国语露脸激情在线看| 久久狼人影院| 国精品久久久久久国模美| 男女免费视频国产| 久久精品久久久久久久性| 久久久久久伊人网av| 中文字幕久久专区| 国产av国产精品国产| 我的老师免费观看完整版| 999精品在线视频| 亚洲精品乱久久久久久| 伦精品一区二区三区| 亚洲综合精品二区| av播播在线观看一区| 91成人精品电影| 激情五月婷婷亚洲| 国产精品一区二区在线观看99| 国产成人aa在线观看| 久久久久精品久久久久真实原创| 亚洲精品久久成人aⅴ小说 | 久久久欧美国产精品| 亚洲成人手机| 日韩av在线免费看完整版不卡| 熟妇人妻不卡中文字幕| 欧美国产精品一级二级三级| 国产免费现黄频在线看| 少妇人妻精品综合一区二区| www.色视频.com| 国产精品人妻久久久久久| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产精品 国内视频| 久久久久久人妻| √禁漫天堂资源中文www| 岛国毛片在线播放| 欧美精品亚洲一区二区| 日本wwww免费看| 国产精品国产av在线观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 最新的欧美精品一区二区| 老熟女久久久| 制服人妻中文乱码| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 高清视频免费观看一区二区| 亚洲av免费高清在线观看| 日本午夜av视频| 免费人成在线观看视频色| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 美女大奶头黄色视频| 丝瓜视频免费看黄片| 成人影院久久| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 欧美+日韩+精品| 在现免费观看毛片| 少妇被粗大猛烈的视频| 午夜视频国产福利| 精品久久久精品久久久| 制服诱惑二区| 在线观看免费视频网站a站| 丝袜美足系列| 国产精品偷伦视频观看了| 亚洲av成人精品一区久久| 免费观看性生交大片5| 男的添女的下面高潮视频| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 伦理电影免费视频| 熟女电影av网| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 精品久久国产蜜桃| 大陆偷拍与自拍| 三级国产精品片| 最近最新中文字幕免费大全7| 亚洲在久久综合| 欧美日韩av久久| 极品人妻少妇av视频| 国产成人一区二区在线| 精品一区二区三区视频在线| 少妇人妻 视频| 亚洲国产精品999| 五月天丁香电影| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 另类亚洲欧美激情| 99久久精品国产国产毛片| 少妇被粗大猛烈的视频| 热99久久久久精品小说推荐| 一本大道久久a久久精品| 国产一区二区在线观看日韩| 综合色丁香网| 男人爽女人下面视频在线观看| 看非洲黑人一级黄片| av在线观看视频网站免费| 久久久国产欧美日韩av| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产永久视频网站| 涩涩av久久男人的天堂| 国产黄片视频在线免费观看| 男的添女的下面高潮视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 伦理电影免费视频| 九草在线视频观看| 好男人视频免费观看在线| 精品一品国产午夜福利视频| 大话2 男鬼变身卡| 97精品久久久久久久久久精品| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 国产乱来视频区| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 在线 av 中文字幕| 成人手机av| 女的被弄到高潮叫床怎么办|