東方百合鱗片外植體滅菌效果對比

郭標(biāo)　韋鵬霄　岑秀芬

摘 要 以東方百合品種“凝望星空”鱗莖為外植體材料，比較了不同滅菌處理及不同鱗片部位對外植體滅菌和誘導(dǎo)出芽的效應(yīng)。試驗結(jié)果表明，在滅菌劑HgCl2的不同濃度及不同滅菌時間的比較試驗中，以0.19%HgCl2 滅菌20 min的效果最好；兩種滅菌劑的適宜組合為0.19%HgCl2 20 min +12% NaClO 5 min，外植體的菌污染率、死亡率和誘導(dǎo)出芽率分別為30%、16.67%和53.33%；在鱗片的不同部位比較試驗中，以中層鱗片的菌污染率最低（23.33%）、芽誘導(dǎo)率最高（56.67%）。

關(guān)鍵詞 東方百合； 鱗片培養(yǎng)；外植體滅菌；菌污染；芽誘導(dǎo)

中圖分類號：S682.29 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1673-890X（2015）09-120-02

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試驗材料為東方百合品種“凝望星空”的鱗莖。采用百合生長健壯的鱗莖，除去最外層與泥土接觸部分的鱗片，選取潔白無病斑的鱗片用自來水沖洗干凈，再用飽和的洗衣粉或洗潔精溶液浸泡15～20 min，沖洗干凈后置于超凈工作臺內(nèi)進行表面消毒滅菌。滅菌過程中不停地?fù)u晃滅菌溶液，然后用無菌水沖洗4～5遍，再用滅菌過的濾紙吸干外植體表面的水分備用。在超凈工作臺上，用剪刀把滅菌過的百合鱗片剪切成0.5～1.0 cm2小塊，然后將鱗片塊腹面朝上接種于外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，每瓶接種鱗片塊30個，每個處理接30瓶，設(shè)3次重復(fù)。

接種材料置于室溫（25±1） ℃、光照強度1 500 lx左右、光照時間12 h/d的條件下進行培養(yǎng)。培養(yǎng)25 d后，統(tǒng)計鱗片外植體的菌污染率和未污染鱗片的芽誘導(dǎo)率。用DPS統(tǒng)計分析軟件對試驗數(shù)據(jù)進行顯著性及多重比較分析。

1.2 試驗設(shè)計

（1）滅菌劑HgCl2的不同濃度比較試驗。HgCl2的濃度分別為0.1%、0.13%、0.15%、0.17%、0.19%，共設(shè)5 個處理。（2）0.19% HgCl2的不同滅菌時間比較試驗。滅菌時間分別為20、23、26、29 min，共設(shè)4個處理。（3）不同滅菌組合的比較試驗。①0.19%HgCl2（20min）+12% NaClO（5 min和10 min）；②0.19%HgCl2（20 min）+15% NaClO（5 min和10 min）；③75%酒精（30 s和60 s）+0.19%HgCl2（20 min）。共設(shè)6個處理。（4）不同部位鱗片外植體的比較試驗。鱗片部位分為外層、中層和內(nèi)層，共設(shè)3個處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同HgCl2濃度對東方百合鱗片外植體滅菌效果的影響

從表1可知，同一種滅菌劑（HgCl2）不同濃度對東方百合鱗片外植體的滅菌效果均不同。隨著HgCl2濃度（0.1%～0.22%）的提高，鱗片外植體的污染率呈下降趨勢，死亡率呈上升趨勢，而鱗片外植體誘導(dǎo)出芽率則呈上升后下降的趨勢。在HgCl2的濃度為0.1%時，鱗片外植體的菌污染率最高，達(dá)到100%；鱗片外植體的誘導(dǎo)出芽率最低，為0.0。當(dāng)HgCl2的濃度為0.19%時，鱗片外植體的菌污染率為46.67%，芽誘導(dǎo)率達(dá)最高，為33.33%。在不同HgCl2濃度處理之間，鱗片外植體菌污染率、鱗片外植體出芽率的差異均達(dá)到極顯著水平。試驗結(jié)果表明，單一滅菌劑HgCl2在濃度為0.19%時，可以有效降低東方百合鱗片外植體的菌污染率和提高鱗片外植體出芽率。

2.2 0.19%HgCl2不同滅菌時間對東方百合鱗片外植體滅菌效果的影響

由表2得知，同一HgCl2濃度（0.19%）的不同滅菌時間，對東方百合鱗片外植體滅菌效果也不同。在0.19%HgCl2的不同滅菌時間（20、23、26、29 min）處理范圍內(nèi)，隨著滅菌時間的延長，鱗片外植體的菌污染率呈下降趨勢；而外植體的死亡率則呈上升趨勢；由于外植體的死亡率增大，致使外植體的誘導(dǎo)出芽率降低。不同滅菌時間處理之間，其外植體的菌污染率、死亡率及芽誘導(dǎo)率的差異均達(dá)到極顯著水平。試驗結(jié)果表明，0.19%HgCl2對百合鱗片外植體的適宜滅菌時間為20 min。

不同滅菌組合對東方百合鱗片外植體滅菌效果的影響

從表3可以看出，不同滅菌組合對東方百合鱗片外植體滅菌效果的影響不同。在不同滅菌組合的6個處理中，外植體菌污染率最高的為75%酒精+0.19%HgCl2組合，其次為0.19%HgCl2+12% NaClO組合處理，最低的為0.19%HgCl2 +15% NaClO組合；外植體死亡率最高的為0.19%HgCl2（20min） +15% NaClO（10 min）組合處理，其次為75%酒精+0.19%HgCl2組合，最低的為0.19%HgCl2（20 min）+12% NaClO（5 min）組合處理；外植體誘導(dǎo)出芽率最高的為0.19%H Cl2+12% NaClO組合，其次為0.19%HgCl2+15% NaClO組合，最低的為75%酒精+0.19%HgCl2組合。綜合比較上述3項指標(biāo)，以0.19%HgCl2+12% NaClO組合的效果最佳，其次為0.19%HgCl2+15% NaClO組合，最差為75%酒精+0.19%HgCl2組合；最佳組合處理為0.19%HgCl2 （20min）+12% NaClO（5min），最差組合處理為75%酒精60 s+0.19%HgCl2（20 min）。

2.4 不同鱗片部位對東方百合鱗片外植體滅菌效果的影響

如表4所示，同一滅菌處理對東方百合不同部位的鱗片外植體滅菌效果不同。百合鱗片外植體的污染率高低順序為：外層鱗片（40%）>中層鱗片（23.33%）>內(nèi)層鱗片（16.67%）；外植體的死亡率高低順序為：內(nèi)層鱗片（36.67%）>中層鱗片（20%）>外層鱗片（10%）；外植體誘導(dǎo)出芽率的高低順序為：中層鱗片（56.67%）>外層鱗片（50%）>內(nèi)層鱗片（46.66%）。百合鱗片3個部位在各指標(biāo)的差異均達(dá)到極顯著水平。試驗結(jié)果表明，東方百合球莖的中層鱗片最適宜用于外植體滅菌和芽誘導(dǎo)。

3 討論與結(jié)論

本研究試驗結(jié)果表明，在不同滅菌組合的比較試驗中，與單一的滅菌劑處理比較，雖然較適宜的滅菌組合都能不同程度地提高百合鱗片外植體的滅菌效果，但最適宜的滅菌組合是由適宜的滅菌劑各類、濃度及滅菌時間的最佳組合，即不但明顯地降低外植體的菌污染率，而且還能最大程度地提高外植體的誘導(dǎo)出芽率[1-2]。

在相同的外植體滅菌處理下，東方百合不同鱗片部位的滅菌和誘導(dǎo)出芽效果差異很大。以中層鱗片的綜合效果最好，外植體的菌污染率和死亡率較低，誘導(dǎo)出芽率最高；外層鱗片由于帶菌較多，外植體的菌污染率最高，誘導(dǎo)出芽率最低；內(nèi)層鱗片由于過于細(xì)嫩，雖然外植體的菌污染率最低，但死亡率最高，誘導(dǎo)出芽率最低。因此，對東方百合鱗片進行離體培養(yǎng)時，外植體最適宜的部位為中層鱗片。

參考文獻(xiàn)

[1]鄒永梅，黃雪方.不同消毒劑對萬壽菊外植體滅菌效果的影響[J].江蘇教育學(xué)院學(xué)報：自然科學(xué)，2011，27（4）：25-27.

[2]劉麗娟，李紅梅，劉雪蓮.不同處理方法對外植體消毒效果比較研究[J].北方園藝，2009（10）：86-87.

（責(zé)任編輯：劉昀）