保心寧膠囊中柚皮苷與新橙皮苷的含量測(cè)定

王向娟

(杭州市中醫(yī)院中藥房，杭州 310000)

保心寧膠囊中柚皮苷與新橙皮苷的含量測(cè)定

王向娟

(杭州市中醫(yī)院中藥房，杭州 310000)

目的 建立高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定保心寧膠囊中柚皮苷和新橙皮苷的含量。方法 色譜柱：Agilent XDB C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相：甲醇-1%冰醋酸(35：65)；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：283 nm；進(jìn)樣量10 μL。結(jié)果 柚皮苷在0.074～2.210 μg范圍內(nèi)，新橙皮苷在0.077～2.317 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；柚皮苷的平均回收率為97.73%，RSD為1.66%(n=9)，新橙皮苷的平均回收率為97.23%，RSD為1.24%(n=9)。結(jié)論 該方法操作簡(jiǎn)單，專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，可用于保心寧膠囊的質(zhì)量控制。

保心寧膠囊；柚皮苷；新橙皮苷；色譜法，高效液相；含量測(cè)定

保心寧膠囊由丹參干浸膏、三七生粉、當(dāng)歸干浸膏、枳殼干浸膏、生姜浸膏混勻、干燥、裝膠囊制成，具有活血化瘀、行氣止痛的功效，臨床用于治療心絞痛、心律失常，可改善冠心病癥狀[1]。原標(biāo)準(zhǔn)收載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》(中藥成方制劑)第11冊(cè)，僅包括了性狀、紫外鑒別、化學(xué)顯色鑒別及膠囊劑的常規(guī)檢查，并無(wú)含量測(cè)定[1]。含量測(cè)定項(xiàng)的缺失，無(wú)法保證該藥的質(zhì)量，筆者在本實(shí)驗(yàn)中以柚皮苷和新橙皮苷為對(duì)照，采用高效液相色譜(HPLC)法，對(duì)方中的枳殼進(jìn)行含量測(cè)定，以期全面控制該藥質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1200系列高效液相色譜儀，包括脫氣機(jī)(JP73066435)、四元泵(DE62969922)、自動(dòng)進(jìn)樣器(DE64772263)、柱溫箱(DE90374667)、DAD檢測(cè)器(DEAA304509)；色譜儀工作站采用Chemistation工作站。AG285型電子天平(METTLER TOLEDO公司)。

1.2 試劑與藥品 柚皮苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110722-201111，含量以93.2%計(jì))；新橙皮苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111857-201102，含量以99.6%計(jì))；保心寧膠囊(武漢雙龍藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：110701，110702，110703，采用批號(hào)110701樣品進(jìn)行方法學(xué)研究)。陰性樣品(采用自購(gòu)藥材，模擬工藝制備)。試劑：甲醇為色譜純，其他為分析純，水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent XDB C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-1%冰醋酸(35：65)；流速：1.0 mL·min-1，柱溫：30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：283 nm，進(jìn)樣量10 μL，理論板數(shù)按圖譜中的柚皮苷峰計(jì)算，應(yīng)不低于3 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取柚皮苷對(duì)照品36.83 mg(以柚皮苷計(jì))，新橙皮苷對(duì)照品38.62 mg(以新橙皮苷計(jì))，共同置于100 mL量瓶，用適量甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備溶液，精密吸取該溶液5.0 mL，置25 mL量瓶，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液(每毫升溶液中含柚皮苷73.66 μg、新橙皮苷77.24 μg)。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物約0.2 g，精密稱定，置于50 mL量瓶中，加入適量甲醇，超聲處理(250 W，33 kHz)20 min，取出，放冷，用甲醇定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液 按處方量稱取各組分，除去枳殼后，按標(biāo)準(zhǔn)中的制法制成陰性樣品，取該陰性樣品，按照上述供試品溶液的制備方法，制成陰性樣品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 分別精密吸取“2.2”項(xiàng)對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各10 μL，按照上述色譜條件，注入高效液相色譜儀進(jìn)行分析，記錄色譜圖。結(jié)果表明，供試品色譜圖中分別呈現(xiàn)與對(duì)照品色譜圖中保留時(shí)間相一致的兩個(gè)色譜峰，柚皮苷和新橙皮苷峰的分離度好，且與相鄰色譜峰的分離度均>1.5，陰性樣品無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液1.0，5.0，10.0，15.0，20.0，25.0，30.0 μL注入高效液相色譜儀，以各待測(cè)組分的峰面積為縱坐標(biāo)，各待測(cè)組分的進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸計(jì)算，得柚皮苷的回歸方程為：Y=816.81X+1.854 0，r=0.999 9(n=7)，得到新橙皮苷的回歸方程為：Y=882.51X+4.146 15，r=0.999 9(n=7)。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：柚皮苷在0.074～2.210 μg范圍內(nèi)，新橙皮苷在0.077～2.317 μg范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

A.對(duì)照品；B.供試品；C.陰性樣品；1.柚皮苷；2.新橙皮苷

圖1 3種溶液HPLC色譜圖

2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 分別精密吸取“2.2.1”項(xiàng)柚皮苷、新橙皮苷混合對(duì)照品溶液10 μL，按照上述色譜條件，注入高效液相色譜儀進(jìn)行分析，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄圖譜，分別計(jì)算柚皮苷、新橙皮苷峰面積，RSD分別為0.38%和0.46%(n=6)。結(jié)果表明本方法的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 分別精密吸取同一份供試品溶液10 μL，按照上述色譜條件，分別在0，2，4，6，8，10 h各注入高效液相色譜儀進(jìn)行分析，記錄圖譜。各圖譜中，柚皮苷與新橙皮苷峰面積的RSD分別為1.6%、1.5%(n=6)。上述結(jié)果表明，供試品溶液在10 h內(nèi)峰面積基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批供試品，按“2.2.2”項(xiàng)供試品溶液的制備方法處理，平行制備6份供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，柚皮苷和新橙皮苷的平均含量分別為18.55，19.36 mg·g-1，RSD分別為1.3%和1.6%(n=6)，表明方法重復(fù)性較好。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取同一批保心寧膠囊(批號(hào)：110701)內(nèi)容物9份(約0.1 g)，分別置50 mL量瓶，每3份為一組，分別加入對(duì)照品儲(chǔ)備溶液(每毫升分別含柚皮苷0.368 3 mg、新橙皮苷0.386 2 mg)4.0，5.0，6.0 mL，再各加入甲醇適量，按“2.2.2”中供試品溶液制備方法處理，照上述色譜條件測(cè)定，各取10 μL注入高效液相色譜儀，測(cè)定柚皮苷與新橙皮苷的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1，2。柚皮苷平均加樣加樣回收率97.73%，RSD=1.66%，新橙皮苷平均加樣回收率97.23%，RSD=1.24%。

表1 柚皮苷加樣回收率測(cè)定結(jié)果

表2 新橙皮苷加樣回收率測(cè)定結(jié)果

2.9 樣品含量測(cè)定 取3批樣品，按供試品溶液制備方法制備，按上述色譜條件測(cè)定計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 樣品中柚皮苷和新橙皮苷含量測(cè)定結(jié)果mg·g-1

3 討論

3.1 測(cè)定指標(biāo)的選擇 本品臨床上用于治療心絞痛、心律失常、冠心病等，因此，處方中活血化瘀的丹參、三七被認(rèn)為是君藥、臣藥，在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究中也以研究丹參、三七的質(zhì)量控制為主，如原兒茶醛、丹參酮Ⅱ A、丹酚酸B、人參皂苷Rg1等的含量測(cè)定[2-8]。但筆者認(rèn)為，中醫(yī)理論認(rèn)為“氣為血之帥、血為氣之母”，因此在處方的組成中除了生血、活血、祛瘀的藥材之外，需要配伍以破氣除弊的枳殼，且本品的功效“行氣止痛”主要是枳殼發(fā)揮藥效，枳殼在處方中的作用與其他藥材相輔相成，因此很有必要研究枳殼的含量測(cè)定項(xiàng)目。柚皮苷與新橙皮苷的活性較強(qiáng)，是枳殼含量測(cè)定的指標(biāo)性成分，因此選擇柚皮苷與新橙皮苷對(duì)本品中的枳殼進(jìn)行質(zhì)控。

3.2 波長(zhǎng)的選擇 采用二極管陣列檢測(cè)器對(duì)柚皮苷、新橙皮苷進(jìn)行在線光譜檢測(cè)，結(jié)果顯示在283 nm處，兩者均有最大吸收，故選用283 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

3.3 流動(dòng)相的選擇 筆者比較了《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版中乙腈-磷酸-水、甲醇-冰醋酸-水以及甲醇-水3種流動(dòng)相，結(jié)果甲醇-水系統(tǒng)為流動(dòng)相峰形較寬，新橙皮苷峰與雜質(zhì)峰完全無(wú)法分開(kāi)，甲醇-磷酸-水系統(tǒng)中新橙皮苷峰與雜質(zhì)峰分離效果不佳，如要達(dá)到較好的分離效果，新橙皮苷的出峰時(shí)間達(dá)到70 min，而甲醇-冰醋酸-水溶液系統(tǒng)只要30 min即可達(dá)到良好的分離度。且在比較過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，冰醋酸濃度高于0.5%時(shí)，柚皮苷與新橙皮苷的峰形以其與雜質(zhì)峰的分離度均較好，故選擇甲醇-1%冰醋酸水溶液系統(tǒng)。

3.4 提取條件的考察 在提取方式上比較了超聲處理20，30 min，回流30，60 min幾種方法，結(jié)果均無(wú)明顯差異。為了方便操作，選擇用甲醇超聲20 min即可。在提取溶劑的選擇上，比較乙醇、甲醇、50%甲醇的提取效果，結(jié)果50%甲醇提取雜質(zhì)更多，乙醇的提取效果比甲醇略低，故采用甲醇作為提取溶劑。

3.5 耐用性的考察 曾使用了安捷倫公司XDB C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)、迪馬公司DiamonsilTMC18(250 mm×4.6 mm，5 μm)、島津公司Shimadzu VP-ODS(250 mm×4.6 mm，5 μm)對(duì)本品進(jìn)行分析，結(jié)果3種不同品牌C18柱均能在上述色譜條件下得到很好的分離，色譜柱耐用性較好。

本法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度高，重復(fù)性好，可以有效用于本品中枳殼的質(zhì)量控制。

[1] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第11冊(cè))[S].1996：142.

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2014-02-13

2014-03-14

王向娟(1984-)，女，浙江義烏人，中藥師，學(xué)士，研究方向：中藥學(xué)。電話：(0)15925643819，E-mail：wxj_0807@163.com。

R286；R927.1

B

1004-0781(2015)02-0258-04

DOI 10.3870/yydb.2015.02.032