美洛昔康對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、遷移和PTEN基因表達(dá)的影響

周 密，邱 峰，張 淵，王家玉，秧茂盛

(1.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥學(xué)部，重慶 400016;2.重慶市婦幼保健院藥劑科，重慶 400010；3.吉首大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理教研室，湖南 吉首 416000)

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美洛昔康對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、遷移和PTEN基因表達(dá)的影響

周 密1，邱 峰1，張 淵1，王家玉2，秧茂盛3

(1.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥學(xué)部，重慶 400016;2.重慶市婦幼保健院藥劑科，重慶 400010；3.吉首大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理教研室，湖南 吉首 416000)

目的 研究美洛昔康(meloxicam，Mel)對(duì)人結(jié)直腸癌LoVo細(xì)胞增殖和遷移能力的抑制作用及其對(duì)抑癌基因PTEN表達(dá)水平的影響。方法 以人結(jié)腸癌細(xì)胞株LoVo為試驗(yàn)對(duì)象，通過(guò)集落形成試驗(yàn)分析Mel對(duì)LoVo細(xì)胞增殖的影響，Western blot檢測(cè)Mel對(duì)PCNA蛋白和PTEN蛋白表達(dá)水平的影響；細(xì)胞遷移試驗(yàn)分析Mel對(duì)LoVo細(xì)胞活性的影響；RT-PCR檢測(cè)Mel對(duì)LoVo細(xì)胞中PTEN mRNA 表達(dá)水平的影響；使用重組腺病毒作為干預(yù)手段，Annexin-V試驗(yàn)驗(yàn)證Mel是否通過(guò)PTEN發(fā)揮抑癌作用。結(jié)果 與對(duì)照組相比，Mel能明顯抑制LoVo細(xì)胞的集落形成能力，能抑制LoVo細(xì)胞的細(xì)胞核增殖抗原PCNA的蛋白表達(dá)水平，80 μmol·L-1Mel干預(yù)48 h，可將LoVo細(xì)胞中PCNA的蛋白表達(dá)水平抑制到61.57%±2.81%(T=7.086，P=0.019)；Mel能上調(diào)LoVo細(xì)胞內(nèi)抑癌基因PTEN的mRNA表達(dá)水平，80 μmol·L-1Mel干預(yù)48 h后PTEN的mRNA 表達(dá)水平上調(diào)至160.43%±4.71%(T=24.244，P=0.002)；Mel能上調(diào)LoVo細(xì)胞內(nèi)PTEN的蛋白表達(dá)水平，80 μmol·L-1Mel干預(yù)48 h后PTEN的蛋白表達(dá)水平上調(diào)至152.63%±3.33%(T=27.359，P=0.001)；Annexin-V試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明Mel的對(duì)LoVo細(xì)胞的抑制作用可能與上調(diào)PTEN基因表達(dá)有關(guān)。結(jié)論 Mel能抑制LoVo細(xì)胞的增殖和遷移，其機(jī)制可能與上調(diào)PTEN的表達(dá)水平有關(guān)。

Mel；人結(jié)腸癌細(xì)胞；PTEN；增殖；遷移；重組腺病毒；LoVo細(xì)胞

結(jié)直腸癌(colorectal cancer, CRC)是世界第3大腫瘤，約占全球所有腫瘤的10%，男性的發(fā)病率高于女性，每年約有60萬(wàn)人死于該疾病[1-2]。當(dāng)前CRC主要的治療手段包括外科手術(shù)、放射治療以及輔助化療(臨床評(píng)估為Ⅲ、Ⅳ期或高風(fēng)險(xiǎn)的Ⅱ期CRC患者)[3]。在5年生存期方面，I期患者的生存率可達(dá)90%以上，而IV期患者則低至10%[3]。

現(xiàn)有的研究結(jié)果表明，癌癥的發(fā)生與一系列基因結(jié)構(gòu)和功能的改變相關(guān)(包括癌基因和抑癌基因的突變)[1]。本文的研究對(duì)象PTEN(phosphatase and tensin homolog)，又被稱(chēng)為第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶和張力蛋白同系物，是公認(rèn)的惡性腫瘤抑制基因，它是細(xì)胞的重要調(diào)控因子，影響細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移和代謝[3]。PTEN基因的表達(dá)變化能對(duì)人類(lèi)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展產(chǎn)生一定的影響[4]，是結(jié)直腸癌的潛在治療靶點(diǎn)。

美洛昔康(meloxicam，Mel)是一種環(huán)氧合酶-2(COX-2)選擇性抑制劑，具有選擇性高、副作用小和半衰期較長(zhǎng)的優(yōu)點(diǎn)[5]。本實(shí)驗(yàn)室前期研究結(jié)果提示，Mel可能具有一定的抗腫瘤作用[6]。為了進(jìn)一步證實(shí)上述發(fā)現(xiàn)和揭示Mel的抗癌作用機(jī)制，本文以人結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞和PTEN基因?yàn)檠芯繉?duì)象，探索Mel對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖和遷移的影響及其相關(guān)機(jī)制。

本研究結(jié)果，將有助于詮釋Mel對(duì)人結(jié)直腸癌LoVo細(xì)胞的作用和機(jī)制，可為Mel作為抗癌候選藥物的進(jìn)一步深度研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)證據(jù)和相關(guān)理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試劑及細(xì)胞培養(yǎng)人結(jié)直腸癌LoVo細(xì)胞、293細(xì)胞(American Type Culture Collection，ATCC)；Mel(西安昊軒生物科技有限公司)；試驗(yàn)所用抗體(Santa Cruz Biotechnology公司)；重組腺病毒(芝加哥大學(xué)何通川教授惠贈(zèng))；采用DMEM培養(yǎng)基(高糖)培養(yǎng)細(xì)胞(含10%胎牛血清，100 kU ·L-1青霉素和0.1 g ·L-1鏈霉素)，DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清(Hyclone)；細(xì)胞培養(yǎng)條件為5% CO2和37℃；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(日本TaKaRa公司)。其它常用生物化學(xué)和分子生物學(xué)試劑均為分析純。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及分組試驗(yàn)分為對(duì)照組和試驗(yàn)組。試驗(yàn)組使用Mel處理細(xì)胞，Mel用DMSO溶解作為工作液，設(shè)20、40和80 μmol·L-13個(gè)濃度梯度試驗(yàn)組；對(duì)照組的處理是使用相同體積的DMSO。

1.3 集落形成試驗(yàn)將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的LoVo細(xì)胞接種于6孔板，每孔細(xì)胞數(shù)量約為1×104，接種4h后確認(rèn)細(xì)胞貼壁，分別使用20、40和80 μmol·L-1Mel干預(yù)。加藥24 h后棄去藥液，用預(yù)冷(4℃)PBS洗3次以除去殘留藥液，使用0.25%的胰蛋白酶消化后收集細(xì)胞。將細(xì)胞吹散成為單細(xì)胞懸液，細(xì)胞計(jì)數(shù)后每組分為50、100、200個(gè)細(xì)胞鋪于12孔板，每孔加入不含藥物的完全培養(yǎng)基2 mL，置于5% CO2、37℃孵箱中孵育。孵育14 d后，棄培養(yǎng)基，用預(yù)冷(4℃)PBS洗3次后，每孔加入用PBS緩沖、用10%甲醛配制的飽和結(jié)晶紫溶液0.2 mL，室溫下染色25 min后移去結(jié)晶紫染液，用PBS清洗3次以除去未與細(xì)胞結(jié)合結(jié)晶紫，將孔板于室溫晾干后進(jìn)行掃描。每組試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.4 劃痕試驗(yàn)將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的LoVo細(xì)胞接種于6孔板，每孔細(xì)胞數(shù)量約為1×105，于孵箱中培養(yǎng)至細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)，棄去完全培養(yǎng)基，用10 μL移液器槍頭劃出均勻的劃痕，每孔劃3條，用marker筆在6孔板底部標(biāo)記定位，作為后續(xù)觀察的定位點(diǎn)。劃出均勻劃痕后，用預(yù)冷(4℃)PBS洗去劃痕時(shí)刮下的細(xì)胞，洗凈后，每孔中加入無(wú)血清DMEM培養(yǎng)基2 ml，以試驗(yàn)設(shè)計(jì)濃度的Mel干預(yù)(0、20、40和80 μmol·L-1)，加藥處理0、6、24 h后，將6孔板置于倒置顯微鏡下(100倍)照相，以分析細(xì)胞遷移的現(xiàn)象。每組試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.5 RT-PCR試驗(yàn)將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的LoVo細(xì)胞接種于T25培養(yǎng)瓶，每瓶細(xì)胞數(shù)為1×106。待細(xì)胞貼壁后，分別加入20、40和80 μmol·L-1的Mel進(jìn)行干預(yù)或加入DMSO作為對(duì)照。24、48 h后，采用常規(guī)TRIzol法提取細(xì)胞總RNA，于-80℃下保存。逆轉(zhuǎn)錄方法參照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(日本TaKaRa公司)說(shuō)明書(shū)，RT-PCR測(cè)定PTEN基因表達(dá)水平，凝膠成像儀(美國(guó)BIO-RAD公司)成像并用Image Lab 3.0軟件分析結(jié)果。每組試驗(yàn)重復(fù)3次。

Tab 1 Sequences of PCR primers

1.6 Western blot 試驗(yàn)將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的LoVo細(xì)胞接種于6孔板中，每孔細(xì)胞數(shù)為1×105，分別使用20、40、80 μmol·L-1的Mel處理，相同條件下培養(yǎng)24、48 h后收集細(xì)胞提取各組總蛋白，細(xì)胞裂解和溶胞產(chǎn)物通過(guò)煮沸10 min變性，采用BCA法進(jìn)行總蛋白定量；總蛋白用10%的變性聚丙烯酰胺不連續(xù)凝膠(SDS-PAGE)進(jìn)行電泳，將目標(biāo)蛋白從凝膠電轉(zhuǎn)至PVDF 膜后，按Western blot常規(guī)方法進(jìn)行操作，化學(xué)發(fā)光法ECL顯影，凝膠成像儀(美國(guó)BIO-RAD公司)成像并用Image Lab 3.0軟件分析結(jié)果。每組試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.7 重組腺病毒的擴(kuò)增取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的293細(xì)胞接種于T75，孵育至鏡下觀察到T75中長(zhǎng)至約80% 293細(xì)胞時(shí)，加入2 μL重組腺病毒Ad-si.PTEN原液并迅速混勻，于孵箱中繼續(xù)培養(yǎng)。加入重組腺病毒24、48、72 h后，在熒光下觀察病毒感染率，當(dāng)293細(xì)胞出現(xiàn)50%漂浮時(shí)，用吸管吹下細(xì)胞終止培養(yǎng)。于3 000 r·min-1，4℃下離心10 min，收集293細(xì)胞于EP管，儲(chǔ)存于-80℃過(guò)夜；次日從-80℃冰箱取出EP管在37℃下快速解凍，解凍后用渦旋混勻器充分振蕩，按此方法反復(fù)凍融4次以充分從細(xì)胞中釋放病毒；最后，于8 000 r·min-1，4℃下離心15 min所收集上清液即為擴(kuò)增所得重組腺病毒，儲(chǔ)存于-20℃?zhèn)溆谩?/p>

1.8 重組腺病毒的滴度測(cè)定取相同濃度的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期LoVo細(xì)胞懸液接種于24孔板，每孔細(xì)胞數(shù)量約為2×103，接種4 h后于鏡下觀察到細(xì)胞貼壁，將重組腺病毒分為6組(0.25、0.5、1 、2、4、8 μL)依次加入各孔，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔，置于孵箱中孵育24、48、72 h后，在熒光下觀察病毒感染率，在白光下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況，選取LoVo細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好且病毒感染率較高的病毒濃度，作為后續(xù)試驗(yàn)中重組腺病毒組的濃度。

1.9 Annexin-V檢測(cè)24孔板中接種對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期LoVo細(xì)胞，每孔細(xì)胞數(shù)為1×103，按試驗(yàn)設(shè)計(jì)加入Mel(40 μmol·L-1)、Ad-si.PTEN干預(yù)細(xì)胞。干預(yù)24 h后，棄培養(yǎng)基，用預(yù)冷PBS(4℃)洗3次，加入100 μL Binding Buffer和FITC標(biāo)記的10 μL Annexin-V(20 mg·L-1)，在室溫下避光孵育30 min后，加入400 μL Binding Buffer，立即用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察并在100倍倒置顯微鏡下拍照。每個(gè)試驗(yàn)組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。

2 結(jié)果

2.1 Mel對(duì)LoVo細(xì)胞增殖能力的影響集落形成試驗(yàn)結(jié)果顯示(Fig 1A)，Mel對(duì)LoVo細(xì)胞的集落形成能力具有明顯抑制作用。細(xì)胞核增殖抗原PCNA是細(xì)胞增殖相關(guān)基因，其表達(dá)水平與細(xì)胞增殖狀態(tài)成正比。Western blot試驗(yàn)結(jié)果顯示(Fig 1B、C)，Mel能下調(diào)LoVo細(xì)胞中的細(xì)胞核增殖抗原PCNA蛋白表達(dá)水平。與對(duì)照組相比，80 μmol·L-1Mel干預(yù)48 h，可將LoVo細(xì)胞中PCNA的蛋白表達(dá)水平抑制到61.57%±2.81%(t=7.086，P=0.019)。結(jié)果表明，Mel具有抑制LoVo細(xì)胞增殖的能力。

2.2 Mel對(duì)LoVo細(xì)胞活性的影響細(xì)胞劃痕試驗(yàn)結(jié)果顯示(Fig 2)，Mel能夠明顯抑制LoVo細(xì)胞的遷移，并且其抑制作用強(qiáng)度與藥物濃度的高低成正相關(guān)。因此，Mel能降低LoVo細(xì)胞的活性。

2.3 Mel對(duì)LoVo細(xì)胞中PTEN mRNA表達(dá)水平的影響RT-PCR結(jié)果顯示(Fig 3)，與對(duì)照組相比，80 μmol·L-1Mel干預(yù)48 h后PTEN的mRNA表達(dá)水平上調(diào)至160.43%±4.71%(t=24.244，P=0.002)。結(jié)果提示，Mel可上調(diào)LoVo細(xì)胞中PTEN的mRNA表達(dá)。

2.4 Mel對(duì)LoVo細(xì)胞中PTEN蛋白表達(dá)水平的影響Western blot試驗(yàn)結(jié)果顯示(Fig 4)，與對(duì)照組相比， 80 μmol·L-1Mel干預(yù)48 h后PTEN的蛋白表達(dá)水平上調(diào)至152.63%±3.33%(t=27.359，P=0.001)，Mel能上調(diào)LoVo細(xì)胞內(nèi)PTEN的蛋白表達(dá)水平。

2.5 Ad-si.PTEN 重組腺病毒逆轉(zhuǎn)Mel對(duì)LoVo細(xì)胞的凋亡作用Annexin-V 試驗(yàn)結(jié)果顯示(Fig 5)，與對(duì)照組相比，Mel(40 μmol·L-1)能明顯誘導(dǎo)LoVo細(xì)胞凋亡；單獨(dú)使用Ad-si.PTEN 重組腺病毒組的細(xì)胞凋亡現(xiàn)象并不明顯；而合用Mel(40 μmol·L-1)與Ad-si.PTEN 腺病毒組，則能一定程度上逆轉(zhuǎn)Mel對(duì)LoVo細(xì)胞的凋亡促進(jìn)作用。Ad-si.PTEN重組腺病毒能部分逆轉(zhuǎn)Mel對(duì)LoVo細(xì)胞的凋亡作用。

Fig 1 Effects of meloxicam on proliferation of LoVo cells

LoVo cells were treated with different concentrations of meloxicam for 24, 48 h, followed by colony formation assay and Western blot. A: The crystal violet staining results; B: The results of Western blot assay; C: The quantification of the western-blot results.*P<0.05vscontrol group

3 討論

臨床證據(jù)表明，免疫反應(yīng)增強(qiáng)是結(jié)直腸癌發(fā)展過(guò)程中一個(gè)公認(rèn)的危險(xiǎn)因素，約80%～90%結(jié)直腸癌中存在著COX-2的高表達(dá)[7]。根據(jù)與炎癥反應(yīng)關(guān)系的差異，可以將結(jié)直腸癌分為兩類(lèi)：① 散發(fā)性結(jié)直腸癌(sporadic CRC，SCRC)，一種源于內(nèi)在遺傳不穩(wěn)定性的腫瘤，炎癥反應(yīng)滯后于腫瘤發(fā)生；② 炎癥誘導(dǎo)性結(jié)直腸癌(colitis associated cancer, CAC)，一種由慢性炎癥性腸道疾病誘發(fā)的腫瘤。值得注意的是，人類(lèi)最常見(jiàn)的慢性炎癥性腸道疾病是潰瘍性結(jié)腸炎和Chron′s疾病，它們均與結(jié)直腸癌發(fā)生相關(guān)[8]。COX-2的高表達(dá)可以促進(jìn)上皮細(xì)胞增殖，抑制上皮細(xì)胞凋亡，以及觸發(fā)血管新生[7]；關(guān)于阿司匹林抑制結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的研究證據(jù)已比較充分[9]。本研究結(jié)果提示，COX-2抑制劑Mel能抑制LoVo細(xì)胞的增殖和活性，其機(jī)制可能與PTEN的表達(dá)上調(diào)有關(guān)；為免疫反應(yīng)參與癌癥的發(fā)生與發(fā)展假說(shuō)提供了新的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。

Fig 2 Effects of meloxicam on migration in LoVo cells

LoVo cells were treated with different concentrations of meloxicam for 0, 6 and 24 h, followed by Wound healing assay

Fig 3 Effects of meloxicam on mRNA level of PTEN in LoVo cells

LoVo cells were treated with different concentrations of meloxicam for 24 and 48 h. followed by RT-PCR assay. A: The results of RT-PCR assay; B: The quantification of the RT-PCR results.*P<0.05vscontrol group

Fig 4 Effects of meloxicam on protein level of PTEN in LoVo cells

LoVo cells were treated with different concentrations of meloxicam for 24 and 48 h. followed by Western-blot assay. A: The results of Western-blot assay; B: The quantification of the western-blot results.*P<0.05,**P<0.01vscontrol group

Fig 5 Effects of Ad-si.PTEN on apoptosis in LoVo cells

LoVo cells were treated with meloxicam(40 μmol·L-1)or Ad-si.PTEN for 24 h, followed by Annexin-V analysis. A: control group analysis results; B: treated with meloxicam(40 μmol·L-1) group analysis results; C: treated with Ad-si.PTEN group analysis results; D: treated with meloxicam(40 μmol·L-1) and Ad-si.PTEN group analysis results

集落形成試驗(yàn)?zāi)軌驒z驗(yàn)單個(gè)細(xì)胞的增殖能力，孵箱中培養(yǎng)14 d后，1個(gè)細(xì)胞增殖分化成為50個(gè)以上的細(xì)胞，即形成肉眼可見(jiàn)的集落，證明該細(xì)胞處于較好的增殖狀態(tài)，否則表明細(xì)胞增殖狀態(tài)受到抑制；細(xì)胞核增殖抗原PCNA是細(xì)胞增殖相關(guān)基因，其表達(dá)水平與細(xì)胞增殖狀態(tài)成正比[10]；本文的集落形成試驗(yàn)和PCNA蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，分別從細(xì)胞和分子水平印證了Mel能抑制人結(jié)直腸癌LoVo細(xì)胞增殖。劃痕試驗(yàn)?zāi)軐?duì)細(xì)胞的遷移能力進(jìn)行直觀評(píng)價(jià)[11]，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,Mel能明顯降低人結(jié)直腸癌LoVo細(xì)胞的遷移能力，可能有助于控制晚期結(jié)直腸癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。RT-PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Mel能上調(diào)LoVo細(xì)胞中抑癌基因PTEN 的mRNA和蛋白表達(dá)水平；Annexin-V試驗(yàn)中，Ad-si.PTEN腺病毒能夠部分逆轉(zhuǎn)Mel促進(jìn) LoVo細(xì)胞的凋亡作用；可見(jiàn)，PTEN基因的表達(dá)可能與Mel的抗LoVo細(xì)胞作用有關(guān)。

流行病學(xué)研究結(jié)果表明[4,12-13]，第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶和張力蛋白同系物(PTEN)是最常見(jiàn)的惡性腫瘤抑制基因，它是PI3K/Akt信號(hào)通路的負(fù)性調(diào)節(jié)物，影響細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移，腫瘤細(xì)胞的PTEN水平下調(diào)與預(yù)后不良關(guān)系密切。Mel對(duì)LoVo細(xì)胞增殖、遷移的影響可能就是通過(guò)調(diào)節(jié)PI3K/Akt信號(hào)通路發(fā)揮作用，本課題組將在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步驗(yàn)證。因此，根據(jù)前人的研究成果和本試驗(yàn)結(jié)果，作者推測(cè)Mel可能有利于延緩結(jié)直腸癌病理進(jìn)程、改善結(jié)直腸癌患者的預(yù)后，值得做深入研究。期望本文的結(jié)果和結(jié)論，能夠?yàn)榻Y(jié)直腸癌新藥研發(fā)及新治療靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)，提供出新的、有益的線(xiàn)索和思考。

(致謝：本文實(shí)驗(yàn)在重慶市生物化學(xué)與分子藥理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室完成，重慶市生物化學(xué)與分子藥理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室何百成教授給予技術(shù)指導(dǎo)和部分經(jīng)費(fèi)資助，特致衷心感謝！)

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Effects of meloxicam on proliferation,migration and expression of PTEN of human colorectal cancer cells

ZHOU Mi1, QIU Feng1, ZHANG Yuan1, WANG Jia-yu2, YANG Mao-sheng3

(1.DeptofPharmacy,theFirstAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China;2.DeptofPharmacy,ChongqingHealthCenterforWomenandChildren,Chongqing400010,China;3.DeptofPharmacology,JishouUniversitySchoolofMedicine,JishouHunan416000,China)

Aim To investigate the effects of meloxicam on the proliferation, migration and expression of PTEN of human colorectal cancer LoVo cells. Methods The colony formation test was used to detect the effect of meloxicam on the proliferation of LoVo cells. The cell migration assay was applied to analyze the effect of meloxicam on LoVo cells activity. The RT-PCR assay was used to detect the effect of meloxicam on the mRNA expression of PCNA and PTEN gene. The western blot assay was applied to analyze the effects of meloxicam on the expression of PTEN protein. The recombinant adenovirus and Annexin-V assay were used to testify the relationship between PTEN gene and anti-cancer effect of meloxicam. Results Compared with the control group, meloxicam could inhibit the colony formation and PCNA protein expression of LoVo cells. At 48 h and 80 μmol·L-1, the expression of PCNA protein was reduced to 61.57%±2.81%(T=7.086，P=0.019), the mRNA expression of PTEN gene increased to 160.43%±4.71%(T=24.244，P=0.002), and the expression of PTEN protein increased to 152.63%±3.33%(T=27.359，P=0.001). Results Annexin-V test indicated that the anti-cancer effect of meloxicam was associated with the up-regulated expression of PTEN. Conclusions Meloxicam can inhibit the proliferation and migration of LoVo cells by up-regulating the expression of PTEN.

meloxicam; human colorectal cancer cells; PTEN; proliferation; migration; recombinant adenovirus; LoVo cells

時(shí)間：2015-11-24 11:00 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20151124.1100.030.html

2015-08-2,

2015-09-28

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 81071462，81372120)

周 密(1987-)，女，碩士生，研究方向：分子藥理學(xué)，E-mail:137127220@qq.com; 秧茂盛(1965-)，男，博士，教授，研究方向：藥理學(xué)，通訊作者,Tel: 0743-8759168，E-mail:1724041576@qq.com

10.3969/j.issn.1001-1978.2015.12.015

A

1001-1978(2015)12-1704-06

R329.24；R394.2；R735.350.22；R979.1