老年骨肉瘤患者術(shù)后組織中星形膠質(zhì)細(xì)胞升高基因-1、核因子-κBP65對血管生成的作用

祁玉林 何秀娟

(青海省人民醫(yī)院骨科，青海 西寧 810000)

老年骨肉瘤患者術(shù)后組織中星形膠質(zhì)細(xì)胞升高基因-1、核因子-κBP65對血管生成的作用

祁玉林 何秀娟1

(青海省人民醫(yī)院骨科，青海 西寧 810000)

目的 檢測老年骨肉瘤患者術(shù)后組織中星形膠質(zhì)細(xì)胞升高基因(AEG)-1和核因子(NF)-κBP65表達(dá)，觀察二者與白細(xì)胞分化抗原(CD)31陽性的微血管密度(MVD)的關(guān)系。方法 79例老年骨肉瘤術(shù)后組織作為觀察組，50例骨瘤脫鈣后組織作為對照組。應(yīng)用免疫組化二步法檢測二組中AEG-1、NF-κBP65和CD31的表達(dá)。結(jié)果 觀察組中AEG-1、NF-κBP65蛋白表達(dá)的陽性率明顯高于對照組，觀察組中MVD值明顯高于對照組，觀察組中AEG-1、NF-κBP65表達(dá)、MVD值均與腫瘤的最大徑、是否伴有壞死、脈管浸潤、Ki67增殖指數(shù)及轉(zhuǎn)移相關(guān)。相關(guān)分析顯示AEG-1和MVD、NF-κBP65和MVD、AEG-1和NF-κBP65均具有正相關(guān)性。結(jié)論 老年骨肉瘤患者術(shù)后組織中AEG-1、NF-κBP65高表達(dá)對促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展有重要作用，AEG-1、NF-κBP65均與腫瘤間質(zhì)MVD有協(xié)同作用。

骨肉瘤；星形膠質(zhì)細(xì)胞升高基因(AEG)-1；核因子(NF)-κBP65；微血管密度

老年骨肉瘤約占總發(fā)病率的30%。骨肉瘤的發(fā)生過程是持續(xù)性的基因和蛋白表達(dá)異常引起的，其間質(zhì)血管生成是重要的促進(jìn)因素〔1〕。研究證實骨肉瘤是富于血管的腫瘤〔2〕，在腫瘤生長過程中，間質(zhì)血管新生對腫瘤的生長有重要價值。白細(xì)胞分化抗原(CD)31被認(rèn)為是血管內(nèi)皮的重要標(biāo)記蛋白，其特異性強〔3〕。星形膠質(zhì)細(xì)胞升高基因(AEG)-1最初是在膠質(zhì)細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的由HIV-1感染誘發(fā)的高表達(dá)基因，其不僅參與細(xì)胞的代謝、凋亡進(jìn)程，還可以調(diào)節(jié)腫瘤的血管生成〔4〕。研究顯示AEG-1能活化核因子(NF)-κBP65，使其功能更多樣性〔5〕。本實驗分析老年骨肉瘤患者術(shù)后組織中AEG-1、NF-κBP65和CD31的表達(dá)及相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 近3年收治的老年骨肉瘤患者術(shù)后組織作為觀察組，共79例，其中男40例，女39例；年齡60～82歲，平均65.2歲。均符合WHO中的標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)病理醫(yī)師確診。均未進(jìn)行放、化療。選取同期在我院經(jīng)病理證實為骨瘤的脫鈣組織50例作為對照組，其中男25例；女25例，年齡60～80歲，平均64.3歲。

1.2 AEG-1、NF-κBP65和CD31蛋白的檢測 AEG-1、NF-κBP65和CD31試劑均為濃縮液，均購自武漢博士德生物技術(shù)公司。三種試劑均依不同比例稀釋后進(jìn)行預(yù)實驗，并確定染色及表達(dá)最理想的濃度。正式實驗應(yīng)用免疫組化二步法、應(yīng)用DAB染色。操作嚴(yán)格按說明書操作，嚴(yán)格質(zhì)量控制。

1.3 AEG-1、NF-κBP65和CD31蛋白的判定方法 AEG-1、NF-κBP65的陽性部位為細(xì)胞質(zhì)，以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，計數(shù)5個400倍視野，計算陽性細(xì)胞的百分率，以陽性率≥5%為陽性，<5%為陰性。CD31陽性為血管內(nèi)皮細(xì)胞，選擇染色陽性的細(xì)胞叢或連續(xù)的細(xì)胞分支定為陽性血管，選擇5個400倍視野，取平均值認(rèn)定為微血管密度(MVD)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行χ2檢驗、線性相關(guān)性分析。

2 結(jié) 果

2.1 兩組AEG-1、NF-κBP65和MVD比較 觀察組中AEG-1和NF-κBP65的陽性表達(dá)(37例和46例)、MVD值(21.24±6.65)均明顯高于對照組(2例、5例，7.25±3.89，均P<0.000 1)。

2.2 觀察組中AEG-1、NF-κBP65陽性率和MVD值在不同臨床特征分組中的比較 觀察組中AEG-1、NF-κBP65表達(dá)、MVD值均與腫瘤的最大徑、是否伴有壞死、Ki67增殖指數(shù)、脈管浸潤及轉(zhuǎn)移相關(guān)。見表1。

表1 觀察組中AEG-1、NF-κBP65陽性率和MVD值在不同臨床特征分組中的比較〔n(%)〕

2.3 觀察組中AEG-1、NF-κBP65陽性率和MVD相關(guān)性分析 觀察組中AEG-1和MVD(r=0.58,P=0.010 9)、NF-κBP65和MVD(r=0.47,P=0.046 1)、AEG-1和NF-κBP65(r=0.48,P=0.040 9)均具有正相關(guān)性。

3 討 論

老年人骨肉瘤在發(fā)病前常伴有骨Paget或放射后腫瘤等改變。一般來講其體積大，以干骺端為中心、形成肉質(zhì)或質(zhì)硬的腫物〔6〕，有的組織中含有少量軟骨。腫瘤在發(fā)展過程中常伴有骨質(zhì)破壞〔7〕。骨肉瘤為富于血管性的腫瘤，因此當(dāng)腫瘤快速生長過程中，間質(zhì)血管要新生，對新生腫瘤組織提供氧和營養(yǎng)〔8〕。CD31是血管內(nèi)皮的重要標(biāo)記蛋白，其標(biāo)記血管的特異性強，可以常規(guī)應(yīng)用于腫瘤血管生成的研究中〔9,10〕。AEG-1由3 611個堿基組成，分子量是64 kD。AEG-1由12個外顯子和11個內(nèi)顯子組成，定位在8q22〔11,12〕。相關(guān)研究顯示AEG-1有3個核定位信號區(qū)，此種結(jié)構(gòu)可能與AEG-1從胞質(zhì)向胞核的轉(zhuǎn)運有關(guān)。AEG-1的信號傳導(dǎo)復(fù)雜〔13〕。有觀點認(rèn)為AEG-1是Ha-ras和C-myc調(diào)節(jié)腫瘤進(jìn)展的下游分子。當(dāng)Ras活化后，引起AEG-1的高表達(dá)，使腫瘤細(xì)胞失控性增生、轉(zhuǎn)化、侵襲及轉(zhuǎn)移〔14,15〕。NF-κBP65是在B細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的一種結(jié)合于免疫球蛋白κ輕鏈增強子上的核蛋白〔16〕，不僅對抗機(jī)體的抗凋亡過程，還對腫瘤細(xì)胞的生長及增殖有重要促進(jìn)作用〔17,18〕，學(xué)者認(rèn)為NF-κBP65可以促進(jìn)上皮和間質(zhì)的轉(zhuǎn)化作用〔19〕。NF-κBP65對腫瘤的血管生成過程中調(diào)節(jié)作用可能更復(fù)雜，NF-κBP65既可以對血管內(nèi)皮生長因子形成有效的活化，也可以作為轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮促腫瘤血管生成的作用〔20〕。學(xué)者關(guān)注AEG-1與NF-κBP65的協(xié)同作用，認(rèn)為AEG-1通過激活NF-κBP65通路誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的生長和侵襲〔21〕。此時NF-κBP65活化，使腫瘤組織中的細(xì)胞增殖活躍，凋亡障礙。也有觀點認(rèn)為NF-κBP65活化后可以使腫瘤細(xì)胞間黏附力下降，而腫瘤細(xì)胞與異源性細(xì)胞的黏附能力增強，使腫瘤細(xì)胞獲得較強的轉(zhuǎn)移潛能〔22〕。宋恩霖等〔23〕通過對40例宮頸癌檢測相關(guān)蛋白的表達(dá)，認(rèn)為AEG-1可以通過NF-κB信號途徑間接調(diào)節(jié)腫瘤微血管生成的能力，促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。

老年人常伴有退行性改變，局部血液循環(huán)常不理想，且常伴有血管和萎縮性改變及硬化，而新生的腫瘤間質(zhì)血管常與老年人血管硬化狀態(tài)無關(guān)。本實驗關(guān)注骨肉瘤間質(zhì)的血管生成情況，選擇了最特異性的抗體CD31，其對新生血管的標(biāo)記更理想。本實驗結(jié)果提示AEG-1和NF-κBP65高表達(dá)及其與MVD的協(xié)同作用是促進(jìn)骨肉瘤發(fā)生的重要內(nèi)在因素。AEG-1和NF-κBP65均可以促進(jìn)CD31陽性的MVD高表達(dá)，使血管生成更多，對局部組織血流量的供應(yīng)更強，對局部營養(yǎng)有明顯改善作用，為腫瘤細(xì)胞無限制生長提供了重要條件。AEG-1和NF-κBP65高表達(dá)可以直接促進(jìn)血管生成，也可以通過調(diào)節(jié)血管生成相關(guān)因子分泌多種成血管信號，此時血管內(nèi)皮增殖明顯，經(jīng)血流沖擊形成管腔。也可以在血管周圍由固有血管形成出芽，形成新生血管〔24,25〕。本文結(jié)果提示AEG-1、NF-κBP65參與了骨肉瘤的生長、脈管侵犯及轉(zhuǎn)移。壞死是惡性腫瘤的特征，也是致瘤因素對局部組織破壞的直接體現(xiàn)，因此AEG-1、NF-κBP65與腫瘤性壞死的相關(guān)性，提示AEG-1、NF-κBP65對局部組織的破壞和影響能力更強。Ki67是細(xì)胞增殖的重要標(biāo)志物，而AEG-1、NF-κBP65與Ki67標(biāo)記的增殖指數(shù)相關(guān)，提示AEG-1、NF-κBP65對腫瘤的增殖有重要影響。

1 王 東,仲召陽,李增鵬,等.骨肉瘤VEGF表達(dá)及VEGF抗體抑制血管生成的實驗研究〔J〕.重慶醫(yī)學(xué),2006;35(15):1369-71.

2 付文娟,趙濟(jì)華,甘洪全,等.凋亡相關(guān)蛋白FLIP和NF-κB在人骨肉瘤中表達(dá)及其與凋亡的關(guān)系研究〔J〕.中國全科醫(yī)學(xué),2012;15(6B):1959-61.

3 李永昊,肖玉周,俞 嵐,等.骨肉瘤中Survivin與核因子κB的表達(dá)及臨床意義〔J〕.解剖與臨床,2006;11(2):89-92.

4 洪練青,李 青.宮頸癌及其癌前病變中AEG-1的表達(dá)及臨床意義〔J〕.中國腫瘤外科雜志,2012;4(6):358-60.

5 Vartak-Sharma N,Gelman BB,Joshi C,etal.Astrocyte elevated gene-1 is a novel modulator of HIV-1-associated neuroinflammation via regulation of nuclear factor-κB signaling and excitatory amino acid transporter-2 repression〔J〕.J Biol Chem,2014;289(28):19599-612.

6 Li C,Zhan C,Chen Y,etal.Analysis report for osteosarcoma expression profile〔J〕.Eur Rev Med Pharmacol Sci,2013;17(20):2804-9.

7 Bid HK,Roberts RD,Cam M,etal.Np63 promotes pediatric neuroblastoma and osteosarcoma by regulating tumor angiogenesis〔J〕.Cancer Res,2014;74(1):320-9.

8 Klotzsche-von Ameln A,Prade I,Grosser M,etal.PHD4 stimulates tumor angiogenesis in osteosarcoma cells via TGF-α〔J〕.Mol Cancer Res,2013;11(11):1337-48.

9 Virman J,Bono P,Luukkaala T,etal.VEGFR3 and CD31 as prognostic factors in renal cell cancer〔J〕.Anticancer Res,2015;35(2):921-7.

10 Rowland KJ,Diaz-Miron J,Guo J,etal.CXCL5 is required for angiogenesis,but not structural adaptation after small bowel resection〔J〕.J Pediatr Surg,2014;49(6):976-80.

11 高婷婷.AEG-1表達(dá)對老年宮頸癌SiHa細(xì)胞周期的影響及相關(guān)機(jī)制〔J〕.中國老年學(xué)雜志,2014；34(11):2920-1.

12 趙 霞,賈喜花,張丙信.AEG-1和Ki67在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其意義〔J〕.現(xiàn)代醫(yī)學(xué),2014;42(8):892-5.

13 劉凱軍,李 勇,王文韜.胃癌組織中AEG-1的表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系研究〔J〕.河北醫(yī)藥,2012;34(5):653-5.

14 Xia X,Du R,Zhao L,etal.Expression of AEG-1 and microvessel density correlates with metastasis and prognosis of oral squamous cell carcinoma〔J〕.Hum Pathol,2014;45(4):858-65.

15 Long M,Dong K,Gao P,etal.Overexpression of astrocyte-elevated gene-1 is associated with cervical carcinoma progression and angiogenesis〔J〕.Oncol Rep,2013;30(3):1414-22.

16 邊國新,李松英.粘液表皮樣癌中NF-κB和COX-2表達(dá)的相關(guān)性研究〔J〕.浙江醫(yī)學(xué),2007;29(7):648-50.

17 李雪珍,金曉明,劉民生.Notch-1、NF-κB和B-catenin在口腔鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.山東大學(xué)耳鼻喉眼學(xué)報,2011;25(1):9-11.

18 盛傳倫,孫步彤.NSAIDs對胃癌移植瘤的抑制作用及以COX-2、VEGF、NF-ΚB表達(dá)的影響〔J〕.中國實驗診斷學(xué),2006;1(6):575-6.

19 Song FN,Duan M,Liu LZ,etal.RANKL promotes migration and invasion of hepatocellular carcinoma cells via NF-κB-mediated epithelial-mesenchymal transition〔J〕.PLoS One,2014;9(9):e108507.

20 楊麗華,王凱峰,周軼萍,等.核因子-κB在人卵巢癌血管生成中的作用及機(jī)制〔J〕.癌癥,2004;23(5):531-4.

21 Emdad L,Sarkar D,Su ZZ,etal.Activation of the nuclear factor kappaB pathway by astrocyte elevated gene-1:implications for tumor progression and metastasis〔J〕.Cancer Res,2006;66(3):1509-16.

22 Sarkar D,Park ES,Emdad L,etal.Molecular basis of nuclear factor-kappaB activation by astrocyte elevated gene-1〔J〕.Cancer Res,2008;68(5):1478-84.

23 宋恩霖,王茂梅,熊秀娟,等.子宮頸癌組織中AEG-1表達(dá)與微血管生成的關(guān)系〔J〕.臨床與實驗病理學(xué)雜志,2014;30(7):717-9.

24 Erdem H,Oktay M,Yildirim U,etal.Expression of AEG-1 and p53 and their clinicopathological significance in malignant lesions of renal cell carcinomas:a microarray study〔J〕.Pol J Pathol,2013;64(1):28-32.

25 Gaballah HH,Zakaria SS,Ismail SA.Activity and expression pattern of NF-κB/P65 in peripheral blood from hepatocellular carcinomapatients-link to hypoxia inducible factor -1α〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev,2014;15(16):6911-7.

〔2013-12-05修回〕

(編輯 苑云杰)

祁玉林(1968-)，男,主治醫(yī)師，主要從事骨科疾病研究。

R738

A

1005-9202(2015)12-3337-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2015.12.069

1 武警青海總隊醫(yī)院內(nèi)科