胃癌患者VEGF及SSTR表達(dá)及與胃癌的相關(guān)性研究

梁君銘 曾寬 駱雪梅

胃癌的死亡率在全世界惡性腫瘤中居第二位，是臨床最為常見的惡性腫瘤之一[1]。提高胃癌早期診斷率是降低死亡率的重要途徑。多項研究表明胃癌的浸潤轉(zhuǎn)移是多種基因及其蛋白表達(dá)產(chǎn)物協(xié)同作用的結(jié)果[2]。本研究通過檢測胃癌組織血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）及生長抑素受體（SSTR）的表達(dá)情況，同時以健康者作為對照，以評判其在胃癌浸潤和轉(zhuǎn)移過程中的作用，為臨床早期防治提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年1月-2014年12月就診于本院的胃癌患者90例為胃癌組，其中男69例，女21例，年齡44~76歲，平均（59.24±7.19）歲，所有患者均經(jīng)鏡及病理檢查確診。90例胃癌患者中腺癌84例，原位癌4例，鱗癌1例，惡性間質(zhì)瘤1例；分級結(jié)果：高分化18例，中分化49例，低分化23例；低分化腺癌39例，未分化癌17例。胃癌浸潤深度：浸潤達(dá)漿膜層者64例，未達(dá)漿膜層者26例；病理分期結(jié)果：Ⅰ期24例，Ⅱ期11例，Ⅲ期34例，Ⅳ期21例；胃周淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況：發(fā)生轉(zhuǎn)移者61例，未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者29例。另取同期于本院體檢的60例健康者作為對照組，其中男32例，女28例，年齡33~69歲，平均（58.24±6.31）歲。

1.2 主要試劑 兔抗人SSTR1、SSTR2、SSTR3多克隆抗體（美國santa cruz公司），VEGF單克隆抗體（福州邁新公司），SP-9000試劑盒及DAB試劑盒均購自北京中杉金橋公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 免疫組織化學(xué)染色 將組織蠟塊制成厚約4 μm的切片，按照SP試劑盒說明書內(nèi)容嚴(yán)格操作。使用已知陽性切片作為陽性對照，PBS代替一抗做陰性對照。

1.3.2 結(jié)果判讀 （1）SSTR結(jié)果判讀：光鏡下進行觀測，陽性表達(dá)位于細(xì)胞漿，呈黃棕色顆粒時為陽性反應(yīng)，出現(xiàn)陽性反應(yīng)的細(xì)胞即為陽性細(xì)胞。依據(jù)染色深淺與視野內(nèi)陽性細(xì)胞所占比例評定陽性反應(yīng)的強度。觀察時每張切片上選取5個高倍視野，每個視野計數(shù)細(xì)胞100個，按照觀察視野中陽性細(xì)胞所占的百分比例進行評分：百分比≤5%時為0，6%~25%之間為1，26%~50%之間為2，51%~75%之間為3，≥76%時為4。按照染色強度進行評分：0為陰性，淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。最后按兩者乘積將標(biāo)本的陽性反應(yīng)分成4個等級：分別為陰性：1級（0、1、2）；弱陽性：2級（3、4）；中度陽性：3級（6、8）；強陽性：4級（9、12）。兩者相乘得分≥2分時為陽性表達(dá)，<2分時為陰性表達(dá)。（2）VEGF結(jié)果判讀：VEGF陽性判定方法同SSTR，按照腫瘤細(xì)胞的染色比例進行分級，胞質(zhì)染色<10%為陰性表達(dá)，≥10%為陽性表達(dá)[3]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 使用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進行分析，VEGF和SSTR在不同組織中的表達(dá)差異比較采用 字2檢驗，兩者的相關(guān)性分想要的采用Spearman相關(guān)性檢驗，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織和正常胃黏膜組織的VEGF表達(dá) 胃癌組VEGF表達(dá)陽性56例，陽性率為62.2%；對照組正常胃黏膜組中VEGF表達(dá)陽性5例，陽性率為8.3%，胃癌組VEGF表達(dá)陽性率顯著高于對照組，比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（ 字2=43.328，P<0.05）。見表 1。

2.2 胃癌組織和正常胃黏膜組織的SSTR1~3表達(dá)胃癌組SSTR1表達(dá)陽性73例，陽性率為81.1%；SSTR2表達(dá)陽性67例，陽性率為74.4%；SSTR3表達(dá)陽性47例，陽性率為52.2%。對照SSTR1表達(dá)陽性47例，陽性率為78.3%；SSTR2表達(dá)陽性56例，陽性率為93.3%；SSTR3表達(dá)陽性51例，陽性率為85.5%。兩組SSTR1陽性表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），胃癌組SSTR2、SSTR3表達(dá)陽性率低于對照組，比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

2.3 VEGF與SSTR在胃癌組織中表達(dá)的相關(guān)性 VEGF與SSTR2~3在胃癌組織中的表達(dá)存在顯著相關(guān)性（P<0.05），而與SSTR1的表達(dá)并未見顯著相關(guān)（P>0.05）。見表 1。

表1 VEGF與SSTR在胃癌組織中表達(dá)的交叉表 例

3 討論

惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展機制繁雜，不同腫瘤間的機制存在差異性，但其中的某些關(guān)鍵步驟基本相同，例如在腫瘤的轉(zhuǎn)移與浸潤過程中，細(xì)胞因子發(fā)揮著重要作用。胃癌的發(fā)生與發(fā)展涉及到原癌基因激活和抑癌基因失活等一系列改變，其中細(xì)胞周期調(diào)控基因的變異發(fā)揮著關(guān)鍵作用[4-6]。生長抑素（SS）是細(xì)胞周期調(diào)控過程的重要抑制激素，通過SSTR相關(guān)亞型的介導(dǎo)而發(fā)揮抑癌作用，對多種惡性腫瘤的生長具有抑制作用[7]。SSTR是一種G蛋白偶聯(lián)受體，共包括SSTR1~5等5個亞型，各亞型通過不同的傳導(dǎo)途徑發(fā)揮抗腫瘤細(xì)胞增殖作用[8]。Reubi等[9]研究發(fā)現(xiàn)人的正常胃黏膜主要表達(dá)SSTRl。本實驗中，胃癌組SSTR1表達(dá)陽性73例，陽性率為81.1%，SSTR2表達(dá)陽性67例，陽性率為74.4%，SSTR3表達(dá)陽性47例，陽性率為52.2%。對照組SSTR1、SSTR2、SSTR3的表達(dá)陽性率分別為78.3%、93.3%與85.5%。兩組SSTR1陽性表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），胃癌組SSTR2、SSTR3表達(dá)陽性率低于對照組，比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），與相關(guān)研究[10]結(jié)論一致。提示在胃癌的發(fā)生發(fā)展中伴有SSTR的丟失，SSTR表達(dá)率的降低影響了SS的抑制效應(yīng)的發(fā)揮，從而在某種程度上促進了胃癌的發(fā)生與發(fā)展。

惡性腫瘤的局部生長和轉(zhuǎn)移離不開血管新生，后者需要血管生成因子如VEGF、PDGF及IL-8等的生成和分泌[11-12]。VEGF是一種二聚體糖蛋白，具有特異性促進內(nèi)皮細(xì)胞分裂增殖的作用，同時能以自分泌或旁分泌形式刺激腫瘤細(xì)胞發(fā)生分裂，在諸多血管生長因子中誘導(dǎo)腫瘤血管生成的作用最強[13-14]。研究表明VEGF過度表達(dá)通過多種途徑參與了腫瘤血管的形成，在腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移及預(yù)后中具有重要作用[15]。本研究中，胃癌組VEGF表達(dá)陽性56例，陽性率為62.2%，對照組正常胃黏膜組中VEGF表達(dá)陽性5例，陽性率為8.3%，組間比較胃癌組VEGF表達(dá)陽性率高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。提示VEGF的高表達(dá)促進了腫瘤生長和血管形成，在胃癌的進展中發(fā)揮重要作用。

此外，對胃癌組織中VEGF與SSTR表達(dá)的相關(guān)性進行研究發(fā)現(xiàn)，VEGF與SSTR2~3在胃癌組織中的表達(dá)存在顯著相關(guān)性（P<0.05），而與SSTR1的表達(dá)并未見顯著相關(guān)（P>0.05）。VEGF與SSTR2~3表達(dá)存在負(fù)相關(guān)，與兩者在胃癌組織中的表達(dá)陽性率結(jié)果相一致。

綜上所述，VEGF在胃癌組織中高表達(dá)，而SSTR在胃癌組織中低表達(dá)，兩者間顯著負(fù)相關(guān)，在胃癌的發(fā)生發(fā)展調(diào)控中信號傳導(dǎo)在上調(diào)VEGF的同時伴發(fā)SSTR的丟失。

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