• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    冠狀動脈疾病患者CD36基因多態(tài)性與心血管相關(guān)因素的關(guān)系

    2015-06-09 08:08:24趙寧張慧杰王建昌
    疑難病雜志 2015年5期
    關(guān)鍵詞:合子內(nèi)含子多態(tài)性

    趙寧,張慧杰,王建昌

    ?

    論著·臨床

    冠狀動脈疾病患者CD36基因多態(tài)性與心血管相關(guān)因素的關(guān)系

    趙寧,張慧杰,王建昌

    目的 研究CD36基因多態(tài)性與冠狀動脈疾病(CAD)危險因素之間的關(guān)系。方法 選擇解放軍空軍總醫(yī)院<60歲90例CAD患者,抽取患者空腹靜脈血檢測血紅蛋白(Hb)、白細(xì)胞(WBC)、單核細(xì)胞(M)、嗜堿性粒細(xì)胞(B)、空腹血糖(FPG)、高敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)及三酰甘油(TG)、載脂蛋白A1(ApoA1)、載脂蛋白B(ApoB)和脂蛋白(α)[(Lp(α)]。同時記錄患者的體質(zhì)量、收縮壓、舒張壓,并計算體質(zhì)量指數(shù)和平均動脈壓。利用變性高效液相色譜技術(shù)(DHPLC)分析包含內(nèi)含子片段的外顯子4和5的擴(kuò)增產(chǎn)物,分析基因型和各變量之間的相關(guān)性。結(jié)果 發(fā)現(xiàn)CD36 基因有兩種多態(tài)性變異:IVS3-6 T/C (rs3173798)和IVS4-10 G/A(rs3211892)。其中IVS3-6 T/C多態(tài)性的C等位基因與肥胖、糖尿病、血清Lp(α)濃度降低以及心肌梗死發(fā)病年齡提前有關(guān)。而IVS4-10 G/A多態(tài)性的A等位基因與心肌梗死發(fā)病較晚和白細(xì)胞數(shù)量增加有關(guān)。結(jié)論 CD36的IVS3-6 C等位基因與心血管疾病的危險因素(如hs-CRP、BMI和2型糖尿病)有關(guān),與心肌梗死發(fā)病年齡提前有關(guān);而IVS4-10 A等位基因與心肌梗死發(fā)病年齡推遲有關(guān)。CD36 的多態(tài)性在CAD中的作用仍需進(jìn)一步研究。

    基因多肽性CD36;冠心??;心肌梗死

    隨著生活水平的提高,冠心病的發(fā)病年齡已經(jīng)有低齡化的趨勢。近年來遺傳因素在冠心病發(fā)病機(jī)制中的地位越來越引起人們的重視。CD36是一種位于多種細(xì)胞(血小板、內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、橫紋肌細(xì)胞、造血干細(xì)胞等)表面的B型清除受體。其介導(dǎo)的主要功能涉及到脂質(zhì)利用、胰島素抵抗、炎性反應(yīng)、動脈粥樣硬化和血栓的形成,在動脈粥樣硬化中起重要作用,在白種人中的研究發(fā)現(xiàn)CD36 基因多態(tài)性與心血管疾病的風(fēng)險具有明顯的相關(guān)性,特別是游離于循環(huán)系統(tǒng)的單核細(xì)胞CD36 mRNA的表達(dá)可能是發(fā)生冠狀動脈疾病高風(fēng)險的一個標(biāo)志,但目前還沒有直接證據(jù)證明CD36基因突變能降低或增加高血脂、動脈硬化及其并發(fā)癥(血管功能障礙、高血壓、缺血性心臟病)的風(fēng)險[1~3],而且CD36基因是否在漢族人群中存在多態(tài)性目前還沒有報道,為了解決這些問題,我們觀察了其基因多態(tài)性中CD36 基因編碼氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)和脂酸結(jié)合結(jié)構(gòu)域區(qū)域的序列變化與冠狀動脈疾病(CAD)已知的危險因素之間的關(guān)系,為冠心病的早期診斷、危險人群的篩選和基因治療提供依據(jù)。

    1 資料與方法

    1.1 臨床資料 收集2007年1月—2010年12月在我院就診的60歲以下CAD患者90例。納入標(biāo)準(zhǔn):臨床狀況穩(wěn)定,無急性冠狀動脈癥狀,在近期(1年內(nèi))沒有進(jìn)行血管再通術(shù)治療。排除標(biāo)準(zhǔn):有先天性血液動力學(xué)紊亂或獲得性心臟瓣膜病,有癥狀心力衰竭 (NYHA>1級), 腎衰竭(肌酐>265 μmol/L),1型糖尿病, 甲狀腺功能不全, 惡性腫瘤。CAD診斷主要通過冠狀動脈血管造影,符合下列特征之一即可確定診斷:(1)左冠狀動脈狹窄程度≥40%;(2)心外膜下3個主要側(cè)支之一狹窄程度≥50%;(3)動脈分支狹窄程度≥70%。該試驗完全遵循赫爾辛基宣言并獲得我院倫理審查委員會的批準(zhǔn),試驗前所有患者均簽署知情同意書。

    1.2 觀察指標(biāo)和方法 抽取患者空腹靜脈血檢測血紅蛋白(Hb)、白細(xì)胞(WBC)、單核細(xì)胞(M)、嗜堿性粒細(xì)胞(B)、空腹血糖(FPG)、高敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)及三酰甘油(TG)、載脂蛋白A1(ApoA1)、載脂蛋白B(ApoB)和脂蛋白(α)[(Lp(α)]。同時記錄患者的體質(zhì)量、收縮壓、舒張壓,并計算體質(zhì)量指數(shù)和平均動脈壓。

    1.3 基因檢測 空腹?fàn)顟B(tài)下取肘部靜脈血3 ml促凝離心后取上清液,-80℃保存。分離血細(xì)胞目標(biāo)基因組DNA[4],具體步驟參考AxyPrep血液全基因組DNA小量提取試劑盒說明書;使用變性高效液相色譜(DHPLC)技術(shù)研究包含內(nèi)含子片段的外顯子4和5的擴(kuò)增產(chǎn)物[5]。通過DHPLC 檢測PCR產(chǎn)物的變化,并使用Applied Biosystems公司的染料終止子循環(huán)測序反應(yīng)試劑盒對其進(jìn)行雙向測序。使用373A DNA片段分析儀進(jìn)行半自動序列分析(Applied Biosystems, Foster City, CA)。

    1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,根據(jù)CD36 基因型將病例分組,計量資料使用Mann-Whitney U 檢驗和t檢驗,使用精確檢驗評估Hardy-Weinberg平衡下的基因型分布的一致性。計算比值比 (OR)及其95%可信區(qū)間(95%CI),分析基因型和定性變量之間是否有顯著的相關(guān)性。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 CD36基因多態(tài)性 DHPLC檢測到的變異主要包括內(nèi)含子中2個單核苷酸替換(多態(tài)性),即IVS3-6 T/C (rs3173798)和IVS4-10 G/A (rs3211892),外顯子中并未發(fā)現(xiàn)序列改變。2種序列變異在Hardy-Weinberg平衡下基因型分布一致(P=1)。說明實驗選取的樣本基因型可以穩(wěn)定遺傳,可以代表整個群體。見表1。

    表1 患者CD36基因多態(tài)性

    2.2 不同CD36 基因型患者的臨床參數(shù)比較 IVS3-6 TC雜合子患者較TT純合子患者體質(zhì)量指數(shù)稍高,肥胖明顯(BMI≥30 kg/m2) (OR=2.93,95%CI 0.98~8.76,P=0.07)。糖尿病發(fā)病率高(OR=6.09,95%CI 1.66~22.32,P=0.01),既往心肌梗死患者中,TC基因型患者的心肌梗死發(fā)病年齡提前(OR=1.346,95%CI 0.528~3.429,P=0.057)。相反,IVS4-10 GA雜合子患者比野生型GG純合子心肌梗死首次發(fā)病年齡要晚(OR=3.453,95%CI1.532~7.786,P=0.003)。見表2。

    2.3 不同CD36基因型患者的血細(xì)胞數(shù)和生化數(shù)據(jù)比較 IVS3-6 TC 雜合子白細(xì)胞中嗜堿性粒細(xì)胞的比例比TT患者低(OR=5.21,95%CI 2.464~11.3,P=0.03)。IVS3-6 TC基因型hs-CRP較TT基因型高(OR=2.93,95%CI 1.8~9.6,P=0.02),Lp(a)低(OR=5.039,95%CI 2.173~11.883,P=0.01)。IVS4-10 GA基因型白細(xì)胞數(shù)更高(OR=2.17, 95%CI 1.05~4.57,P=0.03)。見表3。

    3 討 論

    隨著人們生活水平提高、人口老齡化加重及城市化發(fā)展進(jìn)程加快,冠心病及其相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)病率在逐年提高,已經(jīng)成為影響健康的首要疾病。近年來,對于冠心病發(fā)生相關(guān)基因水平的研究已越來越受到人們的重視[6],并發(fā)現(xiàn)了大量與心血管疾病發(fā)生相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性位點(single nucleotide polymorphism,SNP),這些方法為冠心病診斷提供方便可行的分子標(biāo)記,以早期預(yù)測高風(fēng)險人群并指導(dǎo)預(yù)防和治療[7~9]。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)中國人CD36內(nèi)含子片段中有IVS3-6 T/C (rs3173798)和IVS4-10 G/A (rs3211892)2種多態(tài)性[10],2種變異均與心臟疾病的發(fā)生有關(guān)。IVS3-6 TC 和IVS4-10 GA基因型與心肌梗死發(fā)病年齡之間也存在相關(guān)趨勢(P=0.057)或顯著相關(guān)性(P=0.003),但相關(guān)性相反:TC雜合子首次發(fā)病的年齡更小,而GA雜合子首次發(fā)病年齡更大。此外IVS3-6 TC雜合子與3種心血管危險因素有關(guān),分別為hs-CRP、肥胖發(fā)病率、糖尿病史[11],其中IVS3-6 TC 雜合子比野生型純合子患者更易患2型糖尿病,但各組間空腹血糖并無差異,分析原因可能是由于多數(shù)TC雜合子的糖尿病患者口服降糖藥或使用胰島素所致。而IVS4-10 GA雜合子患者中2型糖尿病的發(fā)病率與野生型沒有差別。在國外同類研究中Leprêtre等[11]指出白種人CD36的IVS4-10 G/A變異與脂類代謝水平之間有相關(guān)性,Love-Gregory等[12]研究了有高血壓的非裔美國人中發(fā)現(xiàn)的所有的CD36 序列變異(內(nèi)含子3中的rs3211850;內(nèi)含子9中的rs3173804;外顯子10中的無義突變rs3211938;3′ UTR中的rs7755, rs13246513和rs13230419)均與體格參數(shù)(BMI>30 kg/m2,腰圍>100 cm)相關(guān),白種人rs1527479 CD36 啟動子多態(tài)性與胰島素抗性和2型糖尿病有關(guān)。這些研究和我們的結(jié)論基本是一致的。最新的研究還提出在非裔美國人中CD36 多態(tài)性可能會導(dǎo)致血漿HDL-C濃度增加[13],在有文獻(xiàn)報道成人雙生子登記隊列中CD36啟動子多態(tài)性rs2151916與LDL-C水平有關(guān):次要等位基因純合子患者 LDL-C水平更低[14]。內(nèi)含子11中的1種多態(tài)性(rs1527483)和3′UTR 區(qū)(外顯子14和15)的2種多態(tài)性(rs3840546, rs1049673)與血漿游離脂肪酸代謝有關(guān)。但在我們的試驗觀察到2種基因型間血脂濃度沒有顯著差異,這主要是因為我們試驗中幾乎所有病例均服用了他汀類藥物,影響試驗結(jié)果[15]。但另一方面我們還發(fā)現(xiàn)IVS3-6 TC基因型與Lp(a)降低有關(guān), 這可能是動脈粥樣硬化疾病(如冠心病和中風(fēng))的危險因素。非洲人的外顯子10純和無義突變(rs3211938)與血紅蛋白水平提高有關(guān)。在我們的試驗中并未發(fā)現(xiàn)不同組間血紅蛋白水平存在差異,卻發(fā)現(xiàn)IVS4-10 GA 雜合子患者的白細(xì)胞數(shù)量更多。目前尚沒有這種相關(guān)性報道的出現(xiàn),其臨床意義還有待進(jìn)一步研究。

    表2 不同CD36 基因型患者的臨床資料比較

    表3 不同CD36基因型的生化指標(biāo)比較

    總之,CD36的IVS3-6C等位基因的多態(tài)性與心血管疾病的危險因素(如hs-CRP、BMI和2型糖尿病)有關(guān)。IVS3-6 C等位基因與心肌梗死發(fā)病年齡提前有關(guān),而IVS4-10 A等位基因與心肌梗死發(fā)病年齡推遲有關(guān)?;虻倪@種突變對冠狀動脈疾病的風(fēng)險以及臨床病程的功能性意義,還需要進(jìn)一步的評估。

    1 Chilongola J,Balthazary S,Mpina M,et al.CD36 deficiency protects against malarial anaemia in children by reducing Plasmodium falciparum-infected red blood cell adherence to vascular endothelium[J].Trop Med Int Health,2009,14(4):810-816.

    2 Fry AE,Ghansa A,Small KS,et al.Positive selection of a CD36 nonsense variant in sub-Saharan Africa, but no association with severe malaria phenotypes[J].Hum Mol Genet,2009,18(14):2683-2692.

    3 Goyenechea E,Collins LJ,Parra D,et al.CD36 gene promoter polymorphisms are associated with low density Lipoprotein-Cholesterol in normal twins and after a Low-Calorie Diet in obese subjects[J].Twin Research and Human Genetics,2008,11(6):621-628.

    4 Lahiri DK,Schnabel B.DNA isolation by a rapid method from human blood samples:effects of MgCl2,EDTA,storage time,and temperature on DNA yield and quality[J].Biochem Genet,2003,31(4):321-328.

    5 Raá ME,Safranow K,Poncyliusz W.Molecular basis of human CD36 gene mutations[J].Mol Med,2009,13(5):288-296.

    6 Knowles JW,Wang H,Itakura H,et al.Association of polymorphisms in platelet and hemostasis system genes with acute myocardial infarction[J].Am Heart J,2007,154(6):1052-1058.

    7 Love-Gregory L,Sherva R,Sun LW,et al.Variants in the CD36 gene associate with the metabolic syndrome and high-density lipoprotein cholesterol[J].Hum Mol Genet,2008,17(11):1695-1704.

    8 Nicholson AC,Han J,Febbraio M,et al.Role of CD36,the macrophage class B scavenger receptor,in atherosclerosis[J].Ann N Y Acad Sci,2012,947(43):224-228.

    9 楊俊平,方五旺,賈永平,等.血管緊張素轉(zhuǎn)換酶和血管緊張素原基因多態(tài)性與冠心病的關(guān)系[J].中國心血管病研究,2013,11(8):600-604.

    10 Park YM,Febbraio M,Silverstein RL.CD36 modulates migration of mouse and human macrophages in response to oxidized LDL and May contribute to macrophage trapping in the arterial intima[J].Journal of Clinical Investigation,2009,119(1):136-145.

    11 Leprêtre F,Linton KJ,Lacquemant C,et al.Genetic study of the CD36 gene in a French diabetic population[J].Diabetes Metab,2008,30(3):459-463.

    12 Love-Gregory L,Sherva R,Sun LW,et al.Variants in the CD36 gene associate with the metabolic syndrome and high-density lipoprotein cholesterol[J].Hum Mol Genet,2008,17(11):1695-1704.

    13 Ra ME,Suchy J,Kurzawski G,et al.Analysis of human CD36 gene sequence alterations in the oxLDL-binding region performed by denaturing high-performance liquid chromatography[J].Genet Test Mol Biomarkers,2010,14(5):551-557.

    14 Silverstein RL.Inflammation, atherosclerosis, and arterial thrombosis: role of the scavenger receptor CD36[J].Cleve Clin J Med,2009,76(Suppl 2):S27-S30.

    15 Teupser D,Mueller MA,Koglin J,et al.CD36 mRNA expression is increased in CD14+ monocytes of patients with coronary heart disease[J].Clin Exp Pharmacol Physiol,2008,35(5/6):552-556.

    撰寫醫(yī)學(xué)論文主體部分的要求

    1 前言 概述研究的背景、目的、研究思路、理論依據(jù)、研究方法、預(yù)期結(jié)果和意義等。僅需提供與研究主題緊密相關(guān)的參考文獻(xiàn),切忌寫成文獻(xiàn)綜述。不要涉及本研究中的數(shù)據(jù)或結(jié)論。一般以200~300個漢字為宜,占全文字?jǐn)?shù)的5%左右。

    2 方法 描述研究對象(人或?qū)嶒瀯游?,包括對照組)的選擇及其基本情況,以及研究所采用的方法(包括分組方法)。實驗研究的論文常寫成“材料與方法”,臨床研究論文常寫成“資料與方法”。臨床試驗研究還應(yīng)說明試驗程序是否經(jīng)所在單位或地區(qū)倫理學(xué)相關(guān)機(jī)構(gòu)的批準(zhǔn),研究對象是否知情同意并簽署知情同意書。

    2.1 觀察對象: 觀察對象為患者,需注明病例和對照者來源、選擇標(biāo)準(zhǔn)、一般情況、觀察指標(biāo)和療效判斷標(biāo)準(zhǔn)等。研究對象為實驗動物,需注明動物的名稱、種系、等級、數(shù)量、來源、性別、年齡、體重、飼養(yǎng)條件和健康狀況等。

    2.2 研究方法: 詳述新創(chuàng)的方法及改良方法的改進(jìn)之處,以備他人重復(fù)。采用他人方法,應(yīng)以引用文獻(xiàn)的方式給出方法的出處,無須詳細(xì)描述。

    2.3 藥品與試劑: 藥品及化學(xué)試劑使用通用名稱,并注明劑量、單位、純度、批號、生產(chǎn)單位、生產(chǎn)時間及給藥途徑。

    2.4 儀器、設(shè)備: 應(yīng)注明名稱、型號、規(guī)格、生產(chǎn)單位、精密度或誤差范圍。無須描述工作原理。

    2.5 統(tǒng)計學(xué)處理: 描述統(tǒng)計學(xué)方法及其選擇依據(jù), 并說明所使用的統(tǒng)計學(xué)軟件。

    3 結(jié)果 “結(jié)果”是指實驗所得數(shù)據(jù)、觀察記錄,經(jīng)過綜合分析和統(tǒng)計學(xué)處理的結(jié)果,而不是原始數(shù)據(jù),更不是原始記錄。按邏輯順序在正文的文字、表格和圖中描述所獲得的結(jié)果。結(jié)果的敘述應(yīng)實事求是,簡潔明了,數(shù)據(jù)準(zhǔn)確,層次清楚,邏輯嚴(yán)謹(jǐn),不應(yīng)與討論內(nèi)容相混淆。應(yīng)著重總結(jié)重要的研究結(jié)果。以數(shù)據(jù)反映結(jié)果時,應(yīng)注意不能只描述導(dǎo)數(shù)(如百分?jǐn)?shù)),還應(yīng)同時給出據(jù)以計算導(dǎo)數(shù)的絕對數(shù)。一般應(yīng)對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理,并給出具體的統(tǒng)計值,例如:t= 2.85,P<0.01。

    4 討論 “討論”是對研究結(jié)果的科學(xué)解釋與評價,是研究所形成的科學(xué)理論。著重討論研究結(jié)果的創(chuàng)新之處及從中導(dǎo)出的結(jié)論,包括理論意義、實際應(yīng)用價值、局限性,及其對進(jìn)一步研究的啟示。如果不能導(dǎo)出結(jié)論,也可通過討論,提出建議、設(shè)想、改進(jìn)意見或待解決的問題等。應(yīng)將本研究結(jié)果與其他有關(guān)的研究相比較,并將本研究結(jié)論與目的聯(lián)系起來討論,并列出相關(guān)參考文獻(xiàn)。不必重述已在前言和結(jié)果部分詳述過的數(shù)據(jù)或資料。不應(yīng)列入圖或表。

    Polymorphism of CD36 gene and cardiovascular risk factors in patients with coronary artery disease

    ZHAONing,ZHANGHuijie,WANGJianchang.DepartmentofInternalMedicine,AirForceGeneralHospital,PLA,Beijing100142,China

    Correspondingauthor:WANGJianchang,E-mail:1084292231@qq.com

    Objective To investigate the relationship between CD36 gene polymorphism and coronary artery disease (CAD)’s risk factors.Methods 90 CAD patients aged <60 were collected, hemoglobin (Hb), white blood cell (WBC), mononuclear cells (M), basophils (B),fasting blood glucose (FPG), high sensitive C reactive protein (hs-CRP), total cholesterol (TC), high density lipoprotein cholesterol (HDL-C) and low density lipoprotein cholesterol (LDL-C) and triglyceride(TG),apolipoprotein A1(ApoA1), ApoB and lipoprotein (α) [Lp (α)]were detected. At the same time recording quality, systolic pressure, diastolic pressure volume of patients, and calculated the body mass index and mean arterial pressure. Using denaturing high performance liquid chromatography to analyze intron fragment containing exon 4 and exon 5’s amplicon, analyzed the correlation between the genotype and the variables.Results There are two kinds of polymorphism of CD36 gene: IVS3-6 T/C (rs3173798) and IVS4-10 G/A (rs3211892).The IVS3-6 T/C polymorphism of C alleles was correlated with obesity, diabetes, serum Lp (a) concentration decreases and the early age onset of myocardial infarction. While the number of IVS4-10 G/A polymorphism of A alleles was related to late myocardial infarction and increase of white blood cell.Conclusion CD36’s IVS3-6 C allele was correlated with the risk factors of cardiovascular disease (such as hs-CRP, BMI and type 2 diabetes mellitus), and correlated with early age onset of myocardial infarction; while the IVS4-10 A allele was correlated with late age onset of myocardial infarction. The role of CD36 polymorphism in CAD is still needs further research.

    Gene polymorphyism,CD36;Coronary heart disease; Myocardial infarction

    100142 北京,解放軍空軍總醫(yī)院心臟中心

    王建昌,E-mail:1084292231@qq.com

    10.3969 / j.issn.1671-6450.2015.05.004

    2014-07-09)

    猜你喜歡
    合子內(nèi)含子多態(tài)性
    單核苷酸多態(tài)性與中醫(yī)證候相關(guān)性研究進(jìn)展
    線粒體核糖體蛋白基因中內(nèi)含子序列間匹配特性分析
    開一家小店,找回童年
    莫愁(2019年34期)2020-01-01 02:18:10
    “塔莎小姐”:風(fēng)雨共擔(dān)才是愛情真諦
    伴侶(2019年7期)2019-07-25 06:34:47
    不同方向內(nèi)含子對重組CHO細(xì)胞中神經(jīng)生長因子表達(dá)的影響
    開一家小店,找回童年
    更 正
    內(nèi)含子的特異性識別與選擇性剪切*
    馬鈴薯cpDNA/mtDNA多態(tài)性的多重PCR檢測
    GlobalFiler~? PCR擴(kuò)增試劑盒驗證及其STR遺傳多態(tài)性
    国产精品99久久久久久久久| 给我免费播放毛片高清在线观看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 一本一本综合久久| 久久久久久久久久黄片| 国产爱豆传媒在线观看| 可以在线观看毛片的网站| 免费在线观看成人毛片| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 一a级毛片在线观看| 亚洲av美国av| 男女视频在线观看网站免费| 久久久国产成人精品二区| 国产高清三级在线| 婷婷亚洲欧美| 亚洲欧美日韩无卡精品| 欧美黄色片欧美黄色片| 一边摸一边抽搐一进一小说| 欧美极品一区二区三区四区| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 757午夜福利合集在线观看| 欧美日韩黄片免| 丁香欧美五月| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产美女午夜福利| 欧美中文日本在线观看视频| 国产在线精品亚洲第一网站| 欧美日韩综合久久久久久 | 不卡av一区二区三区| 成年女人看的毛片在线观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 美女黄网站色视频| 亚洲国产精品成人综合色| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 久久久久精品国产欧美久久久| 中文字幕av在线有码专区| 动漫黄色视频在线观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 久久久精品欧美日韩精品| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 老鸭窝网址在线观看| 成年免费大片在线观看| 亚洲中文日韩欧美视频| 久久精品人妻少妇| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 天天躁日日操中文字幕| 99热这里只有精品一区 | 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国语自产精品视频在线第100页| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲精华国产精华精| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 成人永久免费在线观看视频| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 亚洲熟女毛片儿| 久久国产精品人妻蜜桃| 亚洲av美国av| 久久中文看片网| 精品国产三级普通话版| 少妇丰满av| 精华霜和精华液先用哪个| 无限看片的www在线观看| 午夜精品一区二区三区免费看| 两个人看的免费小视频| 99热这里只有是精品50| 国产 一区 欧美 日韩| www.熟女人妻精品国产| 成熟少妇高潮喷水视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 草草在线视频免费看| 一级a爱片免费观看的视频| 国产精品九九99| 中国美女看黄片| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 久久午夜综合久久蜜桃| 久久香蕉精品热| 午夜福利欧美成人| 欧美成人性av电影在线观看| 色综合欧美亚洲国产小说| 91九色精品人成在线观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 99热只有精品国产| 欧美色视频一区免费| 最新美女视频免费是黄的| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 波多野结衣高清无吗| 日韩欧美三级三区| 午夜精品在线福利| 亚洲男人的天堂狠狠| 无限看片的www在线观看| 2021天堂中文幕一二区在线观| 国产精品九九99| 一本一本综合久久| 午夜免费激情av| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 一本精品99久久精品77| av福利片在线观看| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 日韩av在线大香蕉| 国产97色在线日韩免费| 窝窝影院91人妻| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 黄色女人牲交| a级毛片在线看网站| 成人亚洲精品av一区二区| 不卡av一区二区三区| 999久久久国产精品视频| 久久香蕉精品热| 三级毛片av免费| 色av中文字幕| 最新美女视频免费是黄的| 一级毛片女人18水好多| 少妇的逼水好多| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 免费av毛片视频| 国产黄色小视频在线观看| 欧美中文日本在线观看视频| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 五月伊人婷婷丁香| 亚洲 国产 在线| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 动漫黄色视频在线观看| av在线蜜桃| 国产av在哪里看| 男女床上黄色一级片免费看| 在线观看日韩欧美| 国产1区2区3区精品| 精品电影一区二区在线| 国产一区二区激情短视频| 欧美日韩乱码在线| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 成人午夜高清在线视频| 精品久久久久久久久久久久久| 成年版毛片免费区| 亚洲片人在线观看| 麻豆av在线久日| 日韩欧美在线二视频| 婷婷精品国产亚洲av| 日韩欧美国产一区二区入口| 美女午夜性视频免费| www日本黄色视频网| 婷婷六月久久综合丁香| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 色噜噜av男人的天堂激情| 在线免费观看的www视频| 国产成人福利小说| 舔av片在线| 精品久久久久久久毛片微露脸| 日日干狠狠操夜夜爽| 18美女黄网站色大片免费观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 色播亚洲综合网| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国模一区二区三区四区视频 | av天堂中文字幕网| 色吧在线观看| 久9热在线精品视频| 中文字幕久久专区| 午夜影院日韩av| 性色av乱码一区二区三区2| 性欧美人与动物交配| 日本熟妇午夜| 丰满人妻一区二区三区视频av | 成人三级黄色视频| a级毛片在线看网站| 久久国产精品人妻蜜桃| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 在线观看日韩欧美| 在线国产一区二区在线| 91av网一区二区| 日日干狠狠操夜夜爽| 欧美黄色淫秽网站| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产成人系列免费观看| 十八禁人妻一区二区| 亚洲人成网站高清观看| 波多野结衣高清作品| 一级作爱视频免费观看| 人人妻人人看人人澡| 亚洲成人精品中文字幕电影| 99久久无色码亚洲精品果冻| 日韩欧美国产在线观看| 国内精品美女久久久久久| 亚洲精品粉嫩美女一区| 欧美3d第一页| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产精品久久久av美女十八| 狠狠狠狠99中文字幕| 成人18禁在线播放| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲中文av在线| 免费在线观看亚洲国产| 成人18禁在线播放| 国产成+人综合+亚洲专区| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 手机成人av网站| 三级国产精品欧美在线观看 | 日韩欧美免费精品| 丝袜人妻中文字幕| 久久性视频一级片| 色尼玛亚洲综合影院| 日本成人三级电影网站| 久久精品影院6| 亚洲欧美激情综合另类| 中文字幕高清在线视频| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 美女cb高潮喷水在线观看 | 亚洲av成人一区二区三| 国内揄拍国产精品人妻在线| 天天躁日日操中文字幕| av女优亚洲男人天堂 | 久久久久国产一级毛片高清牌| 中文字幕av在线有码专区| 18禁观看日本| 一夜夜www| 欧美国产日韩亚洲一区| 国内精品美女久久久久久| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 婷婷丁香在线五月| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| xxxwww97欧美| 精品不卡国产一区二区三区| 国产一区二区在线av高清观看| 久久久久性生活片| 亚洲av五月六月丁香网| 国产欧美日韩精品亚洲av| 在线看三级毛片| 一区二区三区国产精品乱码| 亚洲自拍偷在线| 国产精品爽爽va在线观看网站| 中出人妻视频一区二区| 1000部很黄的大片| 91av网站免费观看| 日韩大尺度精品在线看网址| 亚洲国产看品久久| 久9热在线精品视频| 国产精品亚洲美女久久久| 亚洲美女视频黄频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| avwww免费| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲国产欧美网| 啦啦啦免费观看视频1| 男人的好看免费观看在线视频| 窝窝影院91人妻| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 十八禁人妻一区二区| 久久久久久久久中文| 中文字幕人成人乱码亚洲影| a在线观看视频网站| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 久久99热这里只有精品18| 久久久国产成人免费| 亚洲国产欧美网| 国产高清激情床上av| 99精品久久久久人妻精品| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 99热只有精品国产| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产午夜福利久久久久久| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲第一电影网av| 人人妻人人澡欧美一区二区| 青草久久国产| 又黄又爽又免费观看的视频| 久久久水蜜桃国产精品网| 精品无人区乱码1区二区| 国产乱人伦免费视频| 国产精品一区二区三区四区久久| 免费看日本二区| 国产极品精品免费视频能看的| 久久久精品欧美日韩精品| 成人鲁丝片一二三区免费| 特级一级黄色大片| 大型黄色视频在线免费观看| 午夜免费观看网址| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产精品电影一区二区三区| 热99在线观看视频| 国产日本99.免费观看| 一个人看的www免费观看视频| 久久中文看片网| 国产亚洲欧美98| 久久国产精品影院| av在线天堂中文字幕| 亚洲第一电影网av| 欧美av亚洲av综合av国产av| 真人一进一出gif抽搐免费| 不卡av一区二区三区| 国产精品一区二区三区四区久久| 色视频www国产| 婷婷亚洲欧美| www日本黄色视频网| 国产不卡一卡二| 一进一出好大好爽视频| 精品欧美国产一区二区三| 麻豆一二三区av精品| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲av成人av| 国产麻豆成人av免费视频| 真人做人爱边吃奶动态| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产日本99.免费观看| 亚洲av五月六月丁香网| 国产私拍福利视频在线观看| 欧美日韩一级在线毛片| 久久久久免费精品人妻一区二区| 国产真人三级小视频在线观看| 中国美女看黄片| 女人被狂操c到高潮| 白带黄色成豆腐渣| 亚洲中文av在线| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 最好的美女福利视频网| 亚洲av第一区精品v没综合| 老司机午夜福利在线观看视频| 麻豆一二三区av精品| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲七黄色美女视频| 欧美另类亚洲清纯唯美| 网址你懂的国产日韩在线| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 99久久国产精品久久久| 在线观看免费视频日本深夜| 欧美性猛交黑人性爽| 日本黄色片子视频| 我的老师免费观看完整版| 久久久久久久精品吃奶| 欧美日韩国产亚洲二区| АⅤ资源中文在线天堂| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲欧美日韩无卡精品| 高清毛片免费观看视频网站| 国产精品亚洲美女久久久| 天堂动漫精品| www.精华液| 亚洲 国产 在线| 久久久久九九精品影院| 激情在线观看视频在线高清| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 久久国产精品人妻蜜桃| 美女免费视频网站| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国内揄拍国产精品人妻在线| 99精品久久久久人妻精品| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产毛片a区久久久久| 亚洲av成人av| 九色国产91popny在线| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 精品午夜福利视频在线观看一区| 午夜免费成人在线视频| 欧美成狂野欧美在线观看| 婷婷亚洲欧美| 午夜福利在线观看吧| 在线国产一区二区在线| 岛国视频午夜一区免费看| 观看免费一级毛片| АⅤ资源中文在线天堂| 少妇的逼水好多| a级毛片a级免费在线| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产精品av久久久久免费| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产精品av久久久久免费| 欧美日韩国产亚洲二区| 亚洲av熟女| 欧美不卡视频在线免费观看| 免费看十八禁软件| 欧美日韩黄片免| 久久久国产成人免费| 国产精品综合久久久久久久免费| 99热6这里只有精品| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 免费在线观看亚洲国产| 国产成人系列免费观看| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 色尼玛亚洲综合影院| 色综合亚洲欧美另类图片| 一本精品99久久精品77| 久久精品影院6| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲中文av在线| 亚洲国产欧美网| 国产精品av久久久久免费| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 网址你懂的国产日韩在线| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 全区人妻精品视频| 亚洲人成电影免费在线| 日本与韩国留学比较| 成年女人毛片免费观看观看9| 美女免费视频网站| 99久久成人亚洲精品观看| 91麻豆精品激情在线观看国产| 一本精品99久久精品77| 变态另类丝袜制服| 搡老熟女国产l中国老女人| 午夜亚洲福利在线播放| 国产精品1区2区在线观看.| 成人无遮挡网站| 熟女电影av网| 麻豆国产av国片精品| 老熟妇仑乱视频hdxx| 99久久国产精品久久久| 成人三级黄色视频| 黄色丝袜av网址大全| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 成人精品一区二区免费| 男女之事视频高清在线观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 久久久色成人| 精品人妻1区二区| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产一区二区在线观看日韩 | 成年免费大片在线观看| 日韩免费av在线播放| 青草久久国产| 久久这里只有精品19| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲真实伦在线观看| 久久久久九九精品影院| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 99热只有精品国产| 美女高潮的动态| 成人av一区二区三区在线看| 免费搜索国产男女视频| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产成年人精品一区二区| 欧美中文综合在线视频| 好男人电影高清在线观看| 美女cb高潮喷水在线观看 | 男女床上黄色一级片免费看| svipshipincom国产片| 午夜免费观看网址| 国产激情偷乱视频一区二区| 999久久久精品免费观看国产| 国产成人影院久久av| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 色视频www国产| 男女下面进入的视频免费午夜| 级片在线观看| 欧美一区二区国产精品久久精品| 免费看光身美女| 久久亚洲真实| 日韩中文字幕欧美一区二区| bbb黄色大片| 久久久国产欧美日韩av| av黄色大香蕉| 久久香蕉国产精品| 国产精品亚洲美女久久久| 老鸭窝网址在线观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 啦啦啦免费观看视频1| 天堂影院成人在线观看| 成人特级av手机在线观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| cao死你这个sao货| 久久精品91蜜桃| 毛片女人毛片| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 精品午夜福利视频在线观看一区| 88av欧美| 国产伦一二天堂av在线观看| 久久精品91无色码中文字幕| 两个人的视频大全免费| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 99热精品在线国产| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 国产成人aa在线观看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产av一区在线观看免费| 麻豆国产97在线/欧美| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产精品久久视频播放| 国产精品综合久久久久久久免费| 精品午夜福利视频在线观看一区| 五月玫瑰六月丁香| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲五月婷婷丁香| 国产三级在线视频| 日韩欧美国产在线观看| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 久久久国产欧美日韩av| 最新在线观看一区二区三区| 午夜影院日韩av| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产三级在线视频| 性欧美人与动物交配| 亚洲国产精品999在线| 久久久国产成人精品二区| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 99久久综合精品五月天人人| 国产一区二区在线观看日韩 | 欧美日韩福利视频一区二区| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 看免费av毛片| 国产成人精品久久二区二区91| 999久久久精品免费观看国产| 国产97色在线日韩免费| 久久中文看片网| 91九色精品人成在线观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 午夜福利在线在线| 国产人伦9x9x在线观看| or卡值多少钱| 国产精品亚洲一级av第二区| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 国产伦精品一区二区三区四那| 99国产精品一区二区蜜桃av| 两个人的视频大全免费| 成人亚洲精品av一区二区| 九色成人免费人妻av| www日本在线高清视频| 最近在线观看免费完整版| 啦啦啦免费观看视频1| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲一区二区三区色噜噜| 中出人妻视频一区二区| 哪里可以看免费的av片| 婷婷亚洲欧美| 国产麻豆成人av免费视频| 久久这里只有精品中国| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 啪啪无遮挡十八禁网站| 午夜福利高清视频| svipshipincom国产片| 欧美性猛交黑人性爽| 一二三四在线观看免费中文在| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 在线永久观看黄色视频| 亚洲午夜理论影院| 男人的好看免费观看在线视频| 午夜福利18| 久久久精品大字幕| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 在线国产一区二区在线| 久久中文字幕一级| 亚洲av熟女| 国产成+人综合+亚洲专区| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 欧美高清成人免费视频www| 中文字幕熟女人妻在线| 国产视频一区二区在线看| 老司机午夜十八禁免费视频| 精品国产三级普通话版| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲精品一区av在线观看| 国产 一区 欧美 日韩| 黄频高清免费视频| 一进一出抽搐gif免费好疼| 国产久久久一区二区三区| 嫩草影院精品99| 精品国产亚洲在线| 老司机福利观看| 成人特级av手机在线观看| 国产亚洲av高清不卡| 首页视频小说图片口味搜索| 波多野结衣高清作品| 激情在线观看视频在线高清| 亚洲人成伊人成综合网2020| 丰满人妻一区二区三区视频av | 色综合婷婷激情| 桃红色精品国产亚洲av| av国产免费在线观看| 国产精品野战在线观看| 成人无遮挡网站| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产激情欧美一区二区| 中国美女看黄片| 精品久久久久久,| 成人欧美大片| 中国美女看黄片| 少妇人妻一区二区三区视频| 一级毛片精品| a在线观看视频网站| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 丁香六月欧美| 性色avwww在线观看| 一级a爱片免费观看的视频| 国产1区2区3区精品| 十八禁人妻一区二区| www日本黄色视频网| 人人妻人人看人人澡| 给我免费播放毛片高清在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 欧美日本视频| 香蕉国产在线看| 热99在线观看视频| 国产伦在线观看视频一区| 欧美日韩一级在线毛片| 91麻豆精品激情在线观看国产| 亚洲欧美日韩东京热| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 亚洲成人久久爱视频|