自擬柴郁寄生湯對(duì)高催乳素血癥大鼠卵巢PRL/PRLR-JAK2-STAT5信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響

張蕓娜，金哲，睢叢璐，徐翠，徐彩，林彤，黃海濤，佟慶

論著·基礎(chǔ)

自擬柴郁寄生湯對(duì)高催乳素血癥大鼠卵巢PRL/PRLR-JAK2-STAT5信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響

張蕓娜，金哲，睢叢璐，徐翠，徐彩，林彤，黃海濤，佟慶

目的 觀察自擬柴郁寄生湯對(duì)高催乳素血癥(HPRL)模型大鼠卵巢組織PRL/PRLR-JAK2-STAT5信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響及其改善卵巢功能的機(jī)制。方法 Wistar大鼠60只皮下注射多巴胺受體阻斷劑滅吐靈造成高催乳素血癥模型。造模成功后按拉丁方法隨機(jī)分為模型組、溴隱亭組、大劑量組、中劑量組、小劑量組各10只，并設(shè)正常組10只。中藥高劑量組柴郁寄生湯劑量為18 g·kg-1·d-1，中劑量組為9 g·kg-1·d-1，低劑量組為4.5 g·kg-1·d-1。各藥物組每只大鼠每次灌胃量均為2 ml。溴隱亭組給溴隱亭2 mg ·kg-1·d-1；模型組及正常組依據(jù)體質(zhì)量予等容量蒸餾水灌胃；各組每日給藥1次，連續(xù)給藥30 d。治療結(jié)束后將大鼠處死，量取大鼠卵巢體積；檢測血清雌二醇(E2)、促黃體生成素(FSH)；通過Western blot及PCR法檢測卵巢STAT、PRLR表達(dá)水平，以觀察高催乳素血癥環(huán)境對(duì)PRL/PRLR-JAK2/STAT5信號(hào)傳導(dǎo)通路及卵巢功能的影響，并探討其可能機(jī)制。結(jié)果 與正常組比較, 模型組大鼠血清PRL水平明顯升高, E2、FSH水平均明顯下降(P<0.05)；卵巢STAT、PRLR蛋白表達(dá)水平均明顯降低(P<0.05)。與模型組比較，各治療組血清PRL水平均明顯下降,血清E2、FSH水平及卵巢STAT、PRLR表達(dá)水平均明顯升高。不同治療組間比較，中藥中劑量組大鼠血清E2、FSH水平改善最顯明，卵巢STAT、PRLR蛋白表達(dá)明顯最強(qiáng)(P<0.05)，而PRL水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 柴郁寄生湯治療高催乳素血癥對(duì)改善卵巢功能有良好療效,其作用機(jī)制可能是調(diào)節(jié)卵巢PRL/PRLR-JAK2/STAT5信號(hào)傳導(dǎo)通路相關(guān)因子的表達(dá)，進(jìn)而改善E2、FSH等生殖激素水平。

高催乳素血癥；卵巢功能下降；PRLR；STAT5；信號(hào)傳導(dǎo)通路；大鼠

高催乳素血癥(Hyperprolactinemia，HPRL)已成為危害人類生殖健康的主要疾病之一，探討中醫(yī)藥改善HPRL患者生殖內(nèi)分泌功能成為研究熱點(diǎn)。研究表明，PRL/PRLR-JAK2-STAT5信號(hào)傳導(dǎo)通路與生殖功能緊密相關(guān)。子宮內(nèi)膜是垂體外催乳素(PRL)合成的主要部位，子宮內(nèi)膜及卵巢是催乳素受體(PRLR)表達(dá)的主要部位。PRL/PRLR介導(dǎo)JAK2/STAT5信號(hào)傳導(dǎo)途徑能廣泛參與細(xì)胞的增殖、分化以及免疫調(diào)節(jié)等過程，是多種細(xì)胞因子和生長因子信號(hào)傳導(dǎo)的重要途徑，是調(diào)控卵巢排卵、子宮內(nèi)膜容受性等功能的主要信號(hào)傳導(dǎo)途徑。現(xiàn)觀察柴郁寄生湯對(duì)HPRL大鼠卵巢組織PRLR、STAT表達(dá)及血清雌二醇(E2)、促黃體生成素(FSH)水平的影響，進(jìn)一步探討柴郁寄生湯在改善HPRL卵巢功能中的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康雌性Wistar大鼠60只，10周齡，體質(zhì)量約200 g，由維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)公司(北京)[編號(hào)：SCXK(京) 2012-0001] 提供，維持環(huán)境溫度22℃，濕度55%左右，通風(fēng)良好，其中明光、暗光分別照射12 h，自由攝食飲水，每天對(duì)其陰道涂片進(jìn)行檢測，觀察大鼠動(dòng)情周期，持續(xù)10 d。大鼠60只按拉丁方法隨機(jī)分為正常組、模型組、溴隱亭組及中藥大劑量組、中劑量組、小劑量組等共6組，每組10只。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物及試劑：柴郁寄生湯(柴胡、川斷、當(dāng)歸、澤蘭、郁金、白芍、香附、桑寄生、杜仲等)由北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院制劑室按常規(guī)方法一次性煎煮、濃縮，按照要求配成高、中、低濃度藥液，即2.0、1.0、0.5 g/ml(1 ml含生藥2.0 g、1.0 g、0.5 g)，2～8 ℃條件下保存?zhèn)溆?。人促卵泡生成激素放射免疫分析試劑盒，購自北京北方生物技術(shù)研究所。雌二醇定量檢測試劑盒，購自北京北方生物技術(shù)研究所(產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)：YZB/北方所 0051-2006)；Western blot一抗STAT為兔單隆抗體(美國Santa cruz公司),購自北京友誼中聯(lián)生物科技有限公司。ECL(美國Santa Cruz公司)，二抗為辣根酶標(biāo)記山羊抗兔IgG，購自北京中杉金橋公司。催乳素放免檢測試劑盒。

1.1.3 儀器：日本三洋制冰機(jī)；美國 Bio-Rad穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀、垂直電泳槽、半干轉(zhuǎn)電轉(zhuǎn)印儀；美國Thermo 4℃低溫高速離心機(jī)；德國Eppendorf常溫高速離心機(jī)；德國Sartouris電子天平；德國Biophotometer紫外分光光度計(jì)；德國Eppendorf微量加樣器；上海恒溫水浴箱；西安XH6080放免儀；5810R高速離心機(jī)；Image-Pro Plus Analysis Soft ware計(jì)算機(jī)圖像分析儀。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 模型建立：除正常組外，其余5組大鼠皮下注射多巴胺受體阻斷劑滅吐靈50 mg/kg, 每天 1次, 連續(xù)10 d。第10天于大鼠眼眶內(nèi)取血, 放免法測血清催乳素水平, 使血清催乳素水平>100 μg/L。

1.2.2 給藥方法：根據(jù)千克體質(zhì)量劑量換算公式：Db=Da×Rab，Rab=(ka/kb)×(Wa/Wb)1/3，計(jì)算給藥劑量，大鼠等劑量的給藥量為臨床成人每公斤體質(zhì)量用藥量6倍。中藥高劑量組柴郁寄生湯劑量為18 g·kg-1·d-1，中劑量組為9 g·kg-1·d-1，低劑量組為4.5 g·kg-1·d-1。各藥物組每只大鼠每次灌胃量均為2 ml。溴隱亭組給溴隱亭2 mg ·kg-1·d-1；模型組及正常組依據(jù)體質(zhì)量予等容量蒸餾水灌胃；各組每日給藥1次，連續(xù)給藥30 d。

1.3 檢測指標(biāo) (1)各組大鼠排卵后(陰道涂片出現(xiàn)排卵征象)稱體質(zhì)量，而后10%水合氯醛(0.33 ml/100 g)腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈采血后，迅速剖腹取出卵巢。取血液3 000 r/min離心10 min，分離血清保存于-20℃冰箱中，另除凈卵巢組織周圍的脂肪及輸卵管組織，部分卵巢組織-80℃保存待用。(2)通過放免法及化學(xué)發(fā)光法檢測血清E2、FSH、PRL。(3)Western blot檢測卵巢STAT蛋白表達(dá)步驟：提取蛋白，制膠并上樣，電泳處理，膜封閉與電轉(zhuǎn)移，抗原抗體反應(yīng)與顯影完成封閉后，通過TBS-T連續(xù)清洗3次膜，10 min/次，接著將膜向雜交袋轉(zhuǎn)移，加入處理過的抗體，再封口處理，于4℃放置整夜；再通過TBS-T連續(xù)清洗3次膜，10 min/次，將膜向新的雜交袋轉(zhuǎn)移，接著加處理過的二抗，于37℃振蕩操作60 min，再通過TBS-T連續(xù)清洗3次膜，10 min/次；把膜置于ECL的混合液內(nèi)，于室溫振蕩操作5 min，每平方厘米PVDF膜最少需要ECL混合液0.125 ml，才能保證膜被完全覆蓋，除去多余的試劑和氣泡。最后把膜片轉(zhuǎn)移到X 線片盒中，有蛋白吸附的一面向上放置，于暗室環(huán)境中，上面X線射片，感光數(shù)分鐘后，可以放置到顯影液內(nèi)進(jìn)行顯影，觀察到有清楚的影像出現(xiàn)，便可終止顯影，使用清水迅速的漂洗膠片，再放置到定影液內(nèi)進(jìn)行定影。通過清水清洗干凈，晾干，便能進(jìn)行掃描處理，保存。掃描圖象目的條帶的灰度分析處理采用IPP軟件。(4)Real-time PCR檢測卵巢PRLR mRNA的表達(dá)：獲取總RNA提取物后進(jìn)行體外反轉(zhuǎn)與Real-time PCR，在離心管(0.5 ml)中加入以下物質(zhì)，共25 μl，分別為：RNA 3 μl, Oligo(dT) 1 μl，dd H2O(進(jìn)行DEPC)9.5 μl，于70℃處理5 min，放置冰上，繼續(xù)加入5×buffer 5 μl，dNTP(10) 5 μl，核糖核酸抑制因子0.5 μl, M-MLV RT 1 μl。于42℃處理60 min，接著于70℃處理10 min，在離心管(0.2 ml)中加入cDNA與以下物質(zhì)，共20 μl，分別為：0.5 μl濃度為10 pmol/μl引物1，0.5 μl濃度為10 pmol/μl引物2，cDNA 1.5 μl，7.5 μl dd H2O 10 μl SYBR mix(含有TaqE.dNTP.Mg離子的PCR擴(kuò)增體系)，結(jié)果的分析通過相對(duì)定量的2^-ΔΔCT法，樣本目的基因的CT值與GAPDH(樣本看家基因)的CT值相減，計(jì)算出delta CT；再將delta CT與空白組的均值相減，計(jì)算出delta delta CT(-ΔΔCT)。用相對(duì)定量2^-ΔΔCT法分別計(jì)算各個(gè)樣本目的基因的表達(dá)變化。

2 結(jié) 果

2.1 血清PRL、E2、FSH檢測 與正常組相比，模型組血清PRL水平明顯升高，而FSH、E2值降低(q=13.658、18.081、12.707,P均<0.05)，表明造模成功。與模型組比較，不同治療組的E2、FSH顯著增高、PRL下降 (溴隱亭組q=5.928、6.954、9.172，中藥大劑量組q=9.722、7.566、8.486，中藥中劑量組q=11.786、11.461、8.65，中藥小劑量組q=6.321、6.621、8.427，P均<0.05)；各治療組之間相比僅中藥中劑量組E2、FSH上升明顯(與溴隱亭組相比，中藥大劑量組q=1.792、0.612，P>0.05，中藥中劑量組q=5.859、4.506，P<0.05，中藥小劑量組q=0.394、0.3345、0.746，P>0.05；與中藥大劑量組比較，中藥中劑量組q=4.064、3.894，中藥小劑量組q=1.401、0.946，P<0.05；與中藥中劑量組相比，中藥小劑量組q=5.465、4.840，P<0.05)。各治療組間PRL水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組大鼠血清PRL、E2、FSH檢測

注：與正常組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與中藥中劑量組比較，cP<0.05

2.2 Western-blot檢測卵巢STAT蛋白表達(dá)及實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測PRLR mRNA的表達(dá) 與正常組相比，模型組STAT、 PRLR mRNA表達(dá)降低(q=9.131、18.832，P<0.05)。與模型組相比，各治療組STAT、PRLR mRNA表達(dá)顯著增高 (溴隱亭組q=6.087、2.959，中藥大劑量組q=6.087、3.497，中藥中劑量組q=7.877、6.726，中藥低劑量組q=4.834、1.883，P<0.05)；各治療組之間相比中藥中劑量組STAT、PRLR mRNA表達(dá)上升最明顯(與溴隱亭組相比較，q=5.013、9.685，與中藥大劑量組比較，q=1.790、10.223,與中藥低劑量組比較，q=3.044、8.609，P<0.05)。見表2、圖1。

表2 各組大鼠卵巢STAT、PRLR mRNA的表達(dá)

注：與正常組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與中藥中劑量組比較，cP<0.05

注：1.正常組；2.模型組；3.溴隱亭組；4.中藥大劑量組；5.中藥中劑量組；6.中藥低劑量組

3 討 論

催乳素是參與生殖調(diào)節(jié)，維持黃體功能，并與子宮內(nèi)膜容受性密切相關(guān)的重要激素。子宮內(nèi)膜是垂體外PRL合成的重要部位，其通過相關(guān)信號(hào)通路參與子宮內(nèi)膜分化、血管生成、蛻膜退化與重建等[1]。除作用于中樞抑制促性腺激素分泌外，在卵巢水平上，PRL通過自分泌和旁分泌的途徑來調(diào)節(jié)卵巢功能，從而參與人體生殖功能調(diào)節(jié)[2，3]。卵泡液中PRL來源于外周血，與雌激素和孕激素呈負(fù)相關(guān)。適當(dāng)濃度的PRL與卵巢組織表達(dá)PRLR結(jié)合，可上調(diào)顆粒細(xì)胞FSH受體及黃體細(xì)胞的LH受體表達(dá)，促進(jìn)卵泡發(fā)育及排卵，促進(jìn)孕酮的產(chǎn)生，調(diào)節(jié)卵巢激素分泌。研究證明[4]PRL基因或PRLR基因敲除雌性小鼠不育，始基卵泡及排卵少，囊胚少且不著床，雌激素及孕激素水平低下；另外生理量PRL作用于類固醇生成酶可對(duì)黃體功能維持及促進(jìn)孕酮合成起重要作用，HPRL環(huán)境下PRL濃度過高通過短反饋?zhàn)饔么偈瓜虑鹉X釋放多巴胺增多[5]，對(duì)GnRH生成產(chǎn)生抑制作用，垂體Gn的分泌減少，同時(shí)PRL水平過高可造成雌二醇受體、垂體LH受體水平降低以及其敏感性降低，雌激素正反饋機(jī)制障礙，LH 的脈沖分泌減弱，致使排卵障礙[6～8]。另一方面，高水平的PRL可直接抑制卵巢分泌合成雌孕激素[9，10]，并可通過降低卵巢對(duì)促性腺激素反應(yīng)的敏感性而間接抑制雌孕激素分泌，使排卵前雌激素高峰、LH峰不能形成導(dǎo)致排卵障礙。PRLR是PRL行使功能所必需的[11～13]，非妊娠子宮的分泌期子宮內(nèi)膜、蛻膜化的子宮內(nèi)膜基質(zhì)及卵巢是PRLR表達(dá)的3個(gè)重要部位。PRLR與PRL結(jié)合啟動(dòng)JAK2/STAT5信號(hào)傳導(dǎo)通路[14～16]，最終激活反式作用因子STAT5，啟動(dòng)目標(biāo)基因的轉(zhuǎn)錄與復(fù)制，提高相應(yīng)受體的表達(dá)，使卵巢LHR等抗體表達(dá)增加，并可上調(diào)子宮內(nèi)膜ERα、ERβ和 a2巨球蛋白等的表達(dá)，參與子宮內(nèi)膜分化，血管生成，蛻膜退化與重建等，與胚泡植入和妊娠維持緊密相關(guān)。

西醫(yī)研究認(rèn)為[17～19]，HPRL通過直接或間接抑制卵巢功能從而影響生殖內(nèi)分泌功能。Tokutsu等[20]指出當(dāng)PRL的濃度異常升高時(shí)對(duì)卵泡的正常發(fā)育及成熟、排卵均能造成直接的抑制效應(yīng)，并會(huì)影響卵子質(zhì)量。另外，HPRL可對(duì)下丘腦—垂體性腺軸產(chǎn)生抑制作用，抑制GnRH生成使促性腺激素釋放激素的分泌減少脈沖式分泌不良，使E2的正反饋反應(yīng)和LH誘導(dǎo)的排卵峰消失，導(dǎo)致排卵障礙，同時(shí)由于垂體卵泡刺激素(FSH)相對(duì)分泌不足而引起卵泡發(fā)育遲緩，促黃體生成激素分泌減少，臨床主要表現(xiàn)為月經(jīng)失調(diào)、不孕等。研究表明[21]，子宮內(nèi)膜及卵巢組織是PRLR主要表達(dá)部位，PRL/PRLR介導(dǎo)JAK2/STAT5通路能夠介導(dǎo)細(xì)胞生成、分化，也是各類生長因子、細(xì)胞因子傳導(dǎo)信號(hào)的關(guān)鍵途徑，是調(diào)節(jié)卵巢排卵、子宮內(nèi)膜容受性等功能的主要信號(hào)傳導(dǎo)途徑。在PRL/PRLR-JAK2/STAT5信號(hào)傳導(dǎo)通路中，PRL與PRLR結(jié)合具有劑—量反應(yīng)關(guān)系，催乳素濃度過高或過低可使信號(hào)傳導(dǎo)PRL/PRLR-JAK2/STAT5通路級(jí)聯(lián)反應(yīng)降低，可導(dǎo)致竇狀卵泡FSH、LH、PRL受體數(shù)目降低，導(dǎo)致產(chǎn)生孕激素的酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)喪失，甚至孕酮合成完全停止，并可加速卵泡閉鎖，降低FSH介導(dǎo)的粒層細(xì)胞芳香化酶活性，抑制雌激素分泌，導(dǎo)致黃體功能不全，同時(shí)蛻膜PRL分泌受到抑制，引起蛻膜PRL mRNA表達(dá)的明顯降低，使卵巢功能及子宮內(nèi)膜容受性降低。

中醫(yī)在治療高催乳素血癥方面已積累了豐富經(jīng)驗(yàn)，多從月經(jīng)病和溢乳方面探討其病因病機(jī)，根據(jù)臨床癥狀，可歸為“不孕癥”“月經(jīng)過少”“月經(jīng)后期”“月經(jīng)先期”等范疇。中醫(yī)治療結(jié)合中藥藥理研究及辨證論治進(jìn)行中藥配伍，方劑中的君臣佐使各司其職，可在降低催乳素水平的同時(shí)改善卵巢功能，調(diào)節(jié)下丘腦—垂體—卵巢性腺軸激素分泌而達(dá)到治療效果且不良反應(yīng)小。中藥藥理研究發(fā)現(xiàn)[22～24]麥芽中含可抑制PRL分泌的麥角類化合物；芍藥甘草湯在實(shí)驗(yàn)研究中證明為多巴胺受體的興奮劑，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中證實(shí)動(dòng)物腦垂體前葉多巴胺受體能被其刺激，PRL明顯降低；仙靈脾具有性激素樣作用，可以興奮性腺，促進(jìn)卵巢的分泌功能。付麗萍[25]認(rèn)為其病機(jī)關(guān)鍵是肝郁為主，肝腎同源，肝郁化熱，耗傷腎陰，陰損及陽，故應(yīng)以補(bǔ)腎疏肝為治療基本原則，治當(dāng)清肝解郁，活血調(diào)經(jīng)，方用丹梔逍遙散加味合芍藥甘草湯，諸藥合用后共奏氣血調(diào)暢，疏肝理氣之功，補(bǔ)腎和血，使腎中精氣旺盛，內(nèi)分泌功能則正常。梁國新[26]以柴胡疏肝散加減治療高催乳素血癥與溴隱亭組對(duì)照，結(jié)果提示中西藥治療組均可顯著降低PRL，2組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 但中藥遠(yuǎn)期療效明顯優(yōu)于溴隱亭治療組；有學(xué)者[27，28]以疏肝補(bǔ)腎治療高催乳素血癥，結(jié)果提示中藥在降低PRL水平、改善性激事、臨床癥狀等方面療效顯著，復(fù)發(fā)率低，且無任何不良反應(yīng)。通過大量臨床研究驗(yàn)證對(duì)于高催乳素血癥肝腎論治應(yīng)用補(bǔ)腎和血，疏肝理氣類中藥對(duì)降低血PRL有顯著的療效，疏肝補(bǔ)腎調(diào)周方能改善高催乳素大鼠的性激素水平，調(diào)整周期，月經(jīng)恢復(fù)，有利妊娠，療效確切，獲得較為滿意的臨床療效。

李楠等[29]提出疏肝補(bǔ)腎是治療本病的基本大法，運(yùn)用疏肝補(bǔ)腎調(diào)周法改善卵巢功能并促進(jìn)胞宮攝精功能及容受性，自擬中藥柴郁寄生湯，方用柴胡疏肝解郁、川續(xù)斷補(bǔ)益肝腎，調(diào)理沖任，有固本養(yǎng)元之功，兩藥共為君藥，當(dāng)歸補(bǔ)血活血，澤蘭活血調(diào)經(jīng)為臣藥，郁金行氣解郁，活血清心，白芍養(yǎng)血柔肝、香附理氣調(diào)經(jīng)，共助疏肝解郁之功；桑寄生、杜仲補(bǔ)肝腎，固沖任為使藥，以充養(yǎng)肝腎精氣，輔以疏肝，使氣、血、精通行順暢，有養(yǎng)有活，諸藥合用疏肝理氣解郁，使肝氣得疏，腎精得充，陰血得養(yǎng)，胞宮氣血調(diào)暢，全方補(bǔ)腎陰陽同補(bǔ),兼之補(bǔ)肝疏肝調(diào)沖任,進(jìn)而陰平陽秘，達(dá)到改善卵巢功能目的。另有研究指出[30]，疏肝補(bǔ)腎法對(duì)女性生殖功能的調(diào)整是通過腦—腎—沖任—胞宮這條軸線發(fā)揮作用的，和當(dāng)代醫(yī)學(xué)中提出的下丘腦—垂體—卵巢性腺軸所具有的生理機(jī)制類似，進(jìn)而改善卵巢功能。

從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出在高催乳素環(huán)境下PRL/PRLR-JAK2/STAT5信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)因子表達(dá)降低，與此信號(hào)傳導(dǎo)通路相關(guān)的激素酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)降低，抑制下丘腦—垂體—卵巢軸功能及性激素的產(chǎn)生，各治療組通過中藥或西藥治療明顯降低血催乳素水平，改善高催乳素環(huán)境信號(hào)傳導(dǎo)途徑PRL/PRLR-JAK2/STAT5作用的缺乏狀態(tài)，適當(dāng)范圍PRL濃度可通過增強(qiáng)信號(hào)傳導(dǎo)通路PRL/PRLR-JAK2/STAT5中的STAT、PRLR的表達(dá)，從而加強(qiáng)其相關(guān)的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，進(jìn)而促進(jìn)顆粒細(xì)胞FSH及LH與其受體的結(jié)合而使E2及P分泌增加。

從以上結(jié)果可以得出催乳素對(duì)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路PRL/PRLR-JAK2 /STAT5作用的整個(gè)過程中，PRL與PRLR結(jié)合具有劑—量反應(yīng)關(guān)系，當(dāng)其濃度增高，PRL效應(yīng)也會(huì)隨之增加，但若超出一定的范圍后，繼續(xù)提高或繼續(xù)降低PRL的濃度，PRL的效應(yīng)反而會(huì)急劇下降。另外此結(jié)果顯示中藥在改善高催乳素血癥卵巢功能及調(diào)節(jié)下丘腦—垂體—卵巢軸性激素方面明顯優(yōu)于西藥溴隱亭，分析其原因，從中醫(yī)學(xué)角度來說，腎虛精虧，肝失條達(dá)，氣血失和，瘀血內(nèi)阻是高催乳素血癥的基本病因。肝郁及腎、肝精血虧虛，氣血逆亂，沖任失調(diào)，血不循常道下注血海產(chǎn)生月經(jīng)，而隨肝氣上逆乳房為乳汁，即出現(xiàn)閉經(jīng)、溢乳。故而我們?cè)谂R床過程中，對(duì)于高催乳素血癥患者，應(yīng)注重舒肝理氣，藥物可采用柴胡、桑寄生、杜仲、川斷、香附、郁金、白芍、當(dāng)歸等，將有益于降低催乳素的同時(shí)改善信號(hào)傳導(dǎo)通路相關(guān)因子表達(dá)，從而改善卵巢功能?，F(xiàn)代藥理研究證實(shí)[31]，白芍和甘草聯(lián)合應(yīng)用，將使 PRL濃度有效地降低；疏肝、解郁類的藥物可以在垂體前葉發(fā)揮直接效應(yīng)，使釋放的多巴胺受體活性增加, 最終對(duì)PRL的生成產(chǎn)生抑制作用。也有相關(guān)的研究表明[32]，補(bǔ)腎中藥還可對(duì)機(jī)體內(nèi)分泌進(jìn)行調(diào)節(jié)，使下丘腦產(chǎn)生的GnRH水平上升，抑制PRL的產(chǎn)生，垂體對(duì)GnRH敏感性增加，GnRH將促使LH、FSH的濃度上升，有效的促進(jìn)卵巢雌激素及孕激素生成，同時(shí)可提高垂體對(duì) LH-RH 的敏感性、卵巢對(duì) LH 的反應(yīng)性及卵巢受體的形成，并可提高HCG/LH受體功能，促使LH分泌增加。疏肝補(bǔ)腎類的中藥可以調(diào)節(jié)和改善下丘腦—垂體—卵巢性腺軸的功能，加速卵泡發(fā)育、誘導(dǎo)排卵及促使黃體產(chǎn)生，使血漿中P及E2濃度上升，對(duì)機(jī)體內(nèi)分泌進(jìn)行調(diào)節(jié)，降低月經(jīng)不調(diào)等的臨床癥狀發(fā)生。

從本結(jié)果可以看出，柴郁寄生湯通過疏肝補(bǔ)腎法可以調(diào)節(jié)“腎—天癸—沖任—胞宮”生殖軸，提高信號(hào)傳導(dǎo)通路PRL/PRLR-JAK2/STAT5中相關(guān)因子的表達(dá)，從而加強(qiáng)此信號(hào)通路與生殖功能相關(guān)的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，恢復(fù)和改善下丘腦—垂體—卵巢性腺軸的功能，從根源上改善卵巢功能，有效調(diào)節(jié)生殖內(nèi)分泌，因此柴郁寄生湯改善卵巢功能調(diào)節(jié)內(nèi)分泌較嗅隱亭更加有效。目前已有大量臨床研究和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究都證實(shí)了中醫(yī)中藥治療高催乳素血癥的優(yōu)勢(shì)和特色，對(duì)人體生殖內(nèi)分泌及免疫功能的調(diào)節(jié)具有不可替代的作用，但是仍需繼續(xù)深入研究中醫(yī)藥治療高催乳素血癥作用機(jī)制，使其更好地發(fā)揮中醫(yī)學(xué)的特色和優(yōu)勢(shì)，更有效地應(yīng)用于臨床治療[32]。

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Effect ofChaiyujishengdecoction on PRL/PRLR-JAK2-STAT5 signaling pathway in ovarian of rats

ZHANGYunna,JINZhe,SUIConglu,XUCui,XUCai,LINTong,HUANGHaitao,TONGQing.DepartmentofGynecology,DongfangHospitalAffiliatedofBeijingTraditionalChineseMedicineUniversity,Beijing100078,China

Correspondingauthor:JINGZhe,E-mail:jzhe0105@126.com

Objective To observe the effect ofChaiyujishengdecoction on hyperprolactinemia (hPRL) model rat ovarian tissue PRL/PRLR-JAK2-STAT5 signaling pathway and improvement of the ovarian function mechanism.Methods Wistar rats were injected with dopamine receptor blockers to cause a high level of prolactin (60 rats). The model group was randomly divided into model group, bromocriptine group, large dose group, middle dose group, small dose group, and the normal group with 10 rats in each group. Traditional Chinese medicine high dose group’sChaiyujishengdecoction’s amount was 18 g·kg-1·d-1,medium dose group was 9 g·kg-1·d-1, and low dose group was 4.5 g·kg-1·d-1. Each time, the amount of each rat were fed with 2 ml. Bromocriptine group were given bromocriptine 2 mg·kg-1·d-1;model group and normal group according to body mass were given equal volume of distilled water by gavage. Each group administered once daily, continuous administration of 30 d. At the end of treatment, rats were sacrificed, rat ovarian volume were measured; detected serum estradiol (E2), luteinizing generated hormone (FSH), through the method of Western blot and PCR to detect ovarian’s STAT and PRLR expression level to observe the effects of hyperprolactinemia environment on PRL/PRLR-JAK2-STAT5 signaling pathway and ovarian function, and to explore its possible mechanism.Results Compared with the normal group, model group rats’ serum PRL level increased significantly, E2, FSH levels were significantly decreased (P<0.05); ovarian’s STAT and PRLR protein expression level were significantly decreased (P<0.05). Compared with model group,in the treatment group, the serum PRL levels were significantly decreased and serum E2, FSH levels and ovarian’s STAT and PRLR expression levels were significantly increased. Between the different treatment groups, middle dose of traditional Chinese medicine group rats’ serum E2and FSH levels improvement were the most obviously, and ovarian’s STAT and PRLR protein expression was the highest(P<0.05), and differences in the level of PRL had no statistical significance (P>0.05).Conclusion It demonstrated that theChaiyujishengdecoction could improve ovarian function in hyperprolactinemia, its mechanism maybe due to regulate the expression of ovarian PRL/PRLR-JAK2-STAT5 signaling pathway related factors, so as to improve E2, FSH’s level.

Hyperprolactinemia;Chaiyujishengdecoction;Ovarian function decline; PRLR; STAT5; Signal transduction pathway; Rats

北京中醫(yī)藥大學(xué)自主選題資助項(xiàng)目(No.2013-JYBZZ-JS-161)

100078 北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院婦科

金哲，E-mail:jzhe0105@126.com

10.3969 / j.issn.1671-6450.2015.11.025

2015-05-22)